生精障礙患者227例遺傳學分析

李 靜，畢亮亮，黃巖杰，楊曉青，梅曉峰，李金剛，白夢刻

河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院兒科實驗室 鄭州 450000

不孕夫婦中男性不育的占比為30%～40%，其中生精障礙(少精、弱精和無精)是導致男性不育和生育力下降的主要原因[1-2]，有10%～15%的男性不育與遺傳因素有關(guān)，染色體和Y染色體微缺失是主要的遺傳因素[3]。本研究回顧性地分析了227例生精障礙患者的染色體核型和Y染色體上精子發(fā)生調(diào)控基因無精子因子(azoospermia factor，AZF)微缺失檢測結(jié)果，并結(jié)合臨床資料，探討遺傳學檢查在生精障礙患者診斷中的意義。

1 對象與方法

1.1研究對象2011年1月至2017年1月以不育為主訴來河南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院就診的男性患者，年齡在21～48歲。經(jīng)臨床和實驗室檢查排除精道梗阻、泌尿生殖道感染、隱睪、精索靜脈曲張等因素引起的生精障礙。其中有227例進行了染色體G顯帶分析和AZF 8個位點檢測。

1.2染色體核型分析用肝素鈉管抽取2 mL外周血，進行外周血淋巴細胞培養(yǎng)。常規(guī)進行染色體G顯帶分析，每例計數(shù)分析30個核型，疑為嵌合體者加倍分析，必要時增加C顯帶分析，如：qh+、qh-、inv(9)。核型描述參照《人類細胞遺傳學國際命名體制2009》。

1.3AZF微缺失檢測試劑購自北京愛普益生物科技有限公司。以AZF的8個序列標志位點(sequence tagged sites，STS)為靶序列。STS位點包括AZFa sY84、sY86，AZFb sY127、sY134，AZFc sY254、sY255，AZFd sY145、sY152。取EDTA抗凝全血200 μL置于滅菌管中，提取DNA后備檢。PCR反應體系為25 μL，包括Mix 22 μL、反應酶1 μL、DNA模板2 μL，振蕩混勻并放入PCR擴增儀。擴增條件： 95 ℃5 min； 94 ℃20 s，57 ℃ 20 s，72 ℃ 1 min，4個循環(huán)； 94 ℃ 15 s，56 ℃ 1 min，33個循環(huán)。反應結(jié)束后分析圖像。Baseline的Start值設(shè)在3～10、End值設(shè)在10～15。sY127、sY134、sY152、sY254、sY255位點無明顯S型擴增曲線或Ct>24判定為缺失，sY84、sY86、sY145位點無明顯S型擴增曲線或Ct>28判定為缺失。