我院腸桿菌屬ESBLs耐藥情況及CTX-M-1、SHV型耐藥基因研究

劉建強 趙志國 黃冬梅

【摘 要】目的：了解2016-2018年本院腸桿菌屬分布情況及部分耐藥基因分型。方法：利用WHONET5.6軟件分析耐藥率變化。針對產ESBLs酶菌株進行CTX-M-1、SHV型耐藥基因分型。結果：2016-2018年期間共得到腸桿菌屬124株;大多數菌株來自神經外科（19%），標本類型主要為痰（56%）;腸桿菌屬對青霉素類、頭孢菌素類、單環β-內酰胺類抗菌素均存在較高耐藥率（>20%），對復方新諾明的耐藥率明顯呈上升趨勢。有46（37.1%）株對ESBLs耐藥菌株，主要為CTX-M-15型（21.7%）。結論：建議通過更多的研究建立一套完整的基因耐藥監測體系。

【關鍵詞】腸桿菌屬;ESBLs;耐藥;CTX-M-1;SHV

Abstract：Objective To understand the distribution of Enterobacter and the types of drug resistance genes in the isolated specimens of our hospital from 2016 to 2018. Methods：The change of drug resistance rate was analyzed by WHONET5.6 software. CTX-M-1 and SHV-type genotyping were performed on strains producing ESBLs.Results： A total of 124 strains of Enterobacter were obtained during 2016-2018;Most of the strains were from neurosurgery（19%）.The type of specimen was mainly sputum （56%）; Enterobacteriaceae have high resistance rate to penicillins，cephalosporins and monocyclic β-lactam antibiotics， which is more than20%.The resistance rate of Nomin is rising clearly. There were 46（37.1%）strains resistant to ESBLs， mainly CTX-M-15（21.7%）.Conclusions：It is suggested that a complete set of genetic drug resistance monitoring procedures should be established through more research.

Key words： Enterobacter;ESBLs;Drug resistance;CTX-M-1;SHV

【中圖分類號】R378.2【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）20-0-02

腸桿菌屬隸屬于腸桿菌科，廣泛分布于自然環境中，目前已經發現的包括14種[1]，是重要的在院內感染機會性致病菌之一。而且其耐藥機制是復雜的其中對于介導產ESBLs酶分子機制一直是熱點，且具有一定的區域特點。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源：2016-2018年我院門診病人與住院病人送檢至病原微生物實驗室保存的菌株。

1.1.2 主要試劑與設備：血·腸道菌分隔瓊脂平板、VITEK2 Compact、天根細菌基因組DNA提取試劑盒、PCR試劑盒、PCR儀、高速冷凍離心機、電泳儀、全自動凝膠成像分析系統。

1.2 方法

1.2.1 樣本信息收集：通過醫院LIS系統收集2016-2018年期間門診病人與住院病人送檢標本經分離鑒定為腸桿菌屬的菌株。

1.2.2分析方法：利用WHONET5.6軟件對所收集菌株信息按標本類型、科室分布進行分析。

1.2.3 產ESBLs酶的菌株收集：根據CLSI2016版指南對所收集的目次菌株以紙片擴散法進行初篩試驗、確認試驗以篩選出產ESBLs的菌株，質控菌株是大腸埃希菌ATCC 25922。

1.2.4 基因組DNA提取與PCR：按天根基因組試劑盒操作步驟提取目的菌株基因組DNA。分別以CTX-M-1、SHV基因設計引物進行PCR擴增。

1.2.5PCR產物電泳與測序：配制1.5%瓊脂糖凝膠，在100V電壓下電泳，對凝膠成像分析，將符合要求的PCR擴增產物送至上海生工測序。

2 結果

2.1 目的菌株構成、類型及科室分布情況 2016-2018年期間我實驗室共分離出腸桿菌屬124株，所有的送檢標本類型中主要為痰、尿液、血標本，且以神經外科、泌尿外科、重癥醫學科1三個科室腸桿菌屬檢出率最高。

2.2 腸桿菌屬耐藥情況 2016-2018年腸桿菌屬耐藥率變化情況（詳見表1），存在46株對ESBLs酶耐藥。

2.3 PCR測序結果 有24株目的菌株測序成功，6株為CTX-M-3型ESBLs（13%）、10株為CTX-M-15型ESBLs（21.7%）、8株為SHV12型ESBLs（17.4%）。

3 討論

本研究中利用WHONET5.6軟件對2016-2018年期間我院病原微生物實驗室得到的所有菌株進行分析發現，大多數目的菌株分離自神經外科（19%）、泌尿外科（11%）、重癥醫學科1（9%），其標本類型主要是痰、尿液、血，與John N Kateregga等[2]研究一致。而我國學者盧兆蓮等研究[3]顯示科室分布為骨創傷科為主（21.2%）、老年綜合病房（12.3%）、神經外科（11.6%），考慮與機體抵抗力比較差，或者接受過侵入性操作等因素有關。復方新諾明的耐藥率明顯呈上升趨勢，而青霉素類、頭孢類菌素類、單環β-內酰胺類抗菌素的耐藥率盡管呈下降趨勢，但其耐藥率仍處于較高水平，其中頭孢曲松的耐藥率高達32.7%，這與盧兆蓮等[3]等研究相似。在郭普等[4]的研究中發現腸桿菌屬細菌對喹諾酮類、氨基糖苷類抗菌素有較高的耐藥率，而我院腸桿菌屬對喹諾酮類抗菌素的耐藥性呈下降趨勢，之所以出現這種耐藥差異筆者認為可能與不同地區臨床醫生經驗性用藥習慣以及地域環境等綜合因素有關。經基因進行分析結果表明CTX-M-15型所占比例高于SHV12型，可見我院CXT-M-1型ESBLs酶耐藥基因比較常見，這與Simon G等的研究是一致的[5]。這種耐藥性可通過結合、傳導和轉化等方式在細菌之間傳遞[6]，導致其產ESBLs酶的基因分型更為復雜，形勢更為嚴峻。

4 結論

我院腸桿菌屬主要存在于自身抵抗力低的病人，隨痰液、尿液、血液傳播，以CTX-M-3型、 CTX-M-15型、SHV12型ESBLs耐藥為主，亦對其他抗菌素存在耐藥現象，其耐藥機制是復雜的，需要進一步探索，從基因層面監測其發展方向，為更合理的臨床用藥提供指導。

參考文獻

王輝譯.（美）James H.Jorgensen，Michael A.Pfaller著.臨床微生物學手冊[M].第1卷 第11版[M].北京：中華醫學電子音像出版社，2017.06：920-923.

John N Kateregga， Ronah Kantume， Collins Atuhaire，Musisi Nathan Lubowa and James G Ndukui，（2015） BMC Pharmacology and Toxicology，16，14.

盧兆蓮，公衍文，薛煉，等.陰溝腸桿菌的臨床分布及耐藥性變遷[J].中國感染與化療雜志， 2015（5）：459-461.

郭普，喬艷，李靜.2017年蚌埠醫學院第一附屬醫院細菌耐藥性監測[J].中國感染與化療雜志，2018，18（06）：80-86.

Simon G，Vincent F，Jacquier Hervé，etal.Elective distribution of resistance to beta-lactams among，Enterobacter cloacae， genetic clusters[J].Journal of Infection， 2018.

謝朝云，熊蕓，孫靜，等.聚團腸桿菌感染分布與耐藥性分析[J].中國微生態學雜志， 2015，27（9）：1047-1049.