肌肉注射泰地羅新注射液對豬安全性研究

閆超群，張 申，謝 順，曾松情，黃春梅，顧 欣，曹 瑩，黃士新，黃顯會

(1.華南農業大學獸醫學院,廣東廣州510642；2.上海市動物疫病預防控制中心，上海長寧201103)

泰地羅新(Tildipirosin)是新型十六環大環內酯類抗生素，和其他大環內酯類抗生素一樣，泰地羅新的抗菌機理主要是因為它能與細菌核糖體的50S亞基相結合。因而它能阻礙肽鏈的合成與延長，使細菌蛋白質的合成受阻，達到抗菌的效果[1-6]。泰地羅新主要用于由豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌、支氣管敗血波氏桿菌、副豬嗜血桿菌等引起的豬呼吸道疾病(SRD)，以及由牛溶血性曼氏桿菌(Mannheimiahaemolytica), 多殺性巴氏桿菌, 睡眠嗜組織菌(Histophilussomni)等引起的牛呼吸道疾病(BRD)。歐盟藥品管理局(EMA)和美國食品藥品監督管理局(FDA)已批準泰地羅新注射液，商品名為Zuprevo。泰地羅新注射液單次給藥即可提供全程治療，在牛和豬的給藥劑量均為4 mg/kg·bw，牛的給藥方式為皮下注射，豬的給藥方式為肌肉注射[1,7-8]。本試驗對國產泰地羅新注射液在靶動物豬體內進行了安全性試驗, 為其臨床上安全用藥提供試驗依據。泰地羅新化學式見圖1。

圖1 泰地羅新化學結構式

1 材料與方法

1.1 藥品和試劑 泰地羅新注射液，含量4%(100 mL∶4 g)，批號：20150401，由上海同仁藥業有限公司提供。血清生化指標測定試劑,深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司。

1.2 儀器設備 全自動血液學分析儀：BS-300型，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司。血液生化分析儀：BS-5 000型，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司。光學顯微鏡：XSP-2C型，上海光學儀器五廠。顯微照相設備：Axioskop2 plus型，德國ZEISS公司。

1.3 實驗動物 健康二元雜交豬24頭，2月齡左右，體重為15 kg左右。試驗前按常規飼養，自由飲水和采食，飼料為全價日糧(不含抗菌藥物)，觀察兩周。

1.4 分組與給藥 選取臨床表現健康的豬進行試驗。 24頭豬隨機分為4組，各組6頭，設為空白對照組(生理鹽水)、泰地羅新注射液推薦劑量組(4 mg/kg·bw)、3倍推薦劑量組(12 mg/kg·bw)、5倍推薦劑量組(20 mg/kg·bw)，給藥方式均為單次頸部肌肉注射給藥。

1.5 檢查指標

1.5.1 一般臨床觀察 在給藥前及給藥后觀察豬的精神、采食、飲水、排泄等一般臨床行為，并于給藥前、給藥后第7天和第14天對豬進行稱重。

1.5.2 血液常規指標 用血液分析儀測定全血中白細胞計數(WBC)、紅細胞計數(RBC)、紅細胞分布寬度變異系數(RDW)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞容積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCHC)、血紅蛋白(HGB)等8項血常規指標。

1.5.3 血清生化指標 用全自動生化分析儀測定血清中肌酐(CREA)、血糖(GLU)、鈣(Ca)、磷(P)、谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、血液尿素氮(BUN)、 乳酸脫氫酶(LDH)、γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿酸(UA)、肌酸激酶(CK)、總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、鎂(Mg)等19項指標。

1.5.4 病理組織學檢查 于給藥后第14天時宰殺所有試驗豬，解剖過程中觀察一般肉眼可見變化，并采集多種組織器官(肝、腎、心臟、脾臟、腦組織)制作病理切片，觀察病理切片組織學變化。

2 結果與分析

2.1 臨床表現 在試驗初期，泰地羅新注射液高劑量組(20 mg/kg·bw)的豬出現劃水，抽搐，喘氣，站立不穩等癥狀，但該反應恢復比較快，高劑量組的豬于1 h后死亡2頭。其余各劑量組及空白對照組的豬，進食、飲水正常，行為正常，呼吸和排泄未見異常，臨床表現正常。因此，建議該藥臨床使用劑量不宜過高。國外對該藥的靶動物安全性評價也有類似的報道[7]。

2.2 體重 泰地羅新注射液各劑量組及空白對照組在給藥前及給藥后7 d和14 d進行稱重。結果表明，給藥前后泰地羅新注射液各劑量組與空白對照組豬的體重在不同時間點均無顯著性差異。

2.3 血液常規指標檢測結果 由表1可知，給藥后14 d的采樣點，給藥組白細胞(WBC)數顯著高于對照組(P<0.05)。這可能是泰地羅新注射液引起動物體的炎癥損傷。其他指標相對于空白對照組都沒有顯著性變化。血常規結果見表1。

2.4 血液生理生化指示檢測結果 由表2可知，生化指標γ-GT、ALT、TG、GLB、TP、TC、UA、P和Mg在給藥后7 d，試驗組顯著高于空白對照組(P<0.05)，給藥14 d后與空白組無顯著性差異(P>0.05)。其中，γ-GT 、ALT、TP、TC、TG和GLB的增加。可能是泰地羅新注射液對機體肝臟損傷的表現。ALT是動物最敏感的肝功能指標之一。血清中TC、P和Mg水平給藥后隨著給藥劑量的增加而降低，說明泰地羅新對 P、Mg 在血液中的含量有一定影響，這可能是由于腎或甲狀腺功能受損引起的。給藥后AST、ALB、CK和Glu等指標呈降低趨勢，臨床無參考意義[9-11]。上述這種差異隨著給藥后時間的延長，逐漸無顯著性差異(P>0.05)。

2.5 病理組織學檢查結果 試驗結束后，對各試驗組每組宰殺1頭豬，經剖檢檢查，各組組織器官未見異常。采集豬大腦、心臟、腎臟、脾臟、肝臟等各部位組織，進行H.E.染色，并通過顯微鏡鏡檢觀察

有無病理變化。病理組織切片見中插彩版圖2～圖9。由中插彩版圖9可知，在20 mg/kg·bw組中，我們發現一些心肌細胞出現變性。其他試驗組無明顯的病變發生。這說明泰地羅新高劑量注射可引起仔豬心臟的損傷。

3 結論

對豬單次肌肉注射泰地羅新注射液, 并進行臨床癥狀、血液生理生化指標對比分析, 與給藥前相比，除高劑量組(臨床推薦劑量的5倍)，所有動物給藥后采食和行動正常, 呼吸和排泄也未見異常。在4～12 mg/kg·bw劑量范圍內, 肌肉注射泰地羅新注射液, 對豬血液常規指標和生理生化指標無明顯影響。泰地羅新注射液符合注射劑相關要求，可用于臨床注射。但在臨床使用時應注意嚴格控制給藥劑量，保證人畜的健康安全。泰地羅新注射液在臨床使用中按“肌肉注射, 每千克體重, 豬4 mg/kg·bw，單次給藥”的用法和用量使用安全, 無明顯不良反應。