異煙酸-巴比妥酸分光光度法測(cè)定尿硫氰酸鹽

黃選忠,汪 波 ,舒開繼,鄒紹仙

(湖北興山縣疾病預(yù)防控制中心，湖北 興山 443711)

硫氰酸鹽(SCN-)是致甲狀腺腫物質(zhì)，可阻滯甲狀腺激素合成，引起甲狀腺腫，因此監(jiān)測(cè)人血、尿等標(biāo)本中的SCN-含量具有重要意義。同時(shí)尿中SCN-含量也是接觸氰化物的一項(xiàng)生物接觸指標(biāo)[1]，目前，測(cè)定尿中微量SCN-的方法主要有分光光度法、離子色譜法[2]、氣相色譜法[3-4]等,其中離子色譜法和氣相色譜法均需要專門儀器,且耗時(shí)較長(zhǎng)。分光光度法以其簡(jiǎn)便靈敏、設(shè)備簡(jiǎn)單而被廣泛采用。已報(bào)道的分光光度法主要有異煙酸- 吡唑啉酮光度法[5]、吡啶-巴比妥酸光度法[6](為國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法)、三氯化鐵顯色光度法等[7]，其中吡啶-巴比妥酸法和三氯化鐵法的靈敏度較低，且所用吡啶有惡臭，有損于分析人員的健康，使其應(yīng)用受到影響。異煙酸-巴比妥酸光度法已應(yīng)用于生活飲用水微量氰化物的測(cè)定[8]，但應(yīng)用于人尿中微量SCN-的測(cè)定似未見報(bào)道。我們對(duì)異煙酸-巴比妥酸光度法測(cè)定人尿中微量SCN-進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，在弱酸性介質(zhì)中，氯胺T可將SCN-轉(zhuǎn)化成氯化氰(CNCl)，CNCl再與異煙酸-巴比妥酸形成一紫藍(lán)色染料，該染料的最大吸收波長(zhǎng)(λmax)位于598nm，其表觀摩爾吸光系數(shù)ε達(dá)1.19×105L·mol-1·cm-1，且其吸光度與SCN-含量在一定的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r>0.9996)，據(jù)此建立了測(cè)定人尿中微量SCN-的異煙酸-巴比妥酸分光光度法，該法SCN-含量在0～2.50μg/5.0mL范圍內(nèi)符合比耳定律，方法用于人尿中微量SCN-的測(cè)定，其結(jié)果與國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法相吻合，加標(biāo)回收率在90%～104%，方法的選擇性、穩(wěn)定性和靈敏度均令人滿意。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器及試劑

TU-1810SPC紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)；SCN-標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，按文獻(xiàn)[6]的方法配制。臨用時(shí)稀釋成1.0μg/mL(A液)和5.0μg/mL(B液)的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液；1.0mol/L的KH2PO4緩沖溶液：pH值≈4.67[9]；異煙酸-巴比妥酸(含二個(gè)水分子)溶液：稱取0.615g異煙酸和1.025g巴比妥酸(含二個(gè)水分子)加入1.0mol/L的NaOH溶液12～13mL，攪拌使其溶解后補(bǔ)充純水至100 mL(此溶液pH值為近中性，其濃度分別為0.05mol/L和0.063mol/L)；0.044 mol/L的氯胺T溶液(臨用時(shí)配制)； 以上試劑為AR級(jí)，實(shí)驗(yàn)用水為超純水(18.25ΜΩ·cm)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取SCN-標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用A液(1.0μg/mL )0、0.20、0.50mL和B液0.20、0.30、0.40和0.50mL于10 mL比色管中，補(bǔ)充純水至0.80mL，加入1.0mol/L的KH2PO4緩沖溶液2.0 mL、氯胺T溶液0.25 mL混勻，放置3min，加入異煙酸-巴比妥酸溶液2.0mL混勻，放置20～25min，以試劑空白為參比用1cm比色皿于598nm處測(cè)定各管吸光度A，以SCN-含量對(duì)A繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 尿樣分析

取新鮮尿液0.10mL(SCN-≤2.5μg)按實(shí)驗(yàn)方法1.2.1操作測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行SCN-定量，同時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)方法[6]對(duì)照分析及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

在本試驗(yàn)條件下，SCN-與異煙酸-巴比妥酸形成一紫藍(lán)色染料， 該染料的λmax位于598 nm，而相應(yīng)試劑空白在500～700nm基本無(wú)吸收，見圖1。

