家禽養殖場禽舍消毒細菌指標的檢測與分析

王愛峰

摘 ?要：為探究家禽養殖舍消毒前后細菌總數的變化情況。運用細菌培養計數方法，對某養殖公司肉鴨養殖場立體籠養鴨舍的14個檢測點消毒前后總數進行了檢測計數。結果表明： 鴨舍料槽、網床、水線、水碗、側網處消毒前的菌落總數分別為14×104、1.6×104、10×104、8.3×104、3.0×104CFU/cm2。消毒后細菌總數分別為5.7×104、0.3×104、6.3×104、4.2×104、1.1×104CFU/cm2;10個檢測點消毒前污染程度各不相同，消毒細菌數均有不同程度下降，消毒效果明顯。

關鍵詞：細菌檢測;肉鴨養殖;消毒

中圖分類號：S858.311.36 ? ? 文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2019）10-0044-04

1 ?材料與方法

1.1 ?儀器與試劑 ?隔水式電熱恒溫培養箱、立式壓力蒸汽滅菌器、電熱鼓風干燥箱、潔凈工作臺、營養瓊脂培養基、氯化鈉、麥康凱培養基、或微量移液器、吸耳球、試管、無菌培養皿、pH計或pH比色管或精密pH試紙、無菌棉拭子（棉簽）等。

1.2 ?實驗準備

1.2.1 ?培養基制備 ?配制溶液：稱量好各種原料（營養瓊脂等）和準備干凈容器（錐形瓶等），依據培養基的配方，準備并稱取各種原料，按序加入后使其溶解，最后補足所需水分，封口加熱溶解（若在加熱進程中水分蒸發，應在全部原料溶解后加水補足）。

調節pH值：用pH試紙測定培養基的pH值，若不符合需要可用10%稀鹽酸或10%氫氧化鈉進行調節，直到調節到中性（7.0～7.2）為止。

過濾：用濾紙趁熱將已配好的培養基過濾。可將濾紙折疊（浸潤）后，鋪在漏斗上過濾。

分裝制作平板培養基：在潔凈工作臺內，將剛剛滅過菌的盛有制備好營養瓊脂培養液的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上，待營養瓊脂溶液冷卻至60℃左右，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，將瓶口在酒精燈上稍微灼燒，左手在酒精燈火焰附近以無菌狀態打開平皿蓋，傾入瓊脂溶液約15mL左右，輕輕搖晃，使培養基平鋪于平皿底部，放置15min左右待其凝固后倒置過來，標注制作日期、名稱等平放在隔水式電熱恒溫培養箱內備用。24h后查看，如培養基內長雜菌，棄用。

1.3 ?檢測場所 ?山東省泰安市某養殖公司肉鴨養殖場立體籠養鴨舍。

1.3.1 ?鴨舍概況 ?本實驗在泰安市某養殖公司的肉鴨養殖示范場采集樣本，該養殖場于2014年10月建成投產，占地10000m2，建筑面積1200m2，建有鋼架結構鴨舍、鴨糞陽光發酵處理池、消毒間等。養殖示范場設有三種不同養殖技術模式，分別是：網上平養，刮糞板機械清除;上網下床，采用農作物秸稈添加微生態制劑發酵床發酵鴨糞處理技術;立體籠養，采用自動化傳送帶清理鴨糞。該場消毒設施及消毒制度健全，消毒藥物齊全，檢測數據真實可靠且具有代表性。

1.3.2 ?消毒模式 ?空棚消毒[1]，進鴨苗前一天用改性戊二醛（50%）全棚噴灑消毒[2]。

2 ?樣品采集與處理

2.1 ?樣品采集

2.1.1 ?鴨舍消毒前樣品的采集 ?采樣時間：在立體籠養鴨舍清理鴨糞、灰塵、雜物等并用水徹底沖洗12h后，實驗人員到鴨舍現場進行采集[3，4]。

采樣點確定及采集方法：

空氣中微生物檢測：采用自然沉降的方法，分別在鴨舍第1、2排頭處，第3、4排末尾和中間，第4、5排末尾各選擇一個適宜位置，均勻分布，共4個采集點。距離地面高度約0.5m，避開風口，避免人員走動，分別放置營養瓊脂培養基，打開平皿蓋，暴露15min左右蓋上平皿蓋并注明棟舍號、采樣日期、采樣點號等備用。

