兩種提取方法對辣木葉揮發油化學成分及抗氧化活性的影響研究

李國明，李守嶺*，張麗萍，李秀林

1云南省德宏熱帶農業科學研究所；2瑞麗海關綜合技術中心，瑞麗 678600

辣木(MoringaoleiferaLam．)又稱鼓槌樹，為辣木科(Moringaceae)辣木屬(Moringa)多年生落葉喬木植物[1,2]。研究表明，辣木富含纖維素、黃酮類[3,4]、維生素、蛋白質[5]、多糖類[6]、酚類及其苷[7,8]、生物堿類等營養性和功能性化學物質[9]，具有免疫調節，抗癌，止痙攣、利尿、調節血壓和膽固醇，降血糖，抗氧化，抗炎、抗潰瘍，抗菌等生理活性[10-14]。

對辣木揮發性化學成分的研究中，采用水蒸氣蒸餾法來提取辣木揮發油并以GC-MS法分析揮發油的化學成分的報道較多，該方法分析得到的辣木揮發油化學成分主要為脂肪酸類、烷烴類、醛類、烯烴類、甾體類、酮類、醇類、酯類、雜環類、萜類、胺類和芳香類等化合物[15-20]。而采用其它方法提取辣木揮發油并對比不同方法對化學成分種類及含量的研究鮮有報道。

本研究采用索氏提取法和超聲波提取法提取非洲種、緬甸種和印度種三個品種的辣木葉揮發油，利用氣相色譜-質譜聯用儀研究兩種提取方法對辣木葉揮發油化學成分類型及含量的影響。以DPPH自由基的清除能力作為評價指標，通過測定兩種方法提取的三個品種的辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除率和半數清除率IC50，研究三個品種辣木葉揮發油的抗氧化活性，為采用合適方法提取辣木揮發油并對揮發油品質評價提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料與試劑

本實驗所用辣木葉為云南省德宏熱帶農業科學研究所辣木標椎化生產示范園種植的非洲辣木、緬甸辣木和印度辣木3個辣木品種。

試劑：石油醚(分析純，沸程:30～60 ℃，成都市科隆化學品有限公司)；正己烷(色譜純，sigma-aldrich西格瑪奧德里奇(上海)貿易有限公司)；

1.1.2 儀器與設備

電子天平(型號：ML4002E，梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；電熱鼓風干燥箱(型號：GZX-9140MBE，上海博訊實業有限公司醫療設備廠)；索氏提取儀(型號:BSXT-06，上海豫明儀器有限公司)；超聲波雙頻清洗儀(型號：SB25-12DTS，寧波新芝生物科技股份有限公司)；氣相色譜—質譜聯用儀(型號：Trace ISQ，美國Thermo Fisher公司)；毛細管色譜柱(型號：TG-1701MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm)；循環水機(型號：CCA-1111)-真空旋轉蒸發儀(型號：N-1200B)(上海泉杰科學儀器有限公司)；中藥材粉碎機(型號：DG160，浙江瑞安春海藥材器械廠)。

1.2 方法

1.2.1 辣木葉樣品制備

將采集的辣木葉樣品，在電熱鼓風干燥箱中60 ℃恒溫烘干，粉碎后過60目樣品篩，收集樣品，干燥保存待用。

1.2.2 辣木葉揮發油提取

準確稱取兩份3個不同品種的辣木葉樣品1.50 g，其中一份置于索氏提取器中，以30.0 mL石油醚，控制提取溫度為40 ℃，加熱回流提取1.5 h。另外一份置于250 mL具塞錐形瓶中，加入30.0 mL正己烷，在超聲波清洗儀溫度為30 ℃，功率為40.0 KHz，功率比為95.0%的條件下超聲提取1.5 h。將兩種方法收集的提取液經真空旋轉蒸發儀濃縮，得到的略帶特殊氣味的淡黃色液體即為辣木葉揮發油。用色譜純正己烷將辣木葉揮發油溶解后，轉移至10.0 mL容量瓶，定容至刻度，搖勻靜置后，密封保存待用。

