異煙酸-巴比妥酸分光光度法測定尿硫氰酸鹽

黃選忠,汪 波 ,舒開繼,鄒紹仙

(湖北興山縣疾病預防控制中心，湖北 興山 443711)

硫氰酸鹽(SCN-)是致甲狀腺腫物質，可阻滯甲狀腺激素合成，引起甲狀腺腫，因此監測人血、尿等標本中的SCN-含量具有重要意義。同時尿中SCN-含量也是接觸氰化物的一項生物接觸指標[1]，目前，測定尿中微量SCN-的方法主要有分光光度法、離子色譜法[2]、氣相色譜法[3-4]等,其中離子色譜法和氣相色譜法均需要專門儀器,且耗時較長。分光光度法以其簡便靈敏、設備簡單而被廣泛采用。已報道的分光光度法主要有異煙酸- 吡唑啉酮光度法[5]、吡啶-巴比妥酸光度法[6](為國家衛生行業標準方法)、三氯化鐵顯色光度法等[7]，其中吡啶-巴比妥酸法和三氯化鐵法的靈敏度較低，且所用吡啶有惡臭，有損于分析人員的健康，使其應用受到影響。異煙酸-巴比妥酸光度法已應用于生活飲用水微量氰化物的測定[8]，但應用于人尿中微量SCN-的測定似未見報道。我們對異煙酸-巴比妥酸光度法測定人尿中微量SCN-進行了研究，結果表明，在弱酸性介質中，氯胺T可將SCN-轉化成氯化氰(CNCl)，CNCl再與異煙酸-巴比妥酸形成一紫藍色染料，該染料的最大吸收波長(λmax)位于598nm，其表觀摩爾吸光系數ε達1.19×105L·mol-1·cm-1，且其吸光度與SCN-含量在一定的范圍內呈良好的線性關系(r>0.9996)，據此建立了測定人尿中微量SCN-的異煙酸-巴比妥酸分光光度法，該法SCN-含量在0～2.50μg/5.0mL范圍內符合比耳定律，方法用于人尿中微量SCN-的測定，其結果與國家行業標準方法相吻合，加標回收率在90%～104%，方法的選擇性、穩定性和靈敏度均令人滿意。

1 實驗部分

1.1 主要儀器及試劑

TU-1810SPC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)；SCN-標準溶液：1.0mg/mL的標準儲備液，按文獻[6]的方法配制。臨用時稀釋成1.0μg/mL(A液)和5.0μg/mL(B液)的標準應用液；1.0mol/L的KH2PO4緩沖溶液：pH值≈4.67[9]；異煙酸-巴比妥酸(含二個水分子)溶液：稱取0.615g異煙酸和1.025g巴比妥酸(含二個水分子)加入1.0mol/L的NaOH溶液12～13mL，攪拌使其溶解后補充純水至100 mL(此溶液pH值為近中性，其濃度分別為0.05mol/L和0.063mol/L)；0.044 mol/L的氯胺T溶液(臨用時配制)； 以上試劑為AR級，實驗用水為超純水(18.25ΜΩ·cm)。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制

取SCN-標準應用A液(1.0μg/mL )0、0.20、0.50mL和B液0.20、0.30、0.40和0.50mL于10 mL比色管中，補充純水至0.80mL，加入1.0mol/L的KH2PO4緩沖溶液2.0 mL、氯胺T溶液0.25 mL混勻，放置3min，加入異煙酸-巴比妥酸溶液2.0mL混勻，放置20～25min，以試劑空白為參比用1cm比色皿于598nm處測定各管吸光度A，以SCN-含量對A繪制標準曲線。

