HMGB1在宮頸癌患者中的表達(dá)及臨床意義

秦天生，魏林珍，馬曉梅，楊文旭，張 艷

（1.甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；2.隴南市西和縣西高山鎮(zhèn)衛(wèi)生院，甘肅 隴南 742100；3.蘭州錦華醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

宮頸癌是最常見的婦科腫瘤，全球每年大約有311 365人因?qū)m頸癌去世[1]。近年來，隨著宮頸癌發(fā)病率逐漸年輕化，給社會(huì)及家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，對(duì)患者的生活質(zhì)量也造成嚴(yán)重影響[2]。目前，宮頸癌的診斷主要依靠病理檢查，但此方法煩瑣且有創(chuàng)，越來越多的研究者致力于尋找新型簡(jiǎn)捷快速且微創(chuàng)宮頸癌診斷方法。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是一種DNA結(jié)合蛋白，在細(xì)胞內(nèi)參與DNA的復(fù)制、重組、轉(zhuǎn)錄和修復(fù)，在細(xì)胞外參與促進(jìn)組織修復(fù)、促進(jìn)炎癥反應(yīng)、激活免疫反應(yīng)、促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)等[3]。研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1在多種腫瘤組織及細(xì)胞中過度表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移以及患者預(yù)后等密切相關(guān)[4]，提示HMGB1可能成為腫瘤進(jìn)展的標(biāo)記，但在宮頸癌中報(bào)道較少，缺乏可靠依據(jù)。因此通過分析HMGB1在血清中的濃度以及在宮頸癌組織中的表達(dá)情況，希望為早期診斷宮頸癌并初步分析其與宮頸癌的關(guān)系提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2019年1月—12月甘肅省人民醫(yī)院65例新入院宮頸癌患者為觀察組，均為組織病理學(xué)證實(shí)，年齡25～64歲，平均（47.21±6.21）歲；同時(shí)選取同期65例慢性子宮頸炎患者為對(duì)照組，年齡 45～69 歲，平均（48.91±5.33）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）對(duì)本次研究項(xiàng)目知情同意；（3）無其他重要臟器功能受損；（4）意識(shí)清醒。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重高血壓病、感染患者；（2）心腦血管病變；（3）肝功能不全者；（4）妊娠及哺乳期婦女；（5）近期使用過化療藥物者。另外收集宮頸癌術(shù)后病變組織及宮頸癌周圍正常組織的病理石蠟標(biāo)本各30例，通過免疫組化方法分析HMGB1的表達(dá)。所選對(duì)象均自愿參與，本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組患者的一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 ELISA法 收集兩組患者入院當(dāng)天抗凝靜脈血標(biāo)本，要求患者隔夜空腹8 h以上抽取靜脈血，并于1 h內(nèi)離心收集上清，3 000 r/min離心10 min，將上層血清于-80℃的冰箱保存，血清HMGB1水平測(cè)定應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）檢測(cè)，ELISA試劑盒購(gòu)自江蘇晶美生物科技有限公司。

1.2.2 組織中HMGB1免疫組化分析 收集宮頸癌術(shù)后病變組織及宮頸癌周圍正常組織的病理石蠟標(biāo)本，制成5 μm切片，采免疫組化法檢測(cè)組織中HMGB1的表達(dá)，兔抗人HMGB1多克隆抗體（實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋倍數(shù)為1∶400）購(gòu)自Abcam公司。

1.3 觀察指標(biāo)

免疫組化染色結(jié)果由專業(yè)人員閱片，HMGB1表達(dá)在胞漿內(nèi)，部分細(xì)胞核中也有一定程度表達(dá)。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)弱（記為a）：未著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。每張切片選取5個(gè)典型高倍鏡視野，根據(jù)陽性細(xì)胞在全部組織細(xì)胞中所占比例計(jì)算陽性細(xì)胞百分比（記為b）：1%～10%為1分，11%～50%為 2分，51%～80%為 3分，81%～100%為 4分。最后以 a+b進(jìn)行半定量分析：0分為-，1～2分為+，3～5 分為++，6～7 分為+++。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清HMGB1的水平比較

對(duì)照組和觀察組的術(shù)前血清HMGB1水平分別為（3.23±1.83）ng/mL 和（5.62±1.25）ng/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。觀察組血清HMGB1水平明顯高于對(duì)照組，提示隨著病變升級(jí)，HMGB1含量逐漸升高。