1.2.3 辣木葉揮發油供測試溶液的配制

準確移取辣木葉揮發油0.5 mL于5.0 mL容量瓶中，以正己烷定容至刻度，采用旋渦混合器混勻靜置后，移取1.0 mL揮發油待測液至進樣瓶中，密封待測試。

1.2.4 氣相色譜—質譜聯用儀(GC-MS)分析條件

氣相色譜條件：TG-1701MS毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，程序升溫(初始溫度為60.0 ℃保持1.0 min，以10.0 ℃/min的升溫速率升至250.0 ℃保持30.0 min)，載氣為高純He，恒流模式，柱流量為1.0 mL/min，平均線速度為37 cm/s，進樣量1.0 μL，進樣口溫度250.0 ℃，分流比100∶1。

質譜條件：EI電離模式，電子倍增管電壓1 917.0 V，電子能量70.0 eV，離子傳輸管溫度250.0 ℃，離子源溫度250.0 ℃，掃描質量范圍m/z為30～550 amu。

1.2.5 成分分析

按上述分析條件，對辣木葉揮發油待測溶液進樣測試，得到辣木葉揮發油總離子流圖。總離子流圖中各色譜峰由質譜工作站Xcalibur 3.0結合NIST08標準質譜圖數據庫，進行綜合分析得到揮發性化學成分的組成及質量分數。采用主成分分析法，對辣木葉揮發油化學成分中含量>1.00%的化學成分進行主成分分析。

1.2.6 辣木葉揮發油抗氧化活性測定

將3個不同品種的辣木葉揮發油以正己烷定容于5.0 mL容量瓶中，搖勻靜置后，分別取揮發油待測液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，以無水乙醇定容至10.0 mL。移取不同濃度待測液2.0 mL及2.0 mL DPPH溶液(0.1 mmol/L)于具塞比色管中，搖勻靜置，30.0 min后，采用紫外/可見分光光度計，以無水乙醇為參比，在517 nm波長處測定吸光度Ai，同時測定2.0 mL DPPH溶液(0.1 mmol/L)與2.0 mL無水乙醇混合液的吸光度Ao，2.0 mL不同濃度待測液與2.0 mL無水乙醇混合液的吸光度Aj。用相同濃度的抗壞血酸水溶液(Vc)為陽性對照品，通過如下公式計算DPPH自由基的清除率。

清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/Ao]×100%

以溶液質量濃度為橫坐標，DPPH自由基清除率為縱坐標，繪制DPPH自由基清除率與質量濃度變化曲線。

1.3 數據處理

通過質譜工作站軟件Xcalibur 3.0對采集得到的辣木葉揮發油總離子流圖中各個色譜峰進行定性分析，結合NIST08標準質譜圖數據庫對各色譜峰對應的化合物進行綜合分析鑒定，以峰面積歸一化法計算各揮發性化合物的質量分數，采用 SPSS 17.0 統計軟件，應用主成分分析法對辣木葉揮發油數據進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 兩種方法提取的辣木葉揮發油總離子流色譜圖

辣木葉揮發油的總離子流色譜圖經質譜工作站Xcalibur 3.0結合NIST08標準質譜圖數據庫進行譜庫檢索及綜合分析，得到揮發油的化學成分組成及質量分數。索氏提取法提取的非洲種、緬甸種、印度種揮發油分別鑒定出74種(圖1)、72種(圖2)、62種(圖3)化合物；超聲波提取法提取的非洲種、緬甸種、印度種揮發油分別鑒定出63種(圖4)、63種(圖5)、57種(圖6)化合物。

圖1 索氏提取法提取的非洲辣木葉揮發油GC-MS總離子流色譜圖Fig.1 GC-MS total ion flow chromatography of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Africa by soxhlet extraction

圖2 索氏提取法提取的緬甸辣木葉揮發油GC-MS總離子流色譜圖Fig.2 GC-MS total ion flow chromatography of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Myanmar by soxhlet extraction

圖3 索氏提取法提取的印度辣木葉揮發油GC-MS總離子流色譜圖Fig.3 GC-MS total ion flow chromatography of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of India by soxhlet extraction

圖4 超聲波提取法提取的非洲辣木葉揮發油GC-MS總離子流色譜圖Fig.4 GC-MS total ion flow chromatography of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Africa by ultrasound extraction

