RP-HPLC測定鹽酸氟西汀有關物質的方法學研究

張 婷 郭穎昕 劉彩鳳 李德祥

上海上藥中西制藥有限公司 （上海 201800）

鹽酸氟西汀又名百憂解，即（±）-N-甲基-3-苯基-3（4-三氟甲基苯氧基）丙胺鹽酸鹽（C17H18F3NO·HCl），其化學結構如圖1所示。

圖1 鹽酸氟西汀的化學結構

鹽酸氟西汀是一種具有選擇性的神經遞質抑制劑（SSRI），其對于神經遞質 5-羥色胺（5-HT）的存在十分敏感，能夠準確地抑制神經元細胞興奮并從突觸間隙中捕捉攝取5-HT，這極有效地增加了間隙中神經遞質的數量，繼而延長和增加了5-羥色胺的作用，從而達到改善、糾正情感狀態，治療抑郁性精神障礙的目的。鹽酸氟西汀的臨床療效與三環類抗抑郁藥相當，但不良反應輕微，安全性高，服用方便，深受醫生和患者的青睞。

為了進一步控制上海上藥中西醫制藥有限公司產品鹽酸氟西汀膠囊的質量，參考國內外相關文獻材料，系統地研究分析了鹽酸氟西汀有關物質的測定，并采用C8色譜柱、利用反相高效液相色譜建立了鹽酸氟西汀有關物質的測定方法。實驗結果證實該方法具有良好的專屬性、耐用性、穩定性，以及較高的靈敏度，進一步說明該法適用于鹽酸氟西汀產品有關物質項的檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器

SOTAX溶出試驗儀，香港力揚企業有限公司；AL104電子天平、S20精密pH計，梅特勒-托利多國際貿易有限公司；Agilent 1200，1260型全自動高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司。

1.2 試劑

三乙胺、四氫呋喃，色譜純，國藥集團化學試劑有限公司；甲醇，色譜純，賽默飛世爾科技公司；磷酸，分析純，太倉滬試試劑有限公司。

1.3 標準品

實驗過程中所使用的標準品信息如表1所示。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件

用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent Zorbax Eclipse Plus C8，4.6 mm×250mm×5μm 或效能相當的色譜柱）；以三乙胺緩沖溶液（取三乙胺10 mL，加水980 mL，搖勻，加磷酸適量調節pH至6.0，用水稀釋到 1000mL）-甲醇-四氫呋喃（體積比為 62∶8∶30 ）為流動相，等度洗脫；洗脫流速為1.0 mL/min；柱溫箱溫度為25℃；紫外線檢測波長為215 nm。

表1 標準品信息

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 系統適用性溶液的制備

取鹽酸氟西汀約22 mg，置于具塞試管中，加0.5 mol/L硫酸溶液10 mL，85℃水浴3 h，放冷，此溶液中含有鹽酸氟西汀雜質Ⅰ和雜質Ⅱ；取上述溶液0.4 mL，置于25 mL容量瓶中，分別取鹽酸氟西汀約28 mg與雜質Ⅳ對照品約1 mg，置于上述25 mL容量瓶中，加入流動相溶解并稀釋到刻度，即得系統適用性溶液。

1.4.2.2 供試品溶液的制備

取本品內容物適量 （約相當于氟西汀50 mg），置于25 mL量瓶中，加入適量流動相，充分振搖并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

1.4.2.3 對照溶液的制備

精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL置于100 mL量瓶中，加入流動相，稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

1.4.2.4 靈敏度溶液的制備

精密量取對照溶液25 mL，置于100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為靈敏度溶液。

1.4.2.5 測定方法

分別取系統適用性溶液和靈敏度溶液各10μL注入高效液相色譜儀，調節檢測靈敏度使主成分峰高的信噪比大于10，并考察分離度。再取對照溶液與供試品溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍，采用自身對照法計算供試品中雜質含量。

2 結果與討論

2.1 系統適用性試驗

取系統適用性溶液10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結果如表3所示。在有關物質色譜條件下，理論板數按氟西汀計為3093，雜質Ⅰ、雜質Ⅳ、氟西汀、雜質Ⅱ峰間的分離度分別為26.12，1.54和22.22，說明該法色譜條件分離效果良好。

表2 鹽酸氟西汀有關物質系統適用性試驗結果

2.2 檢測限（LOD）和定量限（LOQ）試驗

精密稱取0.0223 g鹽酸氟西汀原料置于200 mL量瓶中，加入流動相溶解稀釋到刻度，搖勻，作為鹽酸氟西汀貯備液。稱取約5 mg雜質Ⅳ置于25 mL量瓶中，加入流動相溶解稀釋到刻度，搖勻，作為雜質Ⅳ貯備液。繼續用流動相稀釋成一系列質量濃度的溶液，搖勻，精密量取10μL，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，以主成分峰的峰高與基線噪音的信噪比約為10時的質量濃度為定量限；將定量限質量濃度稀釋3倍后，此時儀器的信噪比約為3，為檢測限。