2.2 HMGB1在宮頸癌組織內(nèi)的表達(dá)情況

免疫組化染色顯示：正常組織中，HMGB1主要表達(dá)于細(xì)胞核中，表達(dá)較宮頸癌組織減少，且染色減弱（見圖1），而宮頸癌組織中，HMGB1陽性呈棕色或褐色，主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)（見圖2）。HMGB1在宮頸癌病變組織內(nèi)的表達(dá)水平明顯高于周圍正常組織（P＜0.05），見表1，提示正常組織和宮頸癌組織中HMGB1的表達(dá)百分比依次升高。

圖1 HMGB1在正常組織中的表達(dá)（SP法×200）

圖2 HMGB1在宮頸癌組織中的表達(dá)（SP法×200）

表1 HMGB1在宮頸癌組織和宮頸癌周圍正常組織內(nèi)的表達(dá)情況（n）

3 討論

3.1 尋找宮頸癌新靶點(diǎn)的必要性

我國(guó)宮頸癌日趨年輕化，是世界上宮頸癌負(fù)擔(dān)最重的國(guó)家之一，尤其偏遠(yuǎn)地區(qū)，宮頸癌易發(fā)、高發(fā)。宮頸癌發(fā)病因素較多，通常與人乳頭狀瘤病毒（HPV）的慢性反復(fù)感染有關(guān)，有些患者還與不潔性生活、早產(chǎn)、密產(chǎn)等有關(guān)[5]。宮頸癌早期若未得到及時(shí)有效的治療，隨著病情發(fā)展將會(huì)破壞輸尿管，逐漸出現(xiàn)腎臟積水，嚴(yán)重甚至需要腎造瘺，對(duì)患者的身心健康造成巨大影響。所以如何早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌、了解宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展、改善宮頸癌患者的預(yù)后變得尤為重要[6]。目前常用的檢查診斷方法包括HPV、TCT、超聲、核磁等檢查，雖能在一定程度上檢出宮頸癌，但想要方便簡(jiǎn)單又經(jīng)濟(jì)地診斷宮頸癌效果仍不理想。宮頸活檢是診斷宮頸癌的關(guān)鍵，但是HMGB1相關(guān)檢查血標(biāo)本簡(jiǎn)單易取，取樣不會(huì)對(duì)患者造成痛苦以及增加感染的機(jī)會(huì)，因此，尋找新的宮頸癌靶點(diǎn)顯得尤為重要。

3.2 HMGB1測(cè)定可作為診斷早期宮頸癌的指標(biāo)

HMGB1是1973年由Goodwin提取的一組DNA結(jié)合蛋白，分子量在25～30 KD。在非惡性細(xì)胞中，HMGB1主要存在于細(xì)胞核內(nèi)。在腫瘤細(xì)胞中，HMGB1可存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核[7]，它能識(shí)別糖蛋白和糖脂的特異性低聚糖結(jié)構(gòu)，參與多種生理和病理過程，發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1在多種腫瘤組織中高表達(dá)，如胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、肝癌、胰腺癌、鼻咽癌、喉癌[9-14]等，已經(jīng)成為近年來腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。HMGB1在腫瘤細(xì)胞中主要作為癌基因存在，它的生物學(xué)活性主要是通過與其相應(yīng)受體的相互作用而實(shí)現(xiàn)，HMGB1通過與高親和力蛋白結(jié)合，參與免疫應(yīng)答等生理、病理過程，如通過P38MAPK、P44/P42MAPK、SAPK/JNK信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和成熟[15]。本研究選取宮頸癌確診患者與正常宮頸進(jìn)行免疫組化分析，發(fā)現(xiàn)觀察組HMGB1水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。可見，HMGB1在宮頸癌組織中呈高表達(dá)，可能參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，監(jiān)測(cè)其水平能夠有效反映宮頸癌的病變程度。此外，為進(jìn)一步探討HMGB1對(duì)宮頸癌診斷的應(yīng)用價(jià)值，將血HMGB1檢測(cè)與慢性子宮頸炎的血檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，HMGB1在宮頸癌的血中升高。提示HMGB1水平與宮頸癌腫瘤負(fù)荷相關(guān)，血漿中增高的HMGB1水平可能是由于宮頸癌腫瘤細(xì)胞分泌的HMGB1進(jìn)入血液中而引起。

綜上所述，血清HMGB1水平變化在宮頸癌患者中具有重要的臨床意義，分析血清HMGB1濃度，可作為診斷早期宮頸癌的重要指標(biāo)，但仍然需要與其他多項(xiàng)金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)聯(lián)合進(jìn)行分析，以明確宮頸癌診斷。本研究仍存在一定的局限性，如HMGB1的濃度與治療反應(yīng)之間的相關(guān)性無法評(píng)價(jià)、所選樣本量相對(duì)較小、統(tǒng)計(jì)力量有限，有待擴(kuò)大樣本做深入研究分析。