圖5 超聲波提取法提取的緬甸辣木葉揮發油GC-MS總離子流色譜圖Fig.5 GC-MS total ion flow chromatography of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Myanmar by ultrasound extraction

圖6 超聲波提取法提取的印度辣木葉揮發油GC-MS總離子流色譜圖Fig.6 GC-MS total ion flow chromatography of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of India by ultrasound extraction

2.2 兩種方法提取的辣木葉揮發油化學成分分析結果

辣木葉揮發油總離子流圖中各色譜峰通過質譜工作站Xcalibur 3.0結合NIST08標準質譜圖數據庫進行成分分析鑒定，采用峰面積歸一化法計算各揮發性化學成分的相對質量分數，鑒定出的化學成分及其質量分數結果見表1 。

表1 兩種方法提取的辣木葉揮發油化學成分分析結果

續表1(Continued Tab.1)

保留時間tR(min)化合物CompoundCAS號CASNo.分子式Molecularformula分子量Relativemolecularmass相對含量Relativecontent(%)索氏提取法Soxhletextraction超聲波提取法Ultrasoundextraction非洲種Africanspecies緬甸種Myanmarspecies印度種Indiaspecies非洲種Africanspecies緬甸種Myanmarspecies印度種Indiaspecies5.93乙酸己酯Hexylacetate142-92-7C8H16O2144.210.280.190.000.000.000.006.361-戊烯-3-醇1-Penten-3-ol616-25-1C5H10O86.130.350.150.000.000.140.007.816-甲基庚醇Isooctylalcohol26952-21-6C8H18O130.230.260.240.000.000.000.008.68乙酸異丁酯IsobutylAcetate110-19-0C6H12O2116.161.140.310.150.180.250.1510.40壬醛Nonanal124-19-6C9H18O142.240.000.000.100.000.000.0010.42乙醛酸正丁酯Butyloxoacetate6295-6-3C6H10O3130.140.000.240.000.000.130.0010.95正戊酸n-Valericacid109-52-4C5H10O2102.131.110.360.120.190.200.1311.30正二十烷 n-Eicosane112-95-8C20H42282.550.350.000.000.000.000.0012.12對甲氧基肉桂醛4-Methoxycinnamaldehyde1963-36-6C10H10O2162.180.590.000.000.000.000.0012.46正十五烷n-Pentadecane629-62-9C15H32212.410.500.000.000.000.000.0012.85丙烯酸正丁酯n-Butylacrylate141-32-2C7H12O2128.171.180.190.000.000.160.1412.87乙酰丙酸Levulinicacid123-76-2C5H8O3116.120.420.320.140.000.110.0013.53正十六烷n-Hexadecane544-76-3C16H34226.442.110.410.230.310.330.1814.37正十七烷n-Heptadecane629-78-7C17H36240.470.540.000.000.160.000.0014.54正十八烷Octadecane593-45-3C18H38254.490.770.270.090.140.100.1014.66正十四烷Etradecane629-59-4C14H30198.391.550.270.100.000.120.0714.73正二十二烷n-Docosane629-97-0C22H46316.600.630.480.160.180.220.1715.28順-9-十八烯醇Oleylalcohol143-28-2C18H36O268.483.852.400.941.081.410.8215.53蓖麻油酸Ricinoleicacid141-22-0C18H34O3298.461.320.560.210.320.330.1915.76順-9-十四碳烯醇(9Z)-Tetradecen-1-ol35153-15-2C14H28O212.371.590.960.370.360.520.2716.00棕櫚酸Palmiticacid57-10-3C16H32O2256.420.540.240.000.000.080.0016.09十八醇Stearylalcohol112-92-5C18H38O270.490.350.000.000.000.150.0016.132-庚酮 2-Heptanone110-43-0C7H14O114.190.280.170.110.000.170.0016.44月桂酸Lauricacid143-07-7C12H24O2200.320.330.230.170.000.140.0018.14鄰苯二甲酸二丁酯Dibutylphthalate84-74-2C16H22O4278.340.530.200.500.160.000.1418.53丙位庚內酯γ-Heptalactone105-21-5C7H12O2128.170.940.200.190.240.200.0018.71十一醛Undecanal112-44-7C11H22O170.301.101.831.800.951.811.2419.13環氧異長葉烯Octahydro-4,4,8,8-tetramethyl-4a,7-methano-4aH-naphth[1,8a-b]oxirene67999-56-8C15H24O220.350.830.000.000.000.140.1819.24十三醇Tridecylalcohol112-70-9C13H28O200.360.380.340.240.210.280.1519.54肉豆蔻酸Myristicacid544-63-8C14H28O2228.370.430.290.180.140.250.1419.64戊二醛Glutaricdialdehyde111-30-8C5H8O2100.121.050.330.180.140.000.1919.77肉豆蔻酸肉豆蔻酯Myristylmyristate3234-85-3C28H56O2424.740.850.000.180.170.000.1120.34甘油脂肪酸酯Glycerinfattyacidester542-44-9C19H38O4330.500.420.550.180.230.270.14

