一例豬巴氏桿菌病的診斷與防控

王久紅，孫 琪，于學祥，張丙周，庫旭鋼，范盛先，何啟蓋，3

（1.華中農業大學動物醫學院，湖北 武漢 430070；2.農業微生物學國家重點實驗室，武漢 430070；3.華中農業大學動物疫病診斷中心檢測實驗室，武漢 430070）

豬巴氏桿菌病（Swine pasteurellosis），也稱“豬肺疫”、“鎖喉風”和“腫脖子病”，主要引起豬只咽喉腫脹、呼吸困難、急性敗血癥和肺炎等癥狀。該病廣泛分布于世界各地，是豬的一種常見傳染病，發病率達40%，死亡率在5%左右，給養豬業造成巨大經濟損失[1]。多殺性巴氏桿菌屬于豬呼吸道內的一種常見條件性致病菌[2]，根據其莢膜抗原可以分為5 種血清型，即A、B、D、E 和F 型。目前國內豬群中主要流行的是A 型和D 型，因其能產生毒素，又被稱為產毒性多殺性巴氏桿菌。該病與氣候變化、飼養管理不當等應激因素緊密相關[3]。本文就一例地方黑豬感染巴氏桿菌所致發病開展了一系列的診斷，并有針對性地提出了治療和防控措施，效果顯著。可為豬場巴氏桿菌病的診斷與防控提供參考。

1 發病情況

2019 年1 月，湖北省某地方黑豬豬場，肥育豬只出現精神極度萎靡、呼吸困難、張口伸舌、呈犬坐姿勢，后期出現急性死亡等呼吸道疾病癥狀。到該豬場進行實地調查，該場發病豬只主要集中于肥育后期，其豬舍環境較差，刺激性氣味較重，氨氣含量嚴重超標，且養戶未及時將發病豬只與無癥狀豬只隔離。挑選具有明顯癥狀的3 頭病（死）豬只解剖觀察，發現其口腔及氣管內充滿泡沫樣分泌物（圖1A，圖1B）；肺臟間質水腫、增寬（圖1C，圖1D），其它臟器未見明顯異常病變。根據場內情況、臨床癥狀和病理剖檢，初步懷疑上述癥狀是由呼吸道細菌感染所致，詳細了解該場呼吸道病原感染情況還有賴于實驗室診斷。

圖1 臨床剖檢結果

2 實驗室診斷

取完整的氣管和肺臟進行細菌分離，隨后采集肺臟、淋巴結和扁桃體等組織，冷藏保存與平皿一起，迅速帶回華中農業大學動物疫病診斷中心進行檢測。

2.1 病毒性病原檢測

將3 頭病死豬只（分別編號1、2、3）對應編號的肺臟、淋巴結和扁桃體等組織合并，加入滅菌PBS，于勻漿器進行研磨，反復凍融3 次，離心取上清液，利用病毒核酸提取試劑盒進行核酸提取，使用華中農業大學動物疫病診斷中心檢測實驗室建立的PCR 方法進行檢測，所用引物由上海生工生物科技有限公司合成，詳細序列見表1。

表1 PCR 引物序列

檢測結果顯示，PRRSV（藍耳病病毒）、PCV2（圓環病毒2 型）和PRV（偽狂犬病病毒）等病毒性病原檢測結果均為陰性（圖2A，圖2B）。

圖2 病料PCR、RT-PCR 擴增結果

2.2 細菌分離鑒定

取完整的肺臟樣品進行細菌分離鑒定，在加有血清和NAD 的TSA 平皿上，37 ℃培養24 h，觀察分離細菌的菌落形態（圖3A，圖3B，圖3C），根據菌落形態特點初步懷疑其為多殺性巴氏桿菌，并選取疑似致病菌分離純化培養。使用煮沸法制備模板，采用PCR 方法檢測鏈球菌（SS）[4]、副豬嗜血桿菌（HPS）、胸膜肺炎放線桿菌（APP）、支氣管敗血波氏桿菌（Bb）[5]、多殺性巴氏桿菌（Pm）[6]（引物由上海生工生物科技有限公司合成）。

