白果內酯對大鼠心肌抗氧化機制的初步研究

余俊鍵　陳瑜　楊升平

摘要：目的 ?研究白果內酯的心肌的保護作用。方法 ?于2018年3月～12月選取30只健康SD大鼠，隨機分為標準組、鹽水組、白果內酯高、中、低劑量組，各6只。高、中、低劑量組大鼠分別以不同藥物劑量灌胃，鹽水組給生理鹽水2 ml，標準組不做任何處理，連續給藥1周后，取大鼠心肌組織，制作勻漿，測定各組心肌組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）的含量。結果 ?鹽水組與標準組SOD、MDA、CK、LDH含量比較，差異無統計學意義（P>0.05）;低劑量組SOD與標準組無統計學差異，中、高劑量組SOD高于標準組;高、中、低劑量組MDA低于標準組，CK和LDH均高于標準組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 ?白果內酯可以增強心肌組織抗氧化作用，避免細胞膜的破壞，抑制有害物質釋放入血，最終達到心肌保護的目的。

關鍵詞：白果內酯;心肌保護;抗氧化作用

中圖分類號：R285.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.19.024

文章編號：1006-1959（2019）19-0083-03

Preliminary Study on the Anti-Oxidation Mechanism of Bilobalide in Rat Myocardium

YU Jun-jian1，CHEN Yu2，YANG Sheng-ping3

（1.Department of Cardiothoracic Surgery，the First Affiliated Hospital of Gannan Medical College， Ganzhou 341000，Jiangxi，China;

2.Department of Blood Transfusion，the First Affiliated Hospital of Gannan Medical College，Ganzhou 341000，Jiangxi，China;

3.Department of Internal Medicine，Sujbect One，Shangyou County Traditional Chinese Medicine Hospital，

Gansu 341200，Jiangxi，China）

Abstract：Objective ?To study the protective effect of bilobalide on myocardium. Methods ?30 healthy SD rats were randomly divided into standard group， saline group and bilobalide high， medium and low dose groups from March to December 2018，6 in each group. Rats in the high， middle and low dose groups were intragastrically administered with different drug doses. The saline group was given 2 ml of normal saline. The standard group did not do any treatment. After 1 week of continuous administration， the rat myocardial tissue was taken to prepare a homogenate. The content of superoxide dismutase （SOD）， malondialdehyde （MDA）， creatine kinase （CK）， and lactate dehydrogenase （LDH） in myocardial tissue.Results ?There was no significant difference in the content of SOD， MDA， CK and LDH between the saline group and the standard group （P>0.05）. There was no significant difference between the low dose group and the standard group. The SOD of the medium and high dose group was higher than that of the standard group. MDA in the middle and low dose groups was lower than the standard group， and CK and LDH were higher than the standard group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?Bilobalide can enhance the anti-oxidation of myocardial tissue， avoid the destruction of cell membrane， inhibit the release of harmful substances into the blood， and finally achieve the purpose of myocardial protection.

Key words：Bilobalide;Myocardial protection;Antioxidant effect

白果內酯（bilobalide）是一種倍半萜類化合物，來源于銀杏葉提取物。目前有文獻報道，白果內酯對腦缺血中的神經功能恢復具有顯著的保護作用[1]，在心臟缺血再灌注損傷中，可以降低對心肌細胞的氧自由基作用、減少心肌酶的釋放，降低凋亡的發生，從而達到心肌的保護作用[2]。同樣也有諸多相似的實驗進一步證實了白果內酯在心肌梗死中的保護機制。研究顯示，在人工處理的急性心肌梗死大鼠模型中，給予白果內酯干預的大鼠心肌梗死的范圍和程度均可以明顯減少[3，4]，其具體的機制也在后期的實驗中得到證實：白果內酯具有擴張血管，增加冠脈血流，增加氧供，減慢心率，降低心臟氧耗，改善心臟功能，保護心肌細胞的作用[5-7]。但目前關于白果內酯藥理作用的研究不多，為研究其抗氧化作用，本研究旨在分析白果內酯的藥理作用，為后期更進一步的研究提供理論依據。

1材料與方法

1.1實驗動物 ?于2018年3月～12月選取健康SD大鼠30只，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，動物中心許可證號：SCXK（湘） 2016-0428，動物合格證號：HNSLKJD：2016-0018，級別：清潔級，體重250～300 g，雌雄各半。本研究通過實驗動物倫理委員會審批，實驗過程符合實驗動物倫理要求。

1.2實驗藥品與儀器 ?白果內酯（天津市科曼思特醫藥科技發展公司，輝瑞制造，生產日期：20151018），相關試劑盒（山東邁威生化有限公司，生產日期：2016.11），MIKRO22R臺式冷凍離心機（德國HETTICH），超級恒溫水浴（山東科威醫療器械有限公司）。

1.3建立大鼠模型 ?將30只健康SD大鼠按照隨機數字表法分為標準組、鹽水組、高劑量組、中劑量組、低劑量組五組，每組6只。模型建立：高、中、低劑量組大鼠分別以2.5、5、10 mg/kg白果內酯灌胃，鹽水組大鼠2 ml生理鹽水灌胃，標準組不做其他處理，自然飼養。所有大鼠在7 d后處死，剪取心尖部組織，大約1～2 g，制作組織勻漿。

1.4觀察指標 ?按試劑盒使用說明，測定心肌組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肌酸激酶（CK）及乳酸脫氫酶（LDH）的含量。