2.2 pH值的影響、緩沖溶液的選擇及用量

圖1 吸收光譜

試驗(yàn)結(jié)果表明，pH值對(duì)該顯色體系的影響主要在SCN-轉(zhuǎn)化成CNCl的這一階段，對(duì)后續(xù)顯色階段的影響相對(duì)較小，且溶液pH值在4.5～5.7的KH2PO4/Na2HPO4(1/15mol/L)[10]緩沖介質(zhì)中體系有最大穩(wěn)定的吸光度，同時(shí)對(duì)檸檬酸鈉/鹽酸(pH值=5.25)、醋酸鈉/鹽酸(pH值=4.58)、1.0mol/L的KH2PO4溶液(pH值≈4.67)和KH2PO4/Na2HPO4(1/15mol/L ，pH值=5.29)等緩沖體系的進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果表明，用檸檬酸鈉/鹽酸、醋酸鈉/鹽酸兩種緩沖體系不僅吸光度偏低，且尿樣加標(biāo)回收率也偏低，用KH2PO4/Na2HPO4緩沖體系雖然體系可達(dá)最大吸光度，但尿樣加標(biāo)回收率偏低，而用1.0mol/L的KH2PO4溶液時(shí)，體系可達(dá)最大吸光度且尿樣加標(biāo)回收率較高這可能與尿樣的基體干擾有關(guān)，當(dāng)1.0mol/L的KH2PO4溶液的加入抵消了尿樣的基體干擾，試驗(yàn)選用1.0mol/L的KH2PO4溶液控制顯色體系酸度及離子強(qiáng)度，其用量在1.5～2.5 mL時(shí)體系有最大穩(wěn)定的吸光度，試驗(yàn)選用2.0 mL。

2.3 氯化氰轉(zhuǎn)化時(shí)間及氯胺T溶液用量的影響

本試驗(yàn)條件下，SCN-轉(zhuǎn)化成CNCl的時(shí)間在2～5min ，0.044mol/L的氯胺T溶液用量在0.20～0.30 mL體系有最大穩(wěn)定的吸光度，試驗(yàn)分別選用3min 和0.25mL。

2.4 異煙酸和硫代巴比妥酸溶液用量的影響

試驗(yàn)表明，0.10 mol/L的異煙酸和巴比妥酸溶液用量分別在0.50～1.50mL和 1.0～1.50 mL體系有最大穩(wěn)定的吸光度，試驗(yàn)分別選用1.0 mL和1.25mL。

2.5 異煙酸和巴比妥酸溶液混合加入實(shí)驗(yàn)

試驗(yàn)表明，將異煙酸和巴比妥酸分別以0.05mol/L和0.063mol/L的濃度配成混合溶液一次加入2.0mL，可使體系吸光度提高20%以上，且提高了工作效率。

2.6 共存物質(zhì)的影響

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線

本法SCN-含量在0～2.50μg/5.0mL范圍內(nèi)符合比耳定律，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及由曲線斜率法求得的表觀摩爾吸光系數(shù)為：

A=0.4118C(SCN-，μg)-0.0086，r=0.9996，ε=1.19×105L·mol-1·cm-1。

若以吸光度為0.01、取樣量為0.10mL計(jì)，方法最低檢出濃度為0.5mg/L。

2.8 呈色穩(wěn)定性

在本試驗(yàn)條件下，SCN-與異煙酸-巴比妥酸形成紫藍(lán)色染料，其吸光度在20～25min達(dá)穩(wěn)定最大值且至少再1h內(nèi)基本穩(wěn)定(吸光度變化值小于5%)。

2.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

分別對(duì)0.20、0.50和2.00 μg SCN-標(biāo)準(zhǔn)液平行測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果見表1，從表1可見，三水平測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.98%、1.97%和1.06%，表明方法的重復(fù)性良好。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.10 尿樣分析及回收試驗(yàn)結(jié)果

取8份尿樣按實(shí)驗(yàn)方法1.2.2操作測(cè)定SCN-含量，同時(shí)用國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法(吡啶-巴比妥酸光度法[6])作對(duì)照分析，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，本法結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)方法結(jié)果相吻合，加標(biāo)回收率在90%～104%，見表2。

表2 尿樣分析結(jié)果

表2(續(xù))

3 結(jié)語(yǔ)

以異煙酸-巴比妥酸為顯色劑分光光度法測(cè)定微量SCN-，方法靈敏度高，選擇性及重復(fù)性良好，方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，所用試劑無(wú)毒無(wú)害，可用于人尿中微量SCN-的定量分析。