圖3 細菌分離菌落形態

細菌檢測結果顯示，該場僅檢出多殺性巴氏桿菌（圖4），并利用多重PCR[7]方法確定了其血清型，為A 型（圖5）。

圖4 細菌樣品mPCR 擴增結果

圖5 細菌模板巴氏桿菌分型PCR 擴增結果

結合豬場的現場調查、病理剖檢及實驗室診斷，確診該場是由A 型產毒素型多殺性巴氏桿菌感染引起的豬只發病和死亡。為控制該病在豬場內的進一步發展，我們利用紙片擴散法對分離的A 型多殺性巴氏桿菌進行了藥敏試驗。

結果顯示：該菌株對大部分抗生素敏感，尤其是恩諾沙星、環丙沙星等沙星類抗生素，而鏈霉素、慶大霉素等藥物對其抑制效果不明顯，在本試驗中該菌僅對林可霉素產生耐藥性。詳情見表2。

表2 藥敏試驗結果

3 防控方案

根據診斷情況及豬場的具體問題，給出如下幾方面建議。

（1）針對保育及肥育豬群實施拌料給藥，推薦使用恩諾沙星連續拌料5 d，停藥7 d 后使用環丙沙星連續拌料5 d，均按說明書劑量使用。

（2）產房哺乳仔豬在斷奶前可使用恩諾沙星飲水連續給藥5 d，用于保健和預防。

（3）針對發病的保育、肥育及母豬群，可選擇免疫豬肺疫活疫苗或自家苗（由有資質的科研院所或企業配制）。由于是地方豬種，為避免出現副反應，可先免疫5 頭母豬和10 頭斷奶仔豬觀察效果，7 d 后如無副反應，方可全群免疫，需注意一豬一針頭。

（4）生產管理。

①實行全進全出生產模式，禁止混群，對發病豬只要及時隔離，并對病死豬進行無害化處理。

②加強消毒，每批次豬群轉移后充分消毒并空欄5 d。

③加大空氣流通，降低豬舍內氨氣含量，改善欄舍空氣質量。

4 討論與結論

采取上述防控方案后，對該場進行跟蹤回訪，每周統計新發病例及轉歸病例，評價方案效果，如有效，持續使用該方案，如效果不理想也可及時發現問題。1 個月后，該場豬只病情恢復穩定，可見此防控方案確實可行，具有一定的參考和指導意義。

從本案例的診斷結果來看，豬細菌性呼吸道疾病仍對我國豬場影響極大，需加強綜合防控。不當的飼養管理是其發生的一個重要因素，本案例中，通風不良、衛生條件差給致病菌大量增殖提供了條件，且發病豬只與無癥狀豬只未進行隔離，加劇了病原的傳播，故豬場應加強飼養管理，豬舍內要合理通風換氣，搞好環境衛生。現階段，非洲豬瘟給我國養豬業造成了極大的損失，豬場應提高生物安全防控意識，及時隔離發病豬只，并做好消毒工作，在防控非洲豬瘟的同時，加強對PRRSV、PCV2 和PRV 等病毒性和細菌性病原的防控，凈化這些病原，提高豬場效益。據場主介紹，該地方黑豬較少使用抗生素和疫苗，從藥敏試驗結果也可看出，該菌株對大部分抗生素高度敏感，便于細菌性疾病的快速扼制，減少經濟損失。抗生素的謹慎使用有利于養殖戶保持豬場生產效益的同時，也有利于國家2020 年全面實現“無抗”養殖政策的實施。

本案例經過實地調查、臨床觀察、病理剖檢和實驗室診斷的有效結合，做出了合理的綜合診斷。并根據檢測結果，制定了一系列針對性的治療及防控措施，通過連續跟蹤回訪，顯示該措施切實可行，行之有效，這為豬場多殺性巴氏桿菌病的診斷和防控提供了基本原則和數據上的支持。