養殖舍物體表面細菌的采集[5]：鴨舍的料槽、網床、水線、水碗、側網處各確定2個采集區，每個采集區均勻分布一個采集點，共采集10個點，每個點采樣面積1×5cm2，每個點采樣10cm2。采樣方法：點燃酒精燈，試管口灼燒滅菌再打開膠塞，每個采樣點用滅菌生理鹽水浸潤滅菌棉拭子，迅速在采樣點1×5cm2面積內橫豎往返均勻涂擦，全部擦拭后，將棉拭子捻轉去除手接觸部位放入10ml滅菌生理鹽水試管內，再換一采樣點重復上述操作，兩只棉拭子放入同一滅菌生理鹽水試管，然后注明棟舍號、采樣日期、采樣點號等放入試管架上備用，即為該采樣點采集的樣本。

2.1.2 ?鴨舍消毒后樣品的采集 ?鴨舍消毒后進鴨前1d，按2.1.1方法和要求進行采樣。

2.2 ?待檢樣品處理 ?將空氣中微生物檢測和養殖舍物體表面細菌檢測共14個采集點的樣本放入同一個泡沫箱內，即為該鴨舍所采集樣品，泡沫箱貼上標簽，并注明棟舍號、采樣區域、采樣日期等，即為待測液體樣品1：10稀釋液（10倍液體樣品），室溫條件下保存，帶回樣品處理實驗室備用。

2.2.1 ?待檢液體樣品的稀釋 ?用1mL移液管吸取1mL待檢液體樣本置盛有9mL生理鹽水的無菌試管中，充分混勻，制成1：100的待檢樣品稀釋液[6]。再用1mL移液器吸取1：100待檢樣品稀釋液1mL，沿管壁緩慢注入盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面以免使結果準確性下降），振搖試管或反復吹打使其均勻混合，制成1：1000的待檢樣品稀釋液。按上述操作，制備10倍系列待檢樣品稀釋液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管。依據對樣品污染情況的估計，選擇2～3個適宜稀釋度的待檢樣品稀釋液，根據鴨舍污染程度做了1：100、1：1000和1：10000三個稀釋度。

2.2.2 ?細菌培養 ?在進行10倍遞增稀釋時，同時吸取1mL待檢樣品稀釋液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平行試驗。每個檢測區域1：100、1：1000和1：10000三個稀釋度分別做兩個平行試驗，同時吸取1mL滅菌生理鹽水加入一個無菌平皿內作空白對照。共做35個培養平皿，包括34個檢測，1個空白對照。34個檢測包括：4個空氣檢測，30個養殖舍物體表面檢測（每個采集點6個平皿，5個采樣點，共30個）。及時將冷卻至60℃的營養瓊脂溶液培養基（可先放置于60℃±1℃恒溫水浴箱中保溫）傾注約15mL到平皿，并緩慢轉動平皿使其混合均勻。待瓊脂凝固后，將平板倒置，放入隔水式電熱恒溫培養箱37±1℃培養24±2h[7，8]。

2.2.3 ?菌落計數 ?即計算55cm2平皿表面的菌落總數，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄相應稀釋倍數的菌落數量以防遺漏[7]。菌落計數以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。

2.2.4 ?菌落總數的計算與報告 ?菌落數小于100 CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告;菌落數大于或等于100CFU時，第3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數字，后面用0代替個位數;也可用10的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，取前2位數字;若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延;若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效（平面取樣以CFU/cm2為報告單位，稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告）。

菌落總數測定根據《GB4789.2-2010菌落總數測定》進行相應處理，大腸桿菌測定根據《GB4789.38-2012大腸埃希菌計數》中所記錄方法進行處理，金黃色葡萄球菌根據《GB4789.10-2010金黃色葡萄球菌檢驗》中所記錄方法進行處理，霉菌根據《GB4789.15-2010霉菌和酵母計數》中所記錄方法進行處理。