續表1(Continued Tab.1)

保留時間tR(min)化合物CompoundCAS號CASNo.分子式Molecularformula分子量Relativemolecularmass相對含量Relativecontent(%)索氏提取法Soxhletextraction超聲波提取法Ultrasoundextraction非洲種Africanspecies緬甸種Myanmarspecies印度種Indiaspecies非洲種Africanspecies緬甸種Myanmarspecies印度種Indiaspecies20.48正十五酸n-Pentadecanoicacid1002-84-2C15H30O2242.402.440.730.220.410.610.2120.75正庚基丙烯酸酯n-Heptylacrylate2499-58-3C10H18O2170.250.000.330.000.000.000.0020.78正庚酸Heptanoicacid111-14-8C7H14O2130.180.920.170.000.140.000.1821.06正二十四烷Tetracosane646-31-1C24H50338.653.094.694.803.163.703.3821.73異長葉烯酮Isolongifolenone23747-14-0C15H22O218.330.780.210.310.220.290.4021.76十八碳酸甲酯Methyloctadecanoate112-61-8C19H38O2298.510.000.000.170.150.290.2822.01十三酸Tridecanoicacid638-53-9C13H26O2214.341.040.390.210.150.230.2322.14肉豆蔻醇Tetradecylalcohol112-72-1C14H30O214.391.110.630.460.420.420.3622.211-十九碳烯1-Nonadecene18435-45-5C19H38266.510.390.270.410.370.280.2522.32十三碳二酸二甲酯Dimethylbrassylate1472-87-3C15H28O4272.380.210.430.240.180.660.0022.662-(4-甲基-3-環己烯基)丙醛2-(4-Methyl-cyclohex-3-enyl)-propionaldehyde29548-14-9C10H16O152.231.361.060.350.650.970.4522.78棕櫚酸異丙酯Palmiticacidisopropylester142-91-8C19H38O2298.500.290.000.000.220.270.0022.96萜品油烯Terpinolene586-62-9C10H16136.200.580.880.220.620.790.2323.26十五醇1-Pentadecanol629-76-5C15H32O228.410.280.250.180.000.270.0023.45正二十八烷Octacosane630-02-4C28H58394.767.249.7716.9110.898.4611.9523.922,6-二叔丁基苯醌2,6-Di-tert-butyl-p-benzoquinone719-22-2C14H20O2220.311.130.450.210.140.000.0023.99γ-十二內酯4-Dodecanolide2305-5-7C12H22O2198.300.000.240.180.220.200.1624.14椰子醛Gamma-Nonanolactone104-61-0C9H16O2156.220.000.220.200.240.250.2825.15正二十六烷Hexacosane630-01-3C26H54366.710.740.790.980.750.630.7225.25油酸甲酯Methyloleate112-62-9C19H36O2296.490.951.451.121.021.200.8726.01二十烷酸甲酯Methyleicosanoate1120-28-1C21H42O2326.560.000.000.000.000.190.2226.27異長葉烷酮Isolongifolanone23787-90-8C15H24O220.350.850.480.230.270.000.0026.592-長松針烯2-Carene554-61-0C10H16136.230.251.390.400.400.760.3526.99肉豆蔻酸十二酯Dodecanylmyristate2040-64-4C26H52O2396.690.320.160.000.250.000.0027.14正二十一烷n-Heneicosane629-94-7C21H44296.5710.0219.6936.6118.5617.5927.6528.39環十五烷酰Cyclopentadecanol4727-17-7C15H30O226.400.501.100.551.672.621.7629.47丙烯酸乙酯Ethylacrylate140-88-5C5H8O2100.120.000.390.170.000.000.1429.52棕櫚酸丁酯Hexadecanoicacid,butylester111-06-8C20H40O2312.530.790.000.280.220.000.1729.73正十二烷n-Dodecane112-40-3C12H26170.330.000.290.350.000.000.0029.76十九烷酸Nonadecanoicacid646-30-0C19H38O2298.500.000.200.000.320.360.3230.413-己醇3-Hexanol623-37-0C6H14O102.180.330.360.170.170.230.0031.391-十三烯1-Tridecene2437-56-1C13H26182.350.000.240.000.130.460.36

