江蘇省海安市２０１９年一季度豬瘟抗體檢測結果分析

程素平 董飛 王秋生 林發(fā)根 柳麗

摘要：于2019年4月份采取雙隨機的抽樣方法對海安市10個鎮(zhèn)5個規(guī)模豬場、50個散養(yǎng)戶采集血樣共400份進行豬瘟抗體檢測，檢測結果表明，海安市豬瘟疫苗免疫抗體陽性率平均為91.25%，平均阻斷率為74.89%;區(qū)鎮(zhèn)的抗體陽性率平均為97.00%，平均阻斷率為79.81%;而規(guī)模豬場的抗體平均陽性率74.00%，平均阻斷率65.07%?？贵w檢測對豬瘟免疫效果評價及免疫程序的制定有重要指導意義，對調整優(yōu)化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關重要。此次檢測結果表明，海安市除2個“先打后補”的場免疫效果略差外，其他場和由村防員統(tǒng)一組織防疫的豬場免疫抗體陽性率均較高，良好的防疫質量在重大動物疫病防控中有不可替代的作用。

關鍵詞：豬瘟;阻斷率;免疫程序;海安市

中圖分類號：S858.28? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2019）10-0010-03

豬瘟是由豬瘟病毒引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。以發(fā)病急、高熱稽留和毛細血管壁變性引起廣泛出血、壞死等變化為特征，是一種傳染性強、病死率高的烈性傳染病，對養(yǎng)豬業(yè)危害極大。雖采取了免疫等防疫措施，降低了豬瘟的感染率和發(fā)病率;但因疫苗接種量大、面廣，防疫密度越來越高，在免疫劑量加大和免疫次數增加的情況下，并沒有使豬瘟得到徹底控制。江蘇省海安市目前雖無豬瘟大面積流行，但散發(fā)、慢性、非典型豬瘟時有發(fā)生，為及時掌握全市部分規(guī)模豬場和散養(yǎng)戶的重大動物疫病免疫情況，同時對各個鄉(xiāng)鎮(zhèn)和村防員免疫效果進行考核，于2019年4月采取雙隨機的抽樣方法對全市10個鎮(zhèn)5個規(guī)模豬場、50個散養(yǎng)戶采集血樣共400份，用酶聯(lián)免疫吸附試驗分別進行了豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病的抗體檢測。現將豬瘟檢測結果報告如下。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 被檢血清樣品? 從2018年12月20日到2019年2月10日免疫記錄中抽取2名監(jiān)管員，每人抽4戶。如果抽樣的養(yǎng)殖戶該批生豬已出售或緩防的，順延到下一個農戶;在做好生物安全的前提下，每頭豬前腔靜脈采血3～5 mL，每鎮(zhèn)30份樣品，全市共采集10個鎮(zhèn)50個養(yǎng)豬場（戶）和5個“先打后補”的規(guī)模豬場，因當前為防控非洲豬瘟的關鍵時期，為避免因采樣等因素導致豬群發(fā)病，規(guī)模場的采樣均由豬場內技術人員自己采樣并送至市獸醫(yī)站化驗室。詳細記錄每份血液樣品的來源、免疫程序、疫苗生產廠家、批號、接種劑量等有關信息，其中規(guī)模豬場血樣100份、散養(yǎng)戶血樣300份，常規(guī)分離血清并編號，-20 ℃冷凍保存。

1.1.2? 檢測試劑和主要儀器? 豬瘟抗體阻斷ELISA檢測試劑盒（IDEXX，批號：M301）購自上海賽嘉生物科技有限公司，酶標儀RT-6000、Eppendorf移液器等其他儀器和耗材為本實驗室自備。

1.2? 檢測方法

1.2.1? 檢測原理及方法? 利用阻斷ELISA原理檢測豬血清中豬瘟病毒抗體，如果被檢樣品中存在豬瘟病毒抗體，就會阻斷辣根過氧化物酶標記的抗豬瘟病毒的單克隆抗體。單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的結合通過辣根過氧化物酶與底物的顯色程度進行判定，用酶標儀在單波長450 nm或雙波長450 nm 與650 nm測定該反應體系的吸光度。當被檢樣品中含有豬瘟病毒抗體（陽性結果）時，顯色就會變淺，當被檢樣品中不含有豬瘟病毒抗體（陰性結果）時，顯色就會變深。樣本的阻斷率可以通過450 nm波長樣本吸光度與陰性對照吸光度的比值來確定。試驗嚴格按照豬瘟抗體檢測試劑盒說明書操作。

1.2.2? 判定標準? 在陰性對照的OD450>0.5，陽性對照血清的阻斷率>50%，試驗結果成立的前提下，被檢樣品的阻斷率≥40%時判為陽性，被檢樣品的阻斷率<40%時判為陰性。

