MG53蛋白聯(lián)合hUC-MSCs移植對阿爾茲海默病小鼠行為和情緒失調(diào)的改善作用

周馨魁，馬珊珊，黃團結(jié)，李 喆，崔淵博，王亞蘋，劉騰飛，周建康，楊 波，關(guān)方霞1，

1) 鄭州大學生命科學學院 鄭州 450001 2) 鄭州大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科 鄭州 450052

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為學習記憶能力受損、淀粉樣蛋白沉積和Tau蛋白纏結(jié)[1]。研究[2]證實人臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)移植是一種有效的治療AD的方法，但是AD患者腦內(nèi)通常處于嚴重的氧化應(yīng)激狀態(tài)，并不適合外源hUC-MSCs的存活。我們課題組的前期研究[2-3]顯示MG53蛋白對體外培養(yǎng)的hUC-MSCs和小鼠海馬神經(jīng)元(HT22)的氧化損傷均具有保護作用。此外，MG53還可以促進hUC-MSCs在AD小鼠腦內(nèi)的遷移，調(diào)控衰老相關(guān)基因的表達[4]。但是MG53對腦內(nèi)氧化應(yīng)激條件下的hUC-MSCs和神經(jīng)元是否具有保護作用還不清楚。核因子E2相關(guān)因子2(NF-E2-related factor 2，Nrf2)通路是經(jīng)典的氧化應(yīng)激調(diào)控通路，我們前期的研究發(fā)現(xiàn)AD小鼠腦內(nèi)Nrf2通路處于抑制狀態(tài)。本研究擬用MG53聯(lián)合hUC-MSCs移植治療AD小鼠，觀察小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元數(shù)量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、Nrf2通路相關(guān)蛋白(Nrf2、Keap-1和NQO1蛋白)的表達，以及認知、焦慮等相關(guān)行為學的變化，為AD的防治提供思路。

1 材料與方法

1.1動物來源及主要儀器、試劑清潔級 3月齡APP695V717I 轉(zhuǎn)基因小鼠購自中國協(xié)和醫(yī)科大學動物研究所；hUC-MSCs由本實驗室分離培養(yǎng)；rhMG53蛋白由美國俄亥俄州立大學麻建杰教授贈送；CO2恒溫培養(yǎng)箱(日本三洋公司)，酶標儀(上海圣荷西醫(yī)療用品有限公司)，熒光倒置顯微鏡、冰凍切片機(萊卡公司)，瓊脂糖凝膠電泳儀(北京六一生物科技有限公司)；DMEM-F12培養(yǎng)基、PBS、胎牛血清(美國 BI公司)，硫磺素S、二氫乙啶(dihydroethidium, DHE)(美國Sigma公司)，胰蛋白酶、青鏈霉素混合液(上海碧云天生物技術(shù)研究所)；……