3 ?結果與分析

3.1 ?細菌總數檢測結果 ?按上述方法，對某立體籠養鴨舍消毒前料槽、網床、水線、水碗、側網等物體表面和空氣沉降檢測細菌總數的計算結果[9]，見表1和表2。

3.2 ?消毒效果檢測結果 ?按上述方法，對某立體籠養鴨舍消毒后料槽、網床、水線、水碗、側網等物體表面和空氣沉降檢測細菌總數的計算結果，見表3和表4。

4 ?討論與結論

隨著養禽業日新月異的發展使得細菌的檢測方法在鑒定技術有新突破，不僅實現了對病原微生物進行準確鑒定，而且更適合于病原菌全面、快速、高質量檢測的需要，為臨床提供及時準確的細菌鑒定結果，在一定程度上有助于緩解傳染病過度危害肉鴨的問題，減輕了養殖戶和養殖公司的經濟負擔，促進行業的健康發展。

消毒前后檢測結果對比顯示，消毒后帶菌量下降較為明顯[10]，菌落數小于6.0×104CFU/cm2的物表所占比例達到75%，采樣點中料槽是帶菌量最大的物表，消毒前平均帶菌量為14×104CFU/cm2，消毒后為5.7×104CFU/cm2，結果表明有效消毒后，能大量清除物表暫居菌的數量，消毒后的平均合格率達90%以上。

所以對禽舍消毒必須要高度重視，使用的消毒劑種類、使用劑量、消毒方法、消毒時間長短、禽舍內溫濕度等不同均會產生不同的消毒效果。當平均合格率達到90%以上，即可證明禽舍的完成消毒且消毒合格，允許進行下一批次肉鴨的飼養;若平均合格率在90%以下，則說明此次消毒不合格，需要再次進行消毒，直至消毒合格后方可進行下一批次肉鴨的飼養。

參考文獻：

[1] ?齊勝利，孔慶友，何閃. 種鴨場空棚消毒的六大步驟[J].國外畜牧學-豬禽，2013，33（10）：42～44.

[2] ?翟洪民.鴨舍消毒方法及注意事項[J].養禽與禽病防治，2014，5：40～41.

[3] ?王光鋒，李舫，靖吉強，等.種鴨場空舍期不同消毒模式的效果比較[J].中國家禽，2015，37（8）：64～68.

[4] ?蘇益瓊.旱養肉鴨舍建設及消毒[J].畜牧獸醫報，2015，7：1 .

[5] ?吳水菊.病歷夾細菌檢測及消毒[J].臨床護理雜志，2006，5（1）：53～54.

[6] ?武世珍，靖吉強，王光峰，等.網養肉鴨舍不同消毒模式對金黃色葡萄球菌的消毒效果[J].黑龍江畜牧獸醫，2016（8）：128～130.

[7] ?李穎，李婷.影響乳酸菌平板菌落計數的方法研究[J].中國實用醫藥，2016，11，（16）：287～288.

[8] ?王瑞蓮，林裕龍.細菌檢測方法研究進展[J].國際檢驗醫學雜志，2014，35（16）：2200～2201.

[9] ?沈小芳.辦公室電腦鍵盤、鼠標表面消毒前后細菌污染狀況[J].環境與職業醫學，2010，27（3）：160～161.

[10] ?楊竹蘭，劉智勇，甘露，等.臨床病區終末消毒前后物表暫居菌的比較研究[J].國際檢驗醫學雜志，2015，36（11）：1491～1493.

[11] ?Branch-Elliman MD， Ernie RR. Direct feedback with the ATP luminometer as a process improvement tool for terminal cleaning of patient rooms[J]. Am J Infect Control.2014（42）：195～197.

[12] ?Xie P， Wang Y M， Wang C， et al. Effect of different fat sources in parental diets on growth performance， villus morphology， digestive enzymes and colorectal microbiota in pigeon squab[J]. Archives of Animal Nutrition，2015，67（2）：147～160.

[13] ?Bullman S，Luce B，Sleator R D.Molecular diagnostics the changing culture of medical microbiology[J]. Bioengineered， 2015，3（1）：1～7.