1.2.2 尿樣分析

取新鮮尿液0.10mL(SCN-≤2.5μg)按實驗方法1.2.1操作測定吸光度，以標準曲線法進行SCN-定量，同時進行標準方法[6]對照分析及加標回收實驗。

2 結果與討論

2.1 吸收光譜

在本試驗條件下，SCN-與異煙酸-巴比妥酸形成一紫藍色染料， 該染料的λmax位于598 nm，而相應試劑空白在500～700nm基本無吸收，見圖1。

2.2 pH值的影響、緩沖溶液的選擇及用量

圖1 吸收光譜

試驗結果表明，pH值對該顯色體系的影響主要在SCN-轉化成CNCl的這一階段，對后續顯色階段的影響相對較小，且溶液pH值在4.5～5.7的KH2PO4/Na2HPO4(1/15mol/L)[10]緩沖介質中體系有最大穩定的吸光度，同時對檸檬酸鈉/鹽酸(pH值=5.25)、醋酸鈉/鹽酸(pH值=4.58)、1.0mol/L的KH2PO4溶液(pH值≈4.67)和KH2PO4/Na2HPO4(1/15mol/L ，pH值=5.29)等緩沖體系的進行了試驗，結果表明，用檸檬酸鈉/鹽酸、醋酸鈉/鹽酸兩種緩沖體系不僅吸光度偏低，且尿樣加標回收率也偏低，用KH2PO4/Na2HPO4緩沖體系雖然體系可達最大吸光度，但尿樣加標回收率偏低，而用1.0mol/L的KH2PO4溶液時，體系可達最大吸光度且尿樣加標回收率較高這可能與尿樣的基體干擾有關，當1.0mol/L的KH2PO4溶液的加入抵消了尿樣的基體干擾，試驗選用1.0mol/L的KH2PO4溶液控制顯色體系酸度及離子強度，其用量在1.5～2.5 mL時體系有最大穩定的吸光度，試驗選用2.0 mL。

2.3 氯化氰轉化時間及氯胺T溶液用量的影響

本試驗條件下，SCN-轉化成CNCl的時間在2～5min ，0.044mol/L的氯胺T溶液用量在0.20～0.30 mL體系有最大穩定的吸光度，試驗分別選用3min 和0.25mL。

2.4 異煙酸和硫代巴比妥酸溶液用量的影響

試驗表明，0.10 mol/L的異煙酸和巴比妥酸溶液用量分別在0.50～1.50mL和 1.0～1.50 mL體系有最大穩定的吸光度，試驗分別選用1.0 mL和1.25mL。

2.5 異煙酸和巴比妥酸溶液混合加入實驗

試驗表明，將異煙酸和巴比妥酸分別以0.05mol/L和0.063mol/L的濃度配成混合溶液一次加入2.0mL，可使體系吸光度提高20%以上，且提高了工作效率。

2.6 共存物質的影響

2.7 標準曲線

本法SCN-含量在0～2.50μg/5.0mL范圍內符合比耳定律，標準曲線的回歸方程及由曲線斜率法求得的表觀摩爾吸光系數為：

A=0.4118C(SCN-，μg)-0.0086，r=0.9996，ε=1.19×105L·mol-1·cm-1。

若以吸光度為0.01、取樣量為0.10mL計，方法最低檢出濃度為0.5mg/L。

2.8 呈色穩定性

在本試驗條件下，SCN-與異煙酸-巴比妥酸形成紫藍色染料，其吸光度在20～25min達穩定最大值且至少再1h內基本穩定(吸光度變化值小于5%)。

2.9 重復性實驗

分別對0.20、0.50和2.00 μg SCN-標準液平行測定5次，測定結果見表1，從表1可見，三水平測定結果的相對標準偏差(RSD)分別為2.98%、1.97%和1.06%，表明方法的重復性良好。

表1 重復性試驗結果

2.10 尿樣分析及回收試驗結果

取8份尿樣按實驗方法1.2.2操作測定SCN-含量，同時用國家行業標準方法(吡啶-巴比妥酸光度法[6])作對照分析，并進行加標回收實驗，本法結果與標準方法結果相吻合，加標回收率在90%～104%，見表2。

表2 尿樣分析結果

表2(續)

3 結語

以異煙酸-巴比妥酸為顯色劑分光光度法測定微量SCN-，方法靈敏度高，選擇性及重復性良好，方法操作簡便，測定結果準確，所用試劑無毒無害，可用于人尿中微量SCN-的定量分析。