續表1(Continued Tab.1)

保留時間tR(min)化合物CompoundCAS號CASNo.分子式Molecularformula分子量Relativemolecular相對含量Relativecontent(%)索氏提取法Soxhletextraction超聲波提取法Ultrasoundextraction非洲種Africanspecies緬甸種Myanmarspecies印度種Indiaspecies非洲種Africanspecies緬甸種Myanmarspecies印度種Indiaspecies31.609,10-十四烯-1-醇9,10-Tetradecenol52957-16-1C14H28O212.370.000.181.240.320.890.8731.6410-十一羧酸甲酯10-Undecenoicacid,methylester111-81-9C12H22O2198.300.901.720.001.100.000.0033.12正十九烷 Nonadecane629-92-5C19H40268.521.071.261.551.600.961.1133.982-壬酮2-Nonanone821-55-6C9H18O142.240.420.230.160.000.000.0035.29(Z)-11-十六碳烯-1-醇(Z)-Hexadec-11-en-1-ol56683-54-6C16H32O240.420.471.641.527.023.156.9435.331-十七醇Heptadecan-1-ol1454-85-9C17H36O256.470.400.260.000.003.060.0035.90對薄荷烷-1,8-二醇P-menthane-1,8-diol80-53-5C10H20O2172.260.000.480.000.000.140.0036.82順-2-戊烯-1-醇Cis-2-Penten-1-ol1576-95-0C5H10O86.130.420.000.000.000.000.0036.842-十三烷酮2-Tridecanone593-08-8C13H26O198.350.000.460.890.760.370.5937.52十一醇1-Undecanol112-42-5C11H24O172.310.960.000.280.210.540.6937.54Z-9-十六碳稀-1-醇(9Z)-9-Hexadecen-1-ol10378-01-5C16H32O240.431.200.000.610.190.891.2039.88香草乙酮Acetovanillone498-02-2C9H10O3166.170.001.040.560.000.990.9139.89異香蘭素3-Hydroxy-4-methoxybenzaldehyde621-59-0C8H8O3152.150.000.000.960.400.000.0039.97香芹酚Carvacrol499-75-2C10H14O150.220.000.960.000.350.000.0040.033,4-二甲基苯甲酸3,4-Dimethylbenzoicacid619-04-5C9H10O2150.170.330.550.000.000.210.0040.3410-十一烯酸Undecenoicacid112-38-9C11H20O2184.280.470.000.280.570.900.4740.414-叔丁基苯酚P-tert-butylphenol98-54-4C10H14O150.220.560.230.000.000.230.4541.44十八碳烷酸Octadecanoicacid57-11-4C18H36O2284.480.370.210.220.230.160.0043.25乙酸丁香酚酯1-Acetoxy-2-methoxy-4-93-28-7C12H14O3206.245.4115.3111.0710.4314.408.95allylbenzene1,3,4-Eugenolacetate46.72月桂醛Lauraldehyde112-54-9C12H24O184.320.763.963.6825.4818.8519.7