2? 結果與分析

2.1? 海安市各區(qū)鎮(zhèn)和“先打后補”規(guī)模場的豬瘟免疫抗體水平

檢測結果（表1）表明，2019年第一季度海安市豬瘟抗體陽性率91.25%，平均阻斷率74.89%。5個“先打后補”的規(guī)模豬場豬瘟抗體平均陽性率為74.00%、平均阻斷率為65.07%，10個鎮(zhèn)50個養(yǎng)殖場（戶）的豬瘟抗體陽性率平均為97.00%、平均阻斷率為79.81%，均高于國家規(guī)定的70%的標準，表明海安市豬瘟防疫情況較好，免疫效果達到較高水平。

2.2? 五個“先打后補”規(guī)模豬場的豬瘟免疫抗體水平

規(guī)模豬場的豬瘟免疫抗體水平有較大差異，有兩個場平均陽性率低于國家規(guī)定的70%標準（表2）。

2.3? 海安市10個鎮(zhèn)的豬瘟免疫抗體水平

海安市10個鎮(zhèn)的豬瘟免疫抗體水平均較好（表3），僅一個區(qū)鎮(zhèn)的抗體陽性率低于90%，其余均高于90%，且平均阻斷率也達到79.81%，說明海安市的豬瘟免疫水平在全體監(jiān)管員和防疫員的共同努力下取得了較好的效果，為重大動物疫病的防控打下了堅實的基礎。

3? 討論

豬瘟是我國中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）優(yōu)先凈化的12種動物疫病之一，海安市通過政府購買服務，防疫員包村包戶，每年進行二次重大動物疫病普免、夏季集中補免和消毒滅源三大行動，同時監(jiān)督規(guī)模豬場按本場疫苗免疫程序進行免疫并逐步完善綜合防控措施，使豬瘟得到一定程度的控制，因此多年來未曾見疫病大流行。

抗體檢測是評估豬瘟疫苗的免疫效果，制定科學免疫程序的重要手段，本次檢測采用美國IDEXX公司生產的豬瘟病毒抗體檢測試劑盒，該試劑盒被廣泛應用于檢測豬瘟抗體，評估豬場的免疫狀況，該試劑盒把阻斷率≥40%作為豬瘟疫苗抗體陽性的判斷標準，但據南文金等[1]報道，該試劑盒檢測豬瘟疫苗抗體的阻斷率達到50%時，豬瘟疫苗抗體水平相當于中和抗體滴度1∶32，此水平的中和抗體水平對豬群具有保護力，實際生產中要以阻斷率≥50%且抗體合格率在90%以上才能達到比較理想的狀態(tài)。阻斷率大于40%小于50%只代表抗體陽性，不代表中和抗體能抵抗豬瘟野毒侵襲。

檢測結果表明，2019年第一季度海安市豬瘟疫苗免疫抗體陽性率平均為91.25%，平均阻斷率為74.89%。區(qū)鎮(zhèn)的抗體陽性率平均為97.00%，平均阻斷率為79.81%;而規(guī)模豬場的抗體平均陽性率74.00%，平均阻斷率65.07%，海安市重大動物疫病的防疫工作是在監(jiān)管員的監(jiān)督下，防疫員領取政府統(tǒng)一招標采購的疫苗（全程冷鏈運輸）上門給養(yǎng)豬戶進行防疫并詳細記錄免疫時間、疫苗批號、生產廠家等信息，市重大動物疫病指揮部定期或不定期進行檢查，經過近幾年的經驗總結，全市防疫密度和防疫質量有了大幅提高，也多次得到省、市表揚。此次檢測結果也表明海安市豬瘟免疫效果較好，僅一個鄉(xiāng)鎮(zhèn)低于90%，并且阻斷率也在70%以上，與段正贏等[2]報道散養(yǎng)戶的飼養(yǎng)管理水平較低，免疫空白、免疫接種不當，導致接種失敗或對疫苗接種工作不重視不一致。

本次采樣的5個“先打后補”的規(guī)模豬場的樣品均采自商品代群，雖然平均抗體陽性率達到74.00%，稍高于國家規(guī)定的70%的標準，但有二個場低于70%，一個場正好是70%。因當前為防控非洲豬瘟的關鍵時期，為避免因采樣等因素導致豬群發(fā)病，規(guī)模場的采樣均由豬場內技術人員自己采樣并送至市獸醫(yī)站化驗室。經分析免疫程序等因素，A場保定人員感覺30 kg的豬比較好保定，采樣人員也沒有詳細詢問免疫時間，二免與采樣時間僅間隔20 d，與南文金[1]等報道二次免疫接種后23 d采集的樣品豬瘟疫苗抗體再次降低是一致的;而B場豬群采樣時，豬體重在90 kg左右，距離二免的免疫時間超過3個月，抗體合格率正好為70.00%，平均阻斷率只有60.73%，說明豬瘟抗體在免疫三個月后開始下降;C場豬瘟抗體陽性率和阻斷率均最低，二免時間距采樣間隔時間正好為一個月，按照常規(guī)應當是陽性率最高的時間，該場不高反低，可能與母源抗體的高低、免疫程序、首免時間過早、疫苗質量和操作程序有關，建議該豬場仔細分析原因，采購質量較好的疫苗，結合抗體監(jiān)測的結果，調整免疫程序科學免疫，以減少疫病的發(fā)生，提高豬場的經濟效益。規(guī)模化豬場需根據初生仔豬母源抗體水平及消長規(guī)律確定首免日齡。不同來源的仔豬根據母源抗體的高低來制定適合本場豬群豬瘟的免疫程序，不能一刀切[3]。

