全自動(dòng)血型儀檢測(cè)ABO血型正反定型不符原因分析及處理策略

郭顯悅　王遠(yuǎn)杰

摘要：目的 ?探討在鑒定ABO血型中全自動(dòng)血型儀正反定型不符的原因，并探尋解決對(duì)策。方法 ?對(duì)2017年10月～2018年8月遂寧市中心醫(yī)院血型儀檢測(cè)的298例ABO血型正反定不符的標(biāo)本進(jìn)行分析，同時(shí)結(jié)合試管法、抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)、吸收放散實(shí)驗(yàn)、不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果及病史資料分析定型不符的原因并進(jìn)行歸類。結(jié)果 ?298例正反定型不符標(biāo)本準(zhǔn)確鑒定后歸納分為4類：可被糾正類型（標(biāo)本、人員操作、試劑和儀器原因）占24.16%;抗原原因占7.38 %，其中包括抗原減弱以及ABO亞型;抗體減弱占31.88%，包括抗體合成不足（如嬰幼兒），抗體缺失（如老年人和腫瘤患者），意外抗體等;其他原因占36.58%，主要包括自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素綜合癥、高球蛋白血癥等。結(jié)論 ?鑒定血型前標(biāo)本質(zhì)量控制、儀器定期的保養(yǎng)維護(hù)以及試劑紅細(xì)胞的更換可以有效減少正反定型不符，抗體合成不足、自身免疫性疾病以及冷凝集素綜合癥是導(dǎo)致ABO正反定型不符的主要原因。建議院方根據(jù)可能原因進(jìn)行相關(guān)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，準(zhǔn)確鑒定ABO血型從而保證患者輸血安全。

關(guān)鍵詞：全自動(dòng)血型儀;ABO正反定型;標(biāo)本質(zhì)量

中圖分類號(hào)：R446.6 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.19.037

文章編號(hào)：1006-1959（2019）19-0116-03

Analysis of the Causes of Disagreement Between ABO Blood Type Positive and Negative Types

by Automatic Blood Type Instrument and Treatment Strategy

GUO Xian-yue，WANG Yuan-jie

（Department of Blood Transfusion，Suining Central Hospital，Suining 629000，Sichuan，China）

Abstract：Objective ?To explore the causes of the inconsistency between the positive and negative stereotypes of the automatic blood type meter in the identification of ABO blood type， and to explore solutions.Methods ?A total of 298 ABO blood group positive and negative samples were analyzed from October 2017 to August 2018 in Suining Central Hospital. The combination of test tube method， anti-human globulin test， absorption and release experiment， irregular antibody The identification results and medical history data were analyzed and the reasons for the inconsistency were classified. Results ?298 cases of positive and negative type inconsistency specimens were classified into 4 categories after accurate identification： 24.16% of the types that can be corrected （specimen， personnel operation， reagents and instrument reasons）; 7.38% of antigens， including antigen attenuation and ABO subtype; Antibody attenuation accounted for 31.88%， including insufficient antibody synthesis such as infants and young children， antibody deletion such as elderly and tumor patients， accidental antibodies， etc.; other causes accounted for 36.58%， mainly autoimmune hemolytic anemia， cold agglutinin syndrome， highball Proteinemia and the like.Conclusion ?The quality control of the blood type pre-sample， the regular maintenance of the instrument and the replacement of the reagent red blood cells can effectively reduce the positive and negative stereotypes. The lack of antibody synthesis， autoimmune diseases and cold agglutinin syndrome are the main reasons for the ABO positive and negative stereotypes. It is recommended that the hospital conduct relevant confirmation experiments according to the possible reasons to accurately identify the ABO blood type to ensure the patient's blood transfusion safety.

Key words：Automatic blood type meter;ABO positive and negative stereotype;Specimen quality

開展電子交叉配血要對(duì)供受血者進(jìn)行血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查，我院主要依靠全自動(dòng)血型儀，其具有加量、判讀標(biāo)準(zhǔn)化，自動(dòng)傳輸且可長(zhǎng)期保存數(shù)據(jù)，節(jié)省人力，避免人為誤差等優(yōu)勢(shì)。但由于儀器的保養(yǎng)和標(biāo)本范圍較廣，在鑒定過程中會(huì)遇到正反定型不符的情況，如標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞溶血，老年人抗體減弱、藥物治療、疾病引起抗體和蛋白異常等。為支撐臨床電子交叉配血的開展，現(xiàn)對(duì)全自動(dòng)血型儀檢測(cè)ABO血型時(shí)出現(xiàn)正反定型不符的結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)性的回顧分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1血液標(biāo)本 ?選擇2017年10月～2018年8月遂寧市中心醫(yī)院輸血科血型儀檢測(cè)的298例ABO血型正反定不符的標(biāo)本，包括供血者紅細(xì)胞成分和入院患者血型鑒定標(biāo)本。