表3 鹽酸氟西汀有關物質檢測限與定量限ng/mL

由表3可以看出，在上述色譜條件下，鹽酸氟西汀的檢測限為1.003 5 ng/mL，定量限為3.4565 ng/mL，鹽酸氟西汀雜質IV的檢測限為2.5600 ng/mL，定量限為7.4400 ng/mL。

2.3 專屬性試驗

通過利用高溫、45000 lx照射、氧化、強酸、強堿等嚴苛條件對供試樣品進行加速破壞，以研究可能存在的分解途徑及產物，同時考察方法的專屬性。

取本品內容物適量，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加入適量流動相，充分振搖，加入流動相稀釋到刻度，搖勻，濾過，取續濾液適量即得未破壞供試品溶液。在上述色譜條件下，精密量取各破壞條件下的溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結果如表4所示。

表4 鹽酸氟西汀有關物質專屬性試驗結果

由表4可知，各破壞條件下產生的雜質極其微量，主峰純度幾乎不受干擾，可見該色譜條件專屬性較強。

再取空白輔料適量，采用上述樣品專屬性試驗方法，對空白輔料用45000lx照射、高溫、強酸、強堿和氧化進行一系列加速破壞，處理后的樣品取10μL續濾液注入液相色譜儀。結果表明，在該條件下，輔料不干擾樣品的檢查。

2.4 線性試驗

2.4.1 鹽酸氟西汀

取鹽酸氟西汀原料0.0538 g，置于25 mL容量瓶中，用流動相稀釋制成一系列質量濃度的溶液，在有關物質色譜條件下，分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸，結果如圖2所示。根據上述試驗結果，在1.7216～6.8864μg/mL范圍內，鹽酸氟西汀質量濃度與峰面積呈正相關，相關系數R2=0.9998，表明相關性很好。

圖2 鹽酸氟西汀線性回歸曲線

2.4.2. 雜質Ⅳ

精密稱取雜質Ⅳ約5 mg，置于20 mL量瓶中，用流動相稀釋制成一系列質量濃度的溶液，在有關物質色譜條件下，分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按上述同法進行線性回歸，結果如圖3所示，其回歸方程為y=23018x+2.8238，說明在16～48μg/mL范圍內，鹽酸氟西汀質量濃度與峰面積線性關系良好。

圖3 雜質Ⅳ線性回歸曲線圖

2.5 溶液穩定性試驗

取本品內容物適量(約相當于氟西汀50 mg)，按有關物質測定法制備供試品溶液、對照溶液，在室溫條件下分別放置0,4,7,10,13,16,19及22 h，在各時間點分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，觀察供試品溶液的穩定性，結果如表5所示。

表5 鹽酸氟西汀有關物質溶液穩定性試驗結果

由表5可知，不同時間下主峰峰面積的相對標準偏差（RSD）為0.19%，測定結果沒有顯著變化，表明供試品溶液在室溫條件下22 h內穩定性良好。

2.6 重復性試驗

取本品適量，按上述方法制備供試品溶液以及對照溶液。同法操作6份，按上述方法檢查有關物質，經計算，平均雜質總量為0.06%，RSD為8.15%，說明該測定方法具有優異的重復性。

2.7 準確度試驗

分別精密稱取雜質Ⅳ和鹽酸氟西汀工作用對照品各適量，按處方量分別加入輔料；雜質Ⅳ和鹽酸氟西汀均設計3個不同的質量濃度（分別為80%、100%、120%），制成每1 mL分別約含雜質Ⅳ32，40，48μg和鹽酸氟西汀3.576，4.47，5.364μg的混合溶液。每個質量濃度分別配制3份供試品溶液，按上述方法進行回收率測定。

測定結果為：雜質Ⅳ的平均回收率達到100.22%，RSD為0.2%，鹽酸氟西汀的平均回收率達到100.34%，RSD為0.6%。該結果表明該方法的準確度高，也進一步證實了其精確性與可靠性。

2.8 耐用性試驗

每次只改變一個色譜條件，取同一批供試品溶液分別精密量取10μg，注入液相色譜儀，記錄色譜圖以考察本品的耐用性，結果如表6所示。

由實驗結果可知，進樣流速、流動相體積比、色譜柱品牌等均不影響主藥的測定，表明該方法的系統耐用性良好。

表6 鹽酸氟西汀有關物質耐用性試驗結果

3 結語

以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑[Agilent Zorbax Eclipse Plus C8（4.6 mm×250 mm×5μm）或效能相當的色譜柱]；以三乙胺緩沖溶液-甲醇-四氫呋喃（體積比為 62∶8∶30）作為流動相，建立反相高效液相色譜法對鹽酸氟西汀膠囊有關物質進行檢測。該法靈敏度高、專屬性強、雜質分離效果好、耐用性優異、藥物質量濃度與峰面積相關性顯著，處方中輔料不干擾兩種藥物含量的測定，且操作簡便、檢測迅速、準確度高，適用于鹽酸氟西汀有關物質的檢測。

參考文獻（略）