重組人源抗血管內皮生長因子單克隆抗體的制備及鑒定

董 雪,徐雨昕,郭 晶,龔忠闊,夏霖亞,殷玉和,吳叢梅

( 1.長春工業大學 化學與生命科學學院,長春 130012；2.東北農業大學 生命科學學院,哈爾濱 150030)

人源抗血管內皮生長因子(VEGF)通過與血管內皮細胞相應的受體結合,刺激血管內皮細胞的增殖和遷移,誘導形成新生血管,使腫瘤持續生長[1-4].抗VEGF單克隆抗體通過中和VEGF因子,阻斷其與內皮細胞表面VEGF受體結合,從而抑制內皮細胞的增殖與遷移[5-7].因此,抗VEGF抗體成為抗腫瘤血管治療的重要研究方向.這類新藥可通過阻斷微血管的形成和生長達到抑制腫瘤細胞生長或維持腫瘤處于休眠期的目的.目前VEGF抗體藥物對肺癌、乳腺癌和結腸癌等血管生成具有較好的阻斷作用[8],作為新藥研發的主要靶標已引起人們廣泛關注[9-10].

本文先獲得人源化抗VEGF抗體可變區蛋白序列,通過密碼子優化得到其DNA序列,再與人源抗化VEGF抗體恒定區DNA序列連接,并在其前端設計信號肽,得到多條人源化抗VEGF抗體重鏈輕鏈序列,其中一對表達量和生物效應較好,可進一步擴大培養.

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

HEK-293,HEK-293F,C6細胞由長春工業大學細胞生物實驗室保存,常規培養;pcDNA3.1+質粒由長春工業大學細胞生物實驗室保存;質粒大提試劑盒(北京天根生化科技有限公司)；轉染試劑(美國 Polysciences公司)；內切酶(大連Tokava生物技術公司)；辣根過氧化物酶(HRP)兔抗人IgG(北京索萊寶公司)；標準品(美國Roche公司)；培養基,血清(美國Gibco公司).

酶標儀(model680型美國BIO-RAD公司)；Transwell小室(美國Corning公司).

1.2 方 法

1.2.1 HEK-293F瞬時轉染 HEK-293F細胞以0.8×106個/mL接種,123 mL懸……