由分析結果可知，非洲種辣木葉揮發油化學成分中，超聲波提取法分析得到了月桂醛、油酸甲酯和(Z)-11-十六碳烯-1-醇三種化合物，索氏提取法分析得到了蓖麻油酸和肉豆蔻醇兩種影響揮發油品質的化合物；緬甸種辣木葉揮發油化學成分中，索氏提取法得到的正二十四烷、正二十八烷、正二十一烷和乙酸丁香酚酯4個化合物的質量分數較高，超聲波提取法月桂醛含量較高；印度種辣木葉揮發油化學成分中，索氏提取法得到的正二十四烷、正二十八烷、正二十一烷和乙酸丁香酚酯4個化合物的質量分數較高，超聲波提取法月桂醛含量較高。

2.3 兩種方法提取的辣木葉揮發油化學成分主成分分析

選擇兩種方法提取的辣木葉揮發油化學成分中含量>1.00%的33種化學成分作為分析對象，依次編號為F1～F33。計算化學成分F1～F33的均值，采用最大方差法旋轉因子及標準化全部的F1～F33值，計算協方差矩陣的特征值與特征向量，所得成分的方差即為相應的特征值，計算的方差累積貢獻率>85%的成分即為主成分。從辣木葉揮發油碎石圖(圖7)，可以看出PCA的特征值變化趨勢，保留前5個主成分可以概括辣木葉揮發油化學成分的絕大部分信息，前5個主成分的特征值分別為：λ1=18.000，λ2=6.733，λ3=3.981，λ4=3.182，λ5=1.104，數值均大于1。分析貢獻率數值可知，提取的前5個主成分總的累計貢獻率為100.00%>85%，表明前5個主成分包含了原來33個化合物的幾乎全部信息。辣木葉揮發油的碎石圖中每一個碎石的特征值作為特征數量值的基礎，決定了主成分需要被保留的數目。

圖7 兩種方法提取的辣木葉揮發油碎石圖(成分>1.00%)Fig.7 Scree graph of volatile oils extracted by two methods from leaves of Moringa oleifera (composition>1.00%)

對辣木葉揮發油化學成分進行主成分分析，提取了5個主成分，第一主成分(PC1)的特征值為18.000，貢獻率為54.55%，對應的特征向量依次以乙酸異丁酯、正戊酸、丙烯酸正丁酯、正十六烷、正十四烷、順-9-十八烯醇、蓖麻油酸、順-9-十四碳烯醇、戊二醛、正十五酸、十三酸、肉豆蔻醇、2-(4-甲基-3-環己烯基)丙醛、2,6-二叔丁基苯醌等14種化合物較大，第一主成分受這些成分的影響比較大；第二主成分(PC2)的特征值為6.733，貢獻率為20.40%，對應的特征向量依次以γ-戊內酯、(E)-2-己烯-1-醇、環戊醇、2-蒈烯、10-十一羧酸甲酯等5種化合物較大，第二主成分受這些成分的影響比較大；第三主成分(PC3)的特征值為3.981，貢獻率為12.06%，對應的特征向量依次以十一醛、正二十四烷、油酸甲酯、乙酸丁香酚酯等4種化合物較大，第三主成分受這些成分的影響比較大；第四主成分(PC4)的特征值為3.182，貢獻率為9.64%，對應的特征向量依次以環十五烷酰、1-十七醇、月桂醛等3種化合物較大，第四主成分受這些成分的影響比較大；第五主成分(PC5)的特征值為1.104，貢獻率為3.35%，對應的特征向量以Z-9-十六碳稀-1-醇和香草乙酮較大，第五主成分受其影響比較大。

2.4 兩種提取方法對辣木葉揮發油化學成分的影響分析

通過對兩種方法提取的三個品種辣木葉揮發油化學成分的分析可知，辣木葉揮發油的化學成分類別的質量分數(見表2)和數量(見表3)均有顯著差異。

表2 兩種提取方法對辣木葉揮發油化學成分類別質量分數的影響

由表2可知，三個品種的辣木葉揮發油化學成分主要屬于酯類、醇類、烷烴類、酮類、醛類、羧酸類、烯烴類、醌類、酰類和酚類等10類化合物，兩種提取方法均得到了含量較高的烷烴類、酯類、醇類、醛類等5類共同化合物。