1.2試劑和儀器 ?微柱凝集卡（IgG、C3d檢測(cè)卡：AHC466B、AHC487A、AHC508A，血型鑒定卡：ABR048A、ABR081A、ABR100A）為美國(guó)強(qiáng)生公司產(chǎn)品;抗體篩查試劑紅細(xì)胞為市售4個(gè)不同廠家產(chǎn)品，其中2種為進(jìn)口試劑紅細(xì)胞，2種為國(guó)產(chǎn)試劑紅細(xì)胞;譜細(xì)胞（10種）主要儀器為全自動(dòng)血型鑒定及交叉配血分析儀，血型工作站均為美國(guó)強(qiáng)生產(chǎn)品。血庫(kù)專用離心機(jī)為臺(tái)灣BASO公司產(chǎn)品。

1.3輸血管理系統(tǒng) ?智能管理化軟件系統(tǒng)為重慶圖柏信息技術(shù)有限公司產(chǎn)品，可實(shí)現(xiàn)與全自動(dòng)血型鑒定及交叉配血儀的連接。

1.4方法 ?將供血者血袋辮子至于玻璃試管內(nèi)，3000 r/min離心5 min，分離血漿，制成血樣。將血型鑒定標(biāo)本以3400 r/min 離心1 min。全自動(dòng)血型儀檢測(cè)的所有樣本均使用美國(guó)強(qiáng)生正反定型卡，對(duì)反定拖尾標(biāo)本都增加試管法復(fù)查，并進(jìn)行多人鏡檢。懷疑冷凝集素干擾時(shí)在37℃孵育后再判定結(jié)果，疑為蛋白干擾用生理鹽水反復(fù)洗滌，疑為不明抗體的加做抗體鑒定。

1.5數(shù)據(jù)處理方法 ?本次研究數(shù)據(jù)錄入Excel 2007進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以（n，%）表示。

2結(jié)果

2.1 ABO血型正反定型不符分類 ?共298例ABO血型正反定不符，歸納原因有：①可被糾正類型（人員、儀器、試劑和標(biāo)本原因）;②抗原原因;③抗體減弱;④其他原因，見表1。

2.2可被糾正類型的原因分類 ?全自動(dòng)血型儀血型鑒定中有72例在排除原因后重復(fù)試驗(yàn)并結(jié)合試管法可被糾正，其原因可歸類于標(biāo)本、人員操作、試劑和儀器，見表2。

2.3其他定型不符的原因分類 ?在排除標(biāo)本、人員操作、試劑和儀器原因后，剩余226例ABO血型正反定不符標(biāo)本中其他原因造成的占比最高（48.23%），其余為抗原原因及抗體原因，分別對(duì)226例ABO血型正反定不符標(biāo)本進(jìn)行歸類，見表3。

3討論

微柱凝集法血型鑒定具有快速、結(jié)果容易保存等優(yōu)點(diǎn)[1]，凝膠技術(shù)在全自動(dòng)血型儀中的應(yīng)用給血液檢測(cè)帶來了極大的便利，我院開展電子配血技術(shù)對(duì)供受血者進(jìn)行ABO血型鑒定和抗體篩查主要依靠全自動(dòng)血型儀，在日常工作中筆者發(fā)現(xiàn)全自動(dòng)血型儀檢測(cè)出正反定型不一致的情況時(shí)有發(fā)生。其原因主要包括以下幾個(gè)方面：①雖然全自動(dòng)血型儀實(shí)現(xiàn)了高智能自動(dòng)化，但分析系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本要求較高。②臨床標(biāo)本問題，包括采樣不規(guī)范如靜脈輸液處采樣，標(biāo)本接收不規(guī)范如溶血、重度乳糜等。③實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員的操作問題包括樣本混淆，漏加試劑，實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，判讀錯(cuò)誤（溶血、弱凝集、混合外觀）和記錄錯(cuò)誤等。④試劑問題包括過期、污染及使用未經(jīng)確認(rèn)的試劑等。⑤儀器故障有移液臂、抓取臂、稀釋板定位錯(cuò)誤等。因此，為準(zhǔn)確定型，設(shè)備需要按廠家要求定期進(jìn)行維護(hù)以保證加樣的準(zhǔn)確性和可靠性;微柱凝膠卡在運(yùn)輸過程中會(huì)將空氣混入而形成氣泡，在加卡時(shí)應(yīng)對(duì)其進(jìn)行檢查;標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞必須每日更換以保證反定的凝集強(qiáng)度。

