流式細胞儀檢測Ｂ系淋巴細胞白血病微小殘留的研究進展

郭鵬舉

【摘 要】流式細胞術（FCM）也就是識別白血病或腫瘤細胞的免疫表型標志（LAIP）與正常細胞的不同之處，通過多參數分析，將非正常細胞群表達的抗原識別出來，從而辨別正常細胞與白血病或腫瘤細胞的一種技術。這種技術的靈敏度較高，能夠識別出有核細胞內10-3—10-5的白血病細胞，這種方法操作比較簡便，覆蓋范圍較廣，可以進行定量分析，且特異性強。可以對白血病微小細胞殘留病（MRD）進行方便有效的檢測，在為該疾病后續的診斷提供依據的同時指導臨床的個體化治療，以及治療方案的制定，也可以對白血病的復發進行有效的預測，對病人的病情進行可靠的判斷。隨著近幾年對流式細胞術的進一步研究，流式細胞儀設備被不斷的升級，同時，新的熒光標記抗體技術不斷問世，以及多色熒光標記抗體的開發，單一免疫表型的流式細胞術發展到三色、四色最終發展到六色，這樣的進步使LAIP更容易被檢測出來。通過查閱近年來相關FCM文獻，本文就流式細胞術在B淋巴細胞性白血病（B-ALL）MRD檢測中的進展進行分析。

【關鍵詞】流式細胞術;白血病;微小殘留

【中圖分類號】R733【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0019（2019）20-0-02

急性B淋巴細胞性白血病（B-ALL）是急性淋巴細胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）最常見的亞型，這一型白血病的出現表明惡性轉化的B淋巴系前體細胞在克隆增殖，其發病率約占成人ALL的75%。目前，經過醫療技術治療策略的進步，經過系統化療后70%-90%的ALL患者可完全緩解，但是如果有微小殘留病（ minimal residual disease，MRD）的病人，疾病復發就有較高的幾率，所以MRD是ALL患者疾病復發的獨立危險因素，所以MRD的檢出對于患者存活率的提高具有重要意義。

1 MRD檢測的意義

目前，ALL的治療因不斷改進的治療策略以及新型化療藥物的研發問世已經有了很大的進步，經專業系統化療方案治療后，患者完全緩解率可達70%-90%，3-5年無進展生存率可達60%，但ALL患者20%的疾病復發率仍然不容忽視。相關研究指出，一般情況下發病時，ALL患者體內的白血病細胞數約為1012/L，而在完全緩解后，患者體內仍殘留有108-109個白血病細胞，這些殘留的白血病細胞即MRD，是造成ALL復發的根本原因，而復發機率與殘留的白血病細胞數量呈正比例關系，復發機率上升的同時，時間也隨之縮短。德國Cave等歸納了很多白血病化療患者的信息，得出了一個結論：有MRD者的復發時間比無MRD者要短了很多，有MRD的患者復發率也較高，是無MRD患者的5.7倍。同時Cave等研究也顯示，有MRD者的死亡率是無MRD者的10倍，MRD≥10-2患者復發的危險性較MRD≥10-3患者相比會增加16倍速。據此結論，可以認為在疾病各個階段，ALL患者復發率和死亡率都是隨著殘留的白血病細胞數的增加而呈上升趨勢。研究認為，經過系統治療獲得完全緩解的ALL患者，若存在MRD≥10-4的情況，疾病在任何時間點均有復發的風險，因此，對MRD水平進行定期監測對于控制疾病復發，具有極其重要的意義。同時，MRD也可以輔助疾病的危險分層，根據對CpG島甲基化聯合MRD水平的測定來對對疾病進行危險度分組，將會成為未來發展的方箱，并為決策治療提供相應的數據支撐。

2 FCM對B-ALL免疫表型的分型及在MRD監測中的準確性和可靠性

對于白血病患者來說，抗原表達會體現出不同于正常人的表達模式，而通過這一規律，分析白血病患者異常表型，可以進行白血病的免疫分型及診斷。現如今，在ALL患者的免疫分型和MRD水平監測中，FCM檢測技術已被廣泛應用于臨床，成為適用于大多數B-ALL患者的檢測技術。

國外研究者將PCR與FCM的檢測結果進行對比，以評估FCM的敏感性和可靠性，該研究分別應用PCR和FCM方法，同時對62例ALL治療獲CR患者骨髓進行檢測，檢測結果為62例病例中，兩種方法結果不一致的僅有兩例，而對60例患者的檢測結果均為相同，其中檢出MRD≥10-4者12例，<10-4者48例，兩種方法的一致性可以達到96.77%，這一結果表明兩種方法具有良好的相關性。

3 FCM在B-ALL患者MRD檢測中的進展及展望

經過正規治療后的B系淋巴細胞白血病患者，在骨髓增生的階段，也會有正常的B系足細胞存在，但是傳統的單色免疫標志無法識別正常的B系祖細胞將不會被識別，為了解決這一問題，需要找到在腫瘤細胞表達的免疫表型，即白血病相關免疫表型（Leukemia associated immunophenotype，LAIP）進行FCM分析，LAIP有三種類型，第一種主要是T淋巴細胞，第二種為異常前體B淋巴細胞表型，常用的免疫標志物有CD19/CD34/CD10/CD58等，第三種是由融合基因表達的融合蛋白，而MRD檢測的CD分子與融合蛋白的表達有關。因此，單色免疫標志被三色流式細胞術取代，利用三色流式細胞術檢測LAIP，這樣可以增加后期MRD的監測結果的可靠性和準確性，也可作為白血病診斷的依據，同時可以對于病人的疾病進展進行預測，評估復發的可能性，給與臨床準確的指導，讓醫生能夠更好地進行下一步疾病干預，減少疾病死亡率。其中主要應用的是三色和四色FCM。

用流式細胞術檢測MRD的方式有很多種。國外研究者開發了一種新的方法，這種方法是用層次聚類分析進行的，跟以往所應用的傳統方法有較高的關聯。如果能夠將這種方法和方便使用的軟件結合，或許可以提高分析技術，達到自動化的全過程分析。實現全自動分析MRD的目標，使這一過程更加精確的同時，可操作性也更高。

參考文獻

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