由表3可知，兩種方法提取的揮發油化學成分中數量較多的為酯類、醇類、烷烴類、酮類、醛類、羧酸類和烯烴類等7類化合物。索氏提取法得到的三個品種種辣木葉酯類、醇類、烷烴類、酮類和羧酸類等5類化合物數量較多，超聲波提取法得到的醛類和烯烴類化合物數量較多。

表3 兩種提取方法對辣木葉揮發油化學成分類別數量的影響

2.5 辣木葉揮發油抗氧化活性分析

本實驗采用DPPH自由基，在517 nm波長處對兩種方法提取的三個品種的辣木葉揮發油抗氧化活性進行了定量分析，各實驗樣品對DPPH自由基的清除能力曲線見圖8～13。由DPPH自由基的清除能力曲線圖可知，辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除率均隨著揮發油質量濃度的增加而增大，并具有一定的量效關系。質量濃度(x)與清除率(y)之間的量效關系，半數清除率IC50，相關系數r及量效范圍見表4。

表4 兩種方法提取的辣木葉揮發油抗氧化能力測定

圖8 索氏提取法提取的非洲辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除能力Fig.8 DPPH free radicals scavenging capacity of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Africa by soxhlet extraction

圖10 索氏提取法提取的緬甸辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除能力Fig.10 DPPH free radicals scavenging capacity of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Myanmar by soxhlet extraction

圖12 索氏提取法提取的印度辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除能力Fig.12 DPPH free radicals scavenging capacity of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of India by soxhlet extraction

圖9 超聲波提取法提取的非洲辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除能力Fig.9 DPPH free radicals scavenging capacity of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Africa by ultrasound extraction

圖11 超聲波提取法提取的緬甸辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除能力Fig.11 DPPH free radicals scavenging capacity of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of Myanmar by ultrasound extraction

圖13 超聲波提取法提取的印度辣木葉揮發油對DPPH自由基的清除能力Fig.13 DPPH free radicals scavenging capacity of volatile oils extracted from leaves of Moringa oleifera of India by ultrasound extraction

3 結論

本研究采用索氏提取法和超聲波提取法提取非洲種、緬甸種和印度種三個品種的辣木葉揮發油，以氣相色譜質譜聯用儀(GC-MS)對辣木葉揮發油化學成分及其含量進行分析。通過分析可知，三個品種的辣木葉揮發油化學成分屬于酯類、醇類、烷烴類、酮類、羧酸類、醛類、烯烴類、醌類、酰類、酚類等10類化合物。索氏提取法得到的印度種揮發油未分析鑒定出酚類化合物，超聲波提取法得到的緬甸種和印度種揮發油未分析鑒定出醌類化合物。索氏提取法得到的揮發油酯類含量較高，超聲波提取法得到的醛類的含量較高，且緬甸種揮發油酯類含量均比其它兩個品種高。索氏提取法得到的非洲種揮發油酯類、醇類、酮類、羧酸類、烯烴類、醌類和酚類含量較高，超聲波提取法得到的揮發油烷烴類、醛類和酰類含量較高；索氏提取法得到的緬甸種揮發油酯類、烷烴類、酮類、羧酸類、烯烴類、醌類和酚類含量較高，超聲波提取法得到的揮發油醇類、醛類和酰類含量較高；索氏提取法得到的印度種揮發油酯類、烷烴類、酮類和醌類含量較高，超聲波提取法得到的揮發油醇類、醛類、羧酸類、烯烴類、酰類和酚類含量較高。通過測定DPPH自由基的清除率，證實辣木葉揮發油均具有一定的抗氧化活性，且揮發油的質量濃度與DPPH自由基清除率之間存在一定的量效關系。索氏提取法得到的揮發油半數清除率IC50值分別為0.35 mg/mL (非洲種)、0.26 mg/mL(緬甸種)、0.20 mg/mL(印度種)；超聲波提取法得到的揮發油半數清除率IC50值分別為0.50 mg/mL(非洲種)、0.30 mg/mL(緬甸種)、0.30 mg/mL(印度種)。實驗結果表明，三個品種的辣木葉揮發油均具有一定的抗氧化活性，具有作為天然抗氧化劑的應用潛質。