潰瘍性結(jié)腸炎患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p 表達(dá)水平的變化及意義

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)均屬于炎癥性腸病，具有相似的臨床表現(xiàn)及特征[1]。近年來關(guān)于UC和CD的分子病理學(xué)研究表明，UC和CD在基因表達(dá)、免疫學(xué)特征方面存在差異[2-4]。UC和CD的臨床表現(xiàn)及特征較為相似，因此臨床鑒別兩者具有一定難度。微RNA(miRNA)是動(dòng)植物體內(nèi)長(zhǎng)度為20～25個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA，可廣泛參與機(jī)體內(nèi)的病理生理過程[5]。目前大量miRNA已成為疾病發(fā)生、發(fā)展的潛在生物標(biāo)志物[6]。有研究顯示，miR-106a和miR-363-3p在UC和CD患者血漿中表達(dá)存在差異，有可能成為鑒別UC和CD的潛在生物標(biāo)志物[7]。本研究選取78例UC患者、53例CD患者及46例健康體檢者作為研究對(duì)象，評(píng)估m(xù)iR-106a和miR-363-3p鑒別CD和UC的效能，并分析miR-106a和miR-363-3p表達(dá)水平與UC患者病情及預(yù)后的關(guān)系，以期為UC的臨床診斷及治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年3月至2018年7月在重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科救治的78例UC患者(UC組)、53例CD患者(CD組)及同期46例健康體檢者(NC組)作為研究對(duì)象。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病學(xué)組制定的《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(2012年·廣州)》[8]對(duì)UC和CD進(jìn)行診斷和治療。UC組男性43例，女性35例，平均年齡(46.08±11.32)歲；CD組男性25例，女性28例，平均年齡(44.85±9.91)歲；NC組男性26例，女性20例，平均年齡(45.72±10.24)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并糖尿病；(2)合并嚴(yán)重感染；(3)伴有嚴(yán)重心、肝、腎等臟器疾病；(4)伴有自身免疫性疾病；(5)妊娠期或哺乳期婦女。本研究所有受試者及家屬均對(duì)研究?jī)?nèi)容及目的了解，簽署了知情同意書，且本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 RT-PCR法檢測(cè)miR-106a和miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量

抽取受試者空腹肘部靜脈血，3 500 r/min離心15 min，提取上層清液。采用總RNA提取試劑盒提取總RNA，試劑盒購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司。采用定量聚合鏈反應(yīng)合成cDNA。將合成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性10 min，然后95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)。采用2-△△Ct表示miR-106a 和 miR-363-3p的相對(duì)表達(dá)量[9]。

1.3 預(yù)后評(píng)估

根據(jù)《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(2012年·廣州)》[8]對(duì)UC患者進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化治療。治療2個(gè)月后，內(nèi)鏡復(fù)查黏膜愈合情況，并根據(jù)黏膜愈合情況將接受治療的活動(dòng)期UC患者分為預(yù)后良好組和預(yù)后不良組[10]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 3組受試者的基線資料比較

3組受試者在性別、年齡方面的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CD組和UC組患者在炎性狀態(tài)方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 3組受試者基線資料比較

注：“—”表示無(wú)數(shù)據(jù)

2.2 3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p的相對(duì)表達(dá)量比較

3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)。UC組患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量低于CD組，但高于NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。詳見表2。

表2 3組受試者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量比較()

注：與NC組比較，aP<0.05；與CD組比較，bP<0.05

2.3 血漿miR-106a 和 miR-363-3p鑒別CD和UC的效能

單指標(biāo)鑒別CD和UC時(shí)，miR-106a的ROC曲線下面積(AUC)大于miR-363-3p，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=1.402，P=0.161)。血漿miR-106a和miR-363-3p聯(lián)合檢測(cè)鑒別CD和UC的Logistic回歸方程：F=12.880-6.157×miR-106a-3.987×miR-363-3p。聯(lián)合檢測(cè)鑒別CD和UC的AUC為0.943，大于miR-106a、miR-363-3p單獨(dú)檢測(cè)的AUC(Z=2.587，P=0.010；Z=2.926，P=0.003)。詳見圖1、表3。

圖1 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測(cè)鑒別CD 和UC的ROC曲線

表3 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測(cè)鑒別CD和UC的效能

注：“—”表示無(wú)數(shù)據(jù)

2.4 不同炎性狀態(tài)的UC患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量比較

活動(dòng)期UC患者血漿miR-106a 和 miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量均高于緩解期UC患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表4。

2.5 影響活動(dòng)期UC患者預(yù)后的相關(guān)因素分析

單因素分析影響活動(dòng)期UC患者預(yù)后的相關(guān)因素，結(jié)果顯示年齡、性別、內(nèi)鏡下活動(dòng)度分級(jí)、病理組織分級(jí)和病變位置與活動(dòng)期UC患者預(yù)后無(wú)關(guān)(P>0.05)；miR-106a 和 miR-363-3p與活動(dòng)期UC患者預(yù)后相關(guān)(P<0.05)。詳見表5。將活動(dòng)期UC患者預(yù)后作為因變量，將miR-106a和miR-363-3p作為自變量，納入Logistic回歸分析，結(jié)果顯示miR-106a>1.14(OR：2.043，95%CI：1.245～2.674)和miR-363-3p>1.05(OR：1.287，95%CI：1.098～1.775)的活動(dòng)期UC患者預(yù)后不良。

