益腎通瘀方對前列腺增生大鼠miR-143、miR-145和miR-221表達(dá)的影響

潘恩山 李煜罡 陳錫鈞

【摘 要】目的探討益腎通瘀方對前列腺增生（BPH）大鼠的影響及作用機(jī)理。方法選取雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為正常組、模型組、治療組，每組10例。腹腔注射丙酸睪酮誘導(dǎo)大鼠前列腺增生，觀察益腎通瘀方對BPH大鼠前列腺濕重和前列腺指數(shù)的影響，實(shí)時熒光定量PCR檢測各組大鼠前列腺組織中miR-143、miR-145和miR-221相對表達(dá)水平。結(jié)果與正常組相比，模型組BPH大鼠前列腺濕重、前列腺指數(shù)及miR-143、miR-145和miR-221相對表達(dá)水平均顯著增加（P<0.01）;與模型組相比，治療組BPH大鼠前列腺濕重、前列腺指數(shù)及miR-143、miR-145和miR-221相對表達(dá)水平均顯著下降（P<0.01）。結(jié)論益腎通瘀方治療BPH可能與其能抑制miR-143、miR-145和miR-221表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】益腎通瘀方;良性前列腺增生;大鼠;miRNA表達(dá)

【中圖分類號】R697【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-3783（2019）11-03--01

我們研究益腎通瘀方對BPH大鼠前列腺組織中miR-143、miR-145和miR-221表達(dá)的影響，研究如下。

1 材料與方法

1.1 材料益腎通瘀方由廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑科提供。丙酸睪酮注射液購于廣州白云山明興制藥有限公司。健康SPF級雄性SD大鼠由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號：SYXK（粵）2018-0023。TRIzol試劑、miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于美國ABI公司;實(shí)時熒光定量PCR（qPCR）試劑盒及相應(yīng)引物購于大連TaKaRa公司。

1.2 動物分組及處理方法雄性SD大鼠30只，體重280±20g，飼養(yǎng)于溫度25±1℃、相對濕40%～70%環(huán)境，自由進(jìn)食飲水。所有大鼠經(jīng)適應(yīng)性生長一周，隨機(jī)分為正常組、模型組、治療組（每組10只），編號并稱重。正常組正常飼養(yǎng)，模型組和治療組大鼠給予腹腔注射丙酸睪酮液原液（25mg/kg/d）進(jìn)行BPH模型構(gòu)建。連續(xù)注射21天，模型組蒸餾水灌胃治療，治療組采用前列通瘀方中藥沖劑（按生藥量0.4g/kg/d）灌胃治療，各組大鼠于21天后處死并稱量。分離前列腺，置于液氮中保存用于總RNA抽提。

1.3 前列腺濕重及前列腺指數(shù)檢測大鼠經(jīng)頸椎脫臼處死后分別稱量體重，分離出前列腺，置于冰生理鹽水中，小心去掉周圍結(jié)締組織及脂肪，稱重并計(jì)算前列腺指數(shù)（前列腺指數(shù)=前列腺濕重mg/鼠體重g）。

1.4 qPCR檢測miRNA表達(dá)Trizol法提取組織樣品中總RNA，然后用miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，qPCR檢測組織樣品中miR-143、miR-145和miR-221相對表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，三組之間比較采用單因素方差分析，然后采用LSD檢驗(yàn)分析組間差異。P<0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 益腎通瘀方對BPH大鼠前列腺重、前列腺指數(shù)影響

與正常組比，模型組大鼠前列腺濕重和前列腺指數(shù)顯著增加（P<0.01），表明模型組大鼠前列腺出現(xiàn)明顯增生，BPH大鼠造模成功。與模型組比，治療組大鼠前列腺濕重、前列腺指數(shù)顯著降低（P<0.01），表明益腎通瘀方對BPH大鼠前列腺增生有顯著治療作用。見表1。

2.2 益腎通瘀方對BPH大鼠前列腺組織中miR-143、miR-145和miR-221表達(dá)的影響

與正常組比，模型組大鼠前列腺組織中miR-143、miR-145和miR-221相對表達(dá)水平顯著增加（P<0.01）。與模型組比，治療組大鼠前列腺組織中miR-143、miR-145和miR-221相對表達(dá)水平顯著顯著下降（P<0.01）。見表2。

3 討論

本研究證實(shí)miR-143和miR-145在BPH大鼠前列腺中表達(dá)顯著上升;而在經(jīng)過益腎通瘀方治療后的BPH大鼠前列腺中miR-143和miR-145表達(dá)顯著降低，前列腺濕重、前列腺指數(shù)均降低。提示益腎通瘀方可以抑制BPH的大鼠前列腺中miR-143和miR-145表達(dá)，具有保護(hù)大鼠前列腺增生的作用。本研究發(fā)現(xiàn)在BPH大鼠前列腺組織中miR-221相對表達(dá)水平顯著上升;而在經(jīng)過益腎通瘀方治療后的BPH大鼠前列腺中miR-221表達(dá)水平顯著降低。表明益腎通瘀方可以抑制BPH的大鼠前列腺中miR-221表達(dá)，具有保護(hù)大鼠前列腺增生的作用。綜上，益腎通瘀方治療BPH可能與其能抑制miR-143、miR-145和miR-221表達(dá)水平相關(guān)。

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