miR-592靶向Cep135調控小鼠胚胎干細胞自我更新及分化

白振東， 李培昕， 張寧彥， 程 健， 張 敬， 張 軍

(1. 同濟大學醫學院，上海 200092； 2. 同濟大學生命科學與技術學院， 上海 200092)

胚胎干細胞(embryonic stem cells, ESCs)是最為原始的干細胞，來源于哺乳動物囊胚的內細胞團。目前，理論上認為ESCs具有自我更新和分化成所有主要細胞系的能力[1]，因此，ESCs具有廣泛的應用前景。ESCs的自我更新能力是受到嚴格調控的，Oct4、Sox2和Nanog被認為是多能性調控網絡的關鍵因子[2]。Sympk能夠與Oct4相互作用，進而促進ESCs的自我更新和多能性[3]，而Sox2在ESCs自我更新過程中也發揮了重要的作用，并且它是產生可誘導多能干細胞的必要因素[4]。此外，Nanog能夠與Oct4和Sox2協同作用，以調控ESCs的全能性[5]。

microRNA(miRNA)是一種大小為20～25個堿基的非編碼小分子RNA。越來越多的研究表明，miRNA參與了干細胞特性的調控[6-7]。miRNA在干細胞自我更新、分化、信號轉導和代謝凋亡等一系列的生理活動中發揮了關鍵的調控作用[8-10]。已有研究表明，miR-294/miR-302能夠促進ESCs的增殖，抑制其分化[11]。而miR-592通過抑制膠質細胞的形成，從而促進神經干細胞向神經元的分化[12]，其在ESCs自我更新及分化過程中可能也發揮了一定的調控作用。本研究以KO-miR-592 mESCs及正常mESCs為工具細胞，利用qRT-PCR及Western印跡法分析miR-592調控相關基因，從而在mESCs自我更新和分化過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 細胞培養及細胞轉染

小鼠胚胎干細胞(mESCs)細胞株由同濟大學醫學院薛志剛教授贈予；敲除miR-592的mESCs細胞株(KO-miR-592 mESCs)購于美國加州大學戴維斯分校；mESCs培養基成分為DMEM、15% FBS、GlutaMAX、NEAA、LIF及β-Mercaptoetanol。在37℃、5% CO2的培養箱中進行培養。將5×105個mESCs接種在含有滋養層細胞的6孔培養板中，當細胞融合度達到30%～50%時，采用XfectTMRNA轉染試劑(Clontech)將表達質粒轉染至mESCs中。……