貓須草的組織培養(yǎng)及添加物研究

摘要：采用組織培養(yǎng)技術(shù)使用四種培養(yǎng)基和兩種添加物對貓須草進(jìn)行組培試驗(yàn)。MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭、N6培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、N6培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭。試驗(yàn)表明：使用上述四種培養(yǎng)基對貓須草進(jìn)行組織培養(yǎng)，都能夠形成愈傷組織，并最終形成組培苗，但是MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基表現(xiàn)最好，使用MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基是試驗(yàn)的四種培養(yǎng)基中最適合貓須草組培的培養(yǎng)基質(zhì)，在以后的組培苗繁育試驗(yàn)中可以根據(jù)該培養(yǎng)基進(jìn)行激素方面的細(xì)微調(diào)節(jié)來達(dá)到最優(yōu)目的。在培養(yǎng)基中加入香蕉和活性炭成分，目的是對比在貓須草培養(yǎng)基中加入這兩種添加物后各個(gè)時(shí)期的表現(xiàn)。結(jié)果表明，加入活性炭的培養(yǎng)基要優(yōu)于加香蕉的培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：貓須草;組織培養(yǎng);添加物;試驗(yàn)

基金項(xiàng)目：貓須草在永州市的抗寒品種選育及高產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)研究 （永科發(fā)〔2017〕41號）

中圖分類號：S567.23 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： ?A ? ? ? ? ? ? ?DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2019.20.033

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器與材料

貓須草幼嫩莖尖切2～3cm小段、新潔爾滅、棉球、超凈工作臺、鑷子、酒精燈、MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+香蕉培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+香蕉培養(yǎng)基、解剖刀、無菌培養(yǎng)室。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的選取及清洗 取貓須草莖尖5cm左右，放置玻璃瓶用清水沖洗10min，然后，用新潔爾滅洗滌，用清水沖洗20min。洗凈后迅速放入接種室，用75%酒精或者0.1%氯化汞清洗10s，就可以進(jìn)行接種。

1.2.2 培養(yǎng)基的配制 ?培養(yǎng)基同時(shí)采用四種培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭、N6培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+香蕉、N6培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭。在MS和N6培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上每升培養(yǎng)基中加入1.0mg6-BA、少量的香蕉和活性炭。以上培養(yǎng)基中每升都加入蔗糖20g/L、瓊脂7.5g/L，配制完成后用0.1mol/LNaOH將pH值調(diào)至5.6～5.8。

香蕉泥的配制：將1kg香蕉切成片，加少量水煮沸約40min將香蕉煮爛，最后將固體物質(zhì)通過紗網(wǎng)過濾，剩下的汁才能加入培養(yǎng)基中。不同培養(yǎng)基香蕉含量不同，在這里試驗(yàn)中使用200g/L。

活性炭培養(yǎng)基，在每升培養(yǎng)基中加入500mg活性炭。

1.2.3 接種及組培期間觀察 在超凈工作臺接種時(shí)，切除滅菌后氧化的黑色部位，留下莖尖和較嫩的腋芽約1cm左右，每瓶放置4～6個(gè)芽點(diǎn)。四種培養(yǎng)基，每種接20瓶。接種完，放入培養(yǎng)室中溫度控制在21℃～23.5℃，光照度為2000Lx，光照時(shí)間為12h，進(jìn)行分化處理，并進(jìn)行觀察。最快的MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基7d切口處開始膨大，有愈傷組織逐漸產(chǎn)生。10d后產(chǎn)生愈傷組織，12d開始萌動，發(fā)出新芽，形成叢芽。24d就可以進(jìn)行轉(zhuǎn)接，進(jìn)行壯苗處理。這時(shí)由于開始產(chǎn)生出葉片，培養(yǎng)室中溫度應(yīng)控制在23±1℃，光照度2200Lx，光照時(shí)間10h。將叢芽從增殖培養(yǎng)基取出，分切成3個(gè)新芽的小塊，分別接種至壯苗培養(yǎng)基中，每瓶12叢。轉(zhuǎn)接后7～10d后，叢芽會長成1～2cm的瓶苗。15～20d長至3cm時(shí)，可以對瓶苗進(jìn)行繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)。在這里試驗(yàn)選擇采用生長較強(qiáng)壯的MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭瓶苗進(jìn)行繼代培養(yǎng)，其余瓶苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，進(jìn)行生根培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接。轉(zhuǎn)接6d后開始發(fā)現(xiàn)有白色突起，10d后看見有明顯的白色粗根形成。

2 結(jié)果與分析

由表1可知：在貓須草組織培養(yǎng)試驗(yàn)中，從分化到生根期。這四種培養(yǎng)基不管是分化、增殖、壯苗、生根，表現(xiàn)最好的是MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基。由于試驗(yàn)后期需要，最后將MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基培養(yǎng)的組培苗轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)。確定MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基是試驗(yàn)的四種培養(yǎng)基中最適合貓須草組培的培養(yǎng)基質(zhì)，在以后的組培苗繁育試驗(yàn)中可以根據(jù)該培養(yǎng)基進(jìn)行激素方面的細(xì)微調(diào)節(jié)來達(dá)到最優(yōu)目的。

表1 貓須草組織培養(yǎng)對比試驗(yàn)

后期在繼代培養(yǎng)中，MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基所培養(yǎng)的貓須草組培苗比較強(qiáng)壯，感染、褐化、白化率都較低，非常適合做貓須草的培養(yǎng)基質(zhì)。

由表2可知：在不同添加劑對貓須草組織培養(yǎng)的影響試驗(yàn)中，試驗(yàn)選擇香蕉和活性炭做貓須草培養(yǎng)基的培養(yǎng)基添加劑。這兩種添加劑在組織培養(yǎng)生產(chǎn)中會經(jīng)常使用。在試驗(yàn)過程中，貓須草是草本植物，本身就容易產(chǎn)生愈傷組織和分化。不需要特別的激素和營養(yǎng)來促進(jìn)它的愈傷組織和分化。在對比試驗(yàn)中，用活性炭做添加劑比香蕉要好的多。

表2 ?不同添加劑對貓須草組織培養(yǎng)的影響

3 結(jié)論

由表五可知，使用上述四種培養(yǎng)基對貓須草進(jìn)行組織培養(yǎng)，都能夠形成愈傷組織并最終形成組培苗，但是MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基表現(xiàn)最好，使用MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0mg/L+活性炭培養(yǎng)基是試驗(yàn)的四種培養(yǎng)基中最適合貓須草組培的培養(yǎng)基質(zhì)，在以后的組培苗繁育試驗(yàn)中可以根據(jù)該培養(yǎng)基進(jìn)行激素方面的細(xì)微調(diào)節(jié)來達(dá)到最優(yōu)目的。

在培養(yǎng)基中加入香蕉和活性炭成分，目的是對比一下在貓須草培養(yǎng)基中加入這兩種物質(zhì)在各個(gè)時(shí)期的表現(xiàn)。結(jié)果表明，加入活性炭的培養(yǎng)基要優(yōu)于加香蕉的培養(yǎng)基。

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作者簡介：李綱，碩士，講師，研究方向：栽培技術(shù)。