1.5統計學分析 ?實驗數據用GraphPad Prism 5.0軟件進行統計，計量資料采用（x±s）表示，作單因素方差分析（F檢驗）及組間k檢驗，α=0.05，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1白果內酯對大鼠心肌組織中SOD活性的影響 ?鹽水組與標準組SOD含量比較，差異無統計學意義（P>0.05）;低劑量組與鹽水組SOD含量比較，差異無統計學意義（P>0.05）;中劑量組及高劑量組與鹽水組SOD含量比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。同時高、中、低劑量組SOD含量逐漸下降，具有劑量依賴性。

2.2白果內酯對大鼠心肌組織中MDA含量的影響 ?鹽水組MDA含量與標準組比較，差異無統計學意義（P>0.05）;高、中、低劑量組MDA含量均低于鹽水組比較，差異有統計學意義（P<0.05）;同時高、中、低劑量組MDA含量比較，差異有統計學意義（P<0.05）;MDA含量隨用藥劑量升高而降低，具有劑量依賴性，見表3。

2.3白果內酯對大鼠心肌組織中CK活性的影響 ?鹽水組CK含量與標準組比較，差異無統計學意義（P>0.05）;高、中、低劑量組CK含量均高于鹽水組，差異有統計學意義（P<0.05）;高、中、低劑量組間CK含量比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表3。

2.4白果內酯對大鼠心肌組織中LDH活性的影響 ?鹽水組LDH含量與標準組比較，差異無統計學意義（P>0.05）;高、中、低劑量組LDH含量與鹽水組相比，差異有統計學意義（P<0.05）;但高、中、低劑量組間LDH含量比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表4。

3討論

心肌缺血后再灌注損傷是指心肌缺血恢復正常灌注但組織損傷呈現進行性加重的病理過程[8]。心肌缺血后再灌注損傷的發生可能與細胞內鈣離子過度蓄積、氧自由基增多、酸中毒及心肌纖維能量代謝障礙等機制有關[9]。缺血后再灌注首次是1960年Jennings ?等在犬科動物身上發現的，研究發現缺血后再灌注的犬科動物其心肌壞死程度加深[10]，而人體中“心肌缺血再灌注損傷”這個概念是在1985年被Braunwald等提出[11]。

心臟外科手術體外循環期間提高和加強心肌缺血再灌注損傷一直是一個難題，目前國內外學者在理論和機制方面進行了大量深入研究，提出了很多的方法和藥物，但效果仍未達到臨床要求，如何克服實驗中的困難，突破臨床阻礙是當前的一個難題。

心肌缺血后再灌注損傷的缺血心肌恢復正常，但組織損傷呈進行性加重，心肌超微結構、心功能和電生理等一系列損傷性變化表現得更為突出，患者可發生嚴重的心律失常而導致猝死[12，13]。臨床研究表明，檢測心肌損傷程度最有效最直觀的方法是檢測心肌酶，其中包括CK、CKMB、LDH等，因此選擇與臨床保持一致性的檢測指標對本次研究具有巨大的優勢。SOD是消除缺血再灌注損傷中氧自由基等有害物質的主力軍;相反MDA是心肌損害的標志物，是氧自由基作用脂質發生過氧化反應最終的產物，且具有細胞毒性，MDA的高低可反映心肌損害程度;CK廣泛地存在于骨骼肌、平滑肌。心肌組織中，因為其特殊性，存在于細胞質與線粒體中，對參與ATP的形成具有重要作用，其在心肌損傷的測定中敏感性最高， LDH具有5個亞型，出現心肌損傷時以LDH-1、LDH-2釋放入血，可以作為監測心肌損傷的重要指標，并且LDH在心肌損傷過程中持續時間最長[14]。

臨床和實驗條件下檢測指標的區別在于血液中心肌酶的含量與心肌組織中心肌酶的含量成反比。心肌組織中的酶活性高，參與缺血再灌注損傷的程度也越高，被破壞入血的含量隨之減少;反之，血液中心肌酶含量高，說明心肌細胞損害嚴重。本文通過設置標準組和鹽水組的大鼠作為對照，白果內酯高、中、低劑量組分別以不同藥物劑量給大鼠進行連續1周的灌胃，通過測定大鼠心肌組織中SOD、MDA、CK、LDH的含量來觀察白果內酯對心肌組織抗氧化的作用，研究白果內酯的心肌的保護作用。本研究中：鹽水組與標準組比較， SOD、MDA、CK、LDH含量均未見特殊變化，差異無統計學意義（P>0.05）;與鹽水組相比，各個給藥組均可以不同程度提高大鼠心肌組織中SOD、CK、LDH的含量，差異有統計學意義（P<0.05）;各個給藥組之間比較，CK、LDH含量不隨劑量變化波動，SOD、MDA表現出劑量依賴性。說明白果內酯可以增加心肌細胞內去氧自由基作用，降低心肌細胞中MDA的含量，提高心肌組織中SOD活性，同時隨著藥物劑量的增加，MDA的含量隨之減低，SOD含量升高。可以認為白果內酯可增強心肌組織中SOD、LDH、CK的活性，增強心肌缺血再灌注損傷時抗氧化作用，發揮去氧自由基自由，避免細胞膜的破壞，抑制心肌酶的釋放入血，最終減輕心肌損傷的程度。

綜上所述，白果內酯廣泛參與在心肌保護各種的機制中，可減輕缺血缺氧帶來的心肌損傷，有效保護心肌組織，但更進一步的機制尚需要研究完善，今后將進一步觀察白果內酯改善患者心功能，減少體外循環導致的心肌損害的作用，為臨床心血管病的治療提供理論依據。

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