在臨床工作中排除標(biāo)本、試劑，儀器和人員操作原因后，結(jié)合病史及相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可將ABO正反定型不符的原因歸為抗原原因、抗體原因和其他原因。單純由抗原原因引起的ABO正反定不符比較少見，主要見于血液病患者，其紅細(xì)胞表面的ABH抗原缺失導(dǎo)致血型判定困難[2]，白血病所致的血型抗原減弱是暫時(shí)性、一過性的，隨著病情緩解可逐漸恢復(fù)正常[3]。此類患者鑒定時(shí)可考慮延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，進(jìn)行抗原親和力檢測(cè)、加做吸收放散實(shí)驗(yàn)，同時(shí)結(jié)合測(cè)定唾液HAB血型物質(zhì)輔助進(jìn)行判斷。另外ABO亞型也會(huì)造成抗原減弱，亞型的紅細(xì)胞抗原減弱主要是遺傳基因決定的弱表現(xiàn)型[4]，例如AB亞型對(duì)應(yīng)的A抗原、B抗原減弱，血清中常常伴有不規(guī)則抗-A1、抗B，若亞型定型錯(cuò)誤，同時(shí)又未能檢測(cè)出相應(yīng)不規(guī)則抗體，很容易導(dǎo)致輸血反應(yīng)[5]。此時(shí)應(yīng)查詢既往血型，結(jié)合血型基因檢測(cè)予以確認(rèn)。近年來血清學(xué)分子生物方面檢測(cè)的應(yīng)用也大大降低了亞型的漏檢率，為臨床輸血工作提供了更加安全的保障[6]。嬰幼兒抗體合成不足以及老年人抗體缺失是抗體原因中引起正反定型不符的主要原因。因此在鑒定嬰幼兒和老年人血型時(shí)應(yīng)特別注意。腫瘤患者由于長(zhǎng)期接受放療和或化療等治療導(dǎo)致抗體減弱，或是因?yàn)槟[瘤疾病出現(xiàn)免疫功能的改變導(dǎo)致血型抗體合成受抑制，導(dǎo)致抗體缺失[7]，如多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓內(nèi)大量的異常漿細(xì)胞增生，導(dǎo)致分泌大量結(jié)構(gòu)均一的單克隆免疫球蛋白，這些增加的異常免疫球蛋白會(huì)造成正常免疫球蛋白合成不足，從而導(dǎo)致ABO 血型抗體合成減少甚至缺失。對(duì)于此類患者，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間、4℃孵育（5～10 min）、增加血漿量、多次離心，查詢既往血型、采用吸收放散實(shí)驗(yàn)結(jié)合傳統(tǒng)的鹽水介質(zhì)試管法提高漏檢的弱血型抗體（抗原）的檢出率，避免血型誤定。

本次研究中由其他原因引起的ABO正反定型不符占比最大，分析主要受疾病因素的影響。常見有感染、免疫性疾病、惡性腫瘤及使用抗生素藥物等，使得抗體結(jié)合在紅細(xì)胞表面或游離在血清中，從而造成血型正反定型不符。冷凝集素綜合征患者血中具有高效價(jià)的自身冷抗體，此抗體可致自身紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)導(dǎo)致正反定型出現(xiàn)全凝聚現(xiàn)象，此時(shí)直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)為陽性，為克服冷凝集素的干擾可以在低溫（4℃）環(huán)境下用紅細(xì)胞吸附血清中的冷凝集素，也可將紅細(xì)胞和血清分別在37℃條件下預(yù)熱，反定型除AC、BC、OC 外加自身細(xì)胞對(duì)照， 若自身紅細(xì)胞已凝集可用37℃生理鹽水反復(fù)洗滌后再做實(shí)驗(yàn)。高球蛋白血癥患者血漿中高水平的球蛋白也會(huì)導(dǎo)致患者紅細(xì)胞自凝從而影響血型鑒定，多發(fā)性骨髓瘤患者血漿中的M蛋白會(huì)干擾反定型，自身免疫性溶血性貧血患者血漿中高濃度的自身抗體會(huì)包被在紅細(xì)胞表面引起血型鑒定困難，淋巴瘤和膠原疾病如紅斑狼瘡患者的冷自身抗體會(huì)干擾反定型。以上疾病引起ABO血型正反定型不符的特點(diǎn)應(yīng)加以注意。除此之外，臨床上尚存在一種特殊的“類同種抗體”，它亦能導(dǎo)致ABO血型正反定型不符[8]，此類抗體具有類似于同種抗體的性質(zhì)，同時(shí)又有針對(duì)自身紅細(xì)胞上該抗體相對(duì)應(yīng)血型抗原的自身抗體的性質(zhì)。另外，臨床輸血實(shí)踐中排除以上原因后也應(yīng)對(duì)臨床治療影響予以考慮，如近期輸血、造血干細(xì)胞移植、過客淋巴細(xì)胞綜合征、免疫抑制治療、大量輸液等。對(duì)急需輸血挽救生命的患者，若無法快速準(zhǔn)確定型，在和臨床及患者家屬溝通后進(jìn)行血液相容性輸注，即輸注O型Rh同型紅細(xì)胞和AB型Rh同型血漿為應(yīng)急輸血方案。

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