表4 活動(dòng)期與緩解期UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量比較()

注：與活動(dòng)期比較，aP<0.05

表5 影響活動(dòng)期UC患者預(yù)后的單因素分析

2.6 血漿miR-106a 和 miR-363-3p在活動(dòng)期UC患者預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值

單指標(biāo)診斷活動(dòng)期UC患者預(yù)后時(shí)，miR-106a診斷活動(dòng)期UC患者預(yù)后的AUC小于miR-363-3p，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.823，P=0.411)。血漿miR-106a和miR-363-3p聯(lián)合檢測(cè)診斷活動(dòng)期UC患者預(yù)后的Logistic回歸方程：F=-7.565+3.017×miR-106a+5.259×miR-363-3p。聯(lián)合檢測(cè)診斷活動(dòng)期UC患者預(yù)后的AUC為0.860，與miR-106a、miR-363-3p單獨(dú)診斷活動(dòng)期UC患者預(yù)后的AUC比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.759，P=0.448；Z=0.875，P=0.382)。詳見圖2、表6。

圖2 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測(cè)診斷 UC患者預(yù)后的ROC曲線

表6 miR-106a、miR-363-3p及聯(lián)合檢測(cè)診斷UC患者預(yù)后的效能

注：“—”表示無(wú)數(shù)據(jù)

3 討論

UC是一種慢性非特異性腸道炎性疾病，病情較為兇險(xiǎn)，且并發(fā)癥較多，嚴(yán)重時(shí)可危及患者生命[11-12]。近年來，中國(guó)UC患者逐年增加[13]。及時(shí)對(duì)UC患者進(jìn)行診斷并加以治療，可有效控制UC病情發(fā)展，降低并發(fā)癥的發(fā)生率及患者病死率[14]。有研究表明，大量miRNA在炎癥性腸病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用，參與組織穩(wěn)態(tài)、腸細(xì)胞增殖、分化及維持腸道屏障功能等[15-17]。目前中國(guó)較少有關(guān)于miR-106a、miR-363-3p與UC關(guān)系的研究報(bào)道。國(guó)外雖有研究報(bào)道了miR-106a、miR-363-3p在UC患者中特異性表達(dá)，但并未驗(yàn)證兩者診斷UC的效能，且未深入研究miR-106a、miR-363-3p與UC患者病情及預(yù)后的關(guān)系。本研究擬探究miR-106a、miR-363-3p與UC患者臨床病理、病情進(jìn)展及預(yù)后的關(guān)系，為UC患者病情嚴(yán)重程度及治療效果評(píng)估提供更多參考。

本研究結(jié)果顯示，UC組患者血漿miR-106a和miR-363-3p相對(duì)表達(dá)量低于CD組，但高于NC組，與Omidbakhsh等[7]的研究結(jié)果一致。提示miR-106a和miR-363-3p在UC患者血漿中特異性表達(dá)，有可能成為鑒別UC的潛在生物標(biāo)志物。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，miR-106a、miR-363-3p及兩者聯(lián)合檢測(cè)的AUC均大于0.8，表明miR-106a和miR-363-3p在鑒別CD和UC方面具有較高價(jià)值，可作為鑒別CD和UC的生物標(biāo)志物。

本研究比較了不同炎性狀態(tài)的UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p的相對(duì)表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期UC患者血漿miR-106a和miR-363-3p的相對(duì)表達(dá)量顯著高于緩解期患者，表明miR-106a和miR-363-3p表達(dá)水平與UC患者的炎性狀態(tài)相關(guān)，可反映UC患者的病情。本研究結(jié)果顯示，miR-106a和miR-363-3p與活動(dòng)期UC患者的預(yù)后密切相關(guān)。miR-106a>1.14、miR-363-3p>1.05提示活動(dòng)期UC患者預(yù)后不良，相關(guān)機(jī)制還需進(jìn)行基礎(chǔ)研究進(jìn)一步闡明。本研究采用ROC評(píng)價(jià)miR-106a和miR-363-3p診斷活動(dòng)期UC患者預(yù)后的效能，發(fā)現(xiàn)miR-106a、miR-363-3p及兩者聯(lián)合檢測(cè)的AUC均大于0.8，表明miR-106a和miR-363-3p對(duì)于活動(dòng)期UC患者預(yù)后評(píng)估具有較高價(jià)值，可作為評(píng)估活動(dòng)期UC患者預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

綜上所述，miR-106a和miR-363-3p不僅在鑒別CD和UC方面具有較高價(jià)值，而且還可反映UC患者的病情及預(yù)后情況。由于條件有限，本研究未能納入更多樣本，因此結(jié)果可能存在一定偶然性和隨機(jī)性，今后還需進(jìn)行大樣本、多中心研究進(jìn)一步驗(yàn)證。