實驗室免疫抗體檢測僅僅是一種手段，一次檢測結果只能說明某段時間內豬群的免疫狀況，通過此次免疫監(jiān)測，尤其是C規(guī)模豬場的首免時間可能不合適，造成仔豬或保育豬群免疫效果不佳，進而出現免疫空檔期，一般而言，母源抗體的被動免疫對新生仔豬十分重要，但與此同時也可能給疫苗接種帶來一定的影響，特別是干擾疫苗的首次免疫效果，母源抗體效價較高時，體內未消失的母源抗體會中和一部分接種的弱毒疫苗并阻礙疫苗毒的復制，影響仔豬主動免疫的產生，豬場應根據母源抗體的消長規(guī)律或根據連續(xù)監(jiān)測的結果，確定和調整最佳首免時間，通過免疫監(jiān)測發(fā)現豬群不同生長階段是否出現免疫空檔期，及時加強免疫，并發(fā)現某些疫病的亞臨床癥狀，早期控制疫病，降低傳染病發(fā)生的幾率與風險。

豬瘟免疫是常規(guī)免疫，導致免疫失敗的原因有：①免疫程序不合理。有些豬場也包括部分規(guī)模豬場照搬其他豬場免疫程序，不符合本場實際情況，導致免疫失敗;仔豬首免日齡每個場都不一樣，應根據本場母源抗體水平確定首免日齡;②豬場免疫抑制病的干擾，如高致病性豬藍耳病、偽狂犬、圓環(huán)病毒2型等均會對豬體造成免疫抑制，機體免疫應答力下降，影響豬瘟免疫效果;③霉菌毒素也對豬體的免疫力有影響;④疫苗質量問題。養(yǎng)殖場在選擇疫苗時不能只關注價格，也要關注疫苗的質量，如抗原含量，免疫維持的時間等;⑤規(guī)模豬場在選擇防疫人員時要注重人員素質，防止規(guī)模場因防疫數量較多，如若待遇達不到一定的要求可導致防疫員有厭戰(zhàn)情緒而導致防疫質量下降，或在規(guī)定的加免時間內不能及時加免導致免疫失敗。

養(yǎng)豬場應同時注意以下幾個方面的工作：一是加強飼養(yǎng)管理和豬場環(huán)境控制;二是保證動物營養(yǎng)均衡;三是選擇合適、質量過關的疫苗與藥物，制訂合理的免疫和用藥方案，充分發(fā)揮疫苗及藥物的作用，做好新老疫病的控制和預防工作;四是實行嚴格的生物安全措施，特別是當前處在防控非洲豬瘟的關鍵時刻，加強豬場衛(wèi)生消毒，嚴格把關豬場引種和病死豬無害化處理;五是豬場特別是規(guī)?；i場要做好疫病的定期診斷與監(jiān)測，有針對性采取防控措施。

抗體檢測對豬瘟免疫效果評價及免疫程序的制定有重要指導意義，對調整優(yōu)化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關重要。此次檢測結果表明，海安市除2個“先打后補”的場免疫效果略差外，其他場和由村防員統(tǒng)一組織防疫的豬場免疫抗體陽性率均較高，良好的防疫質量在重大動物疫病防控中有不可替代的作用。海安市每年組織4次集中監(jiān)測，既是對村防員進行考核，也對規(guī)模場的防疫有促進作用，及時掌握豬瘟群體免疫力，對豬瘟的預防、控制和凈化具有積極的推動作用，同時對抗體不合格的豬場分析原因，適時補免，結合非洲豬瘟防控，對養(yǎng)殖場戶宣傳生物安全的重要性，督促養(yǎng)殖戶加強飼養(yǎng)管理，搞好綜合防控工作，提高豬群的抵抗力，保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。

參考文獻：

[1] 南文金，黃健強，胡鴻惠，等.某規(guī)模化豬場豬瘟抗體水平的監(jiān)測[J].動物醫(yī)學進展，2016，37（3）：120-123.

[2] 段正贏，周志忠，周丹娜，等.豬瘟疫苗免疫抗體檢測與分析[J].養(yǎng)豬，2018（4）：105-106.

[3] 程素平，丁永龍，張小彬，等.不同來源的仔豬豬瘟母源抗體檢測結果比較[J].畜牧與獸醫(yī)，2015，47（4）：141-142.