關于CBLB502對造血干細胞輻射防護作用

孫文沫 汪亞倫

作者簡介：孫文沫（1989-），女，漢族，沈陽醫學院，研究方向是實驗血液學，E-mail：swm0901@163.com。汪亞倫（1962-），女，漢族，沈陽醫學院，研究方向是生物化學與分子生物學， E-mail：wangyalun@sohu.com。

【摘 要】 目的：探討CBLB502對造血干細胞輻射防護作用。方法：40只C57BL/6J小鼠隨機分為照射對照組和CBLB502組，每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射，劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組小鼠在照射前30分鐘注射CBLB502，照射對照組予以腹腔注射等量生理鹽水，對比兩組骨髓有核細胞數和集落數。結果：照后24h，CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細胞數均減少，兩組之間差異無統計學意義。照后24h，CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論：CBLB502對造血干細胞有輻射防護作用。

【關鍵詞】 CBLB502;造血干細胞;輻射

【中圖分類號】R416

【文獻標志碼】A

【文章編號】1005-0019（2019）18-254-02

Toll樣受體5（Toll-like receptor 5，TLR5）是在固有免疫系統中發揮重要效應的模式識別受體之一，可以特異識別病原體表面的分子，抵御機體外界病原微生物的入侵，是近年來免疫學研究的重點對象[1]。CBLB502是TLR5激動劑，是經過藥理學改構的細菌鞭毛蛋白衍生物[2]。CBLB502具有較好的安全性和耐受性。本次研究使用X射線6.5Gy照射小鼠模型，探討CBLB502對造血干細胞輻射防護作用，結果如下。

1 材料與方法

1.1 藥物、儀器、試劑

CBLB502蛋白由pMD-18T-CBLB502質粒為模板，利用引物擴增全長序列，植入大腸桿菌，分離純化合成;甲基纖維素培養基由加拿大 Stem Cell Technologies公司（重慶市華雅干細胞技術有限公司代理）生產，批號：04434;1640培養基由美國Gibco 公司生產;小鼠CD 45R/B220 抗體由美國BDB iosciences公司生產，批號：2347812;CD90.2抗體由加拿大eBioscience 公司生產，批號：E 07586-1631;液體1配比：1640培養基+2%胎牛血清+10U/ml肝素+100U /ml青鏈霉素;液體2配比：1640培養基+100U/ml青鏈霉素。

1.2 實驗動物

C57BL/6J雄性小鼠40只（合格證號：SCXK（遼）2015-0001），體質量20-22g。小鼠飼養于沈陽醫學院SPF級屏障動物房，每籠5只，自由飲水進食。

1.3 方法

將40只C57BL/6J小鼠隨機分為照射對照組和CBLB502組，每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射，劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組在照射前30分鐘為小鼠注射CBLB502，0.2mg/kg，皮下給藥，照射對照組予以腹腔注射等量生理鹽水。在照射后24h，將小鼠處死，取20ml骨髓細胞懸液加入冰乙酸中，倒置顯微鏡下計數每只小鼠的骨髓有核細胞數。將制備單細胞懸液用甲基纖維素培養基調整骨髓有核細胞數到5*107/L，接種到培養板，在37℃、5%CO 培養箱中培養，4d后在倒置顯微鏡下計數骨髓有核細胞數和集落數，集落包括紅系集落形成單位（CFU-E）、爆式紅系集落形成單位（BFU-E）、粒單 系集落形成單位（CFU-GM）。

1.4 觀察指標 對比兩組骨髓有核細胞數和集落數。

1.5 統計學分析

采用SPSS20.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組方法對X射線6.5Gy射線照射小鼠照后造血的保護作用對比

照射24h后，CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細胞數均減少，兩組之間差異無統計學意義。照后24h，CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組，差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

固有免疫系統是機體抵抗外界侵襲的重要防線，是生物在長期進化過程中形成的免疫系統。模式識別受體是固有免疫系統的重要組成部分，在固有免疫應答中發揮著及其重要的作用。TLR5是模式識別受體，可以特異性識別病原微生物表面的模式分子，促進免疫效應細胞的分化和成熟，抵御病原微生物的侵襲[3]。TLR5可表達于樹突狀細胞、腸上皮細胞、單核細胞巨噬細胞表面，細菌鞭毛蛋白是其唯一的配體。CBLB502是細菌鞭毛蛋白經過優化后的重組蛋白，免疫原性較低。研究表明，CBLB502具有明顯的輻射防護效果[4]。

本次研究中，照射24h后，CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細胞數均減少，兩組之間差異無統計學意義。照后24h，CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組，差異具有統計學意義（P<0.05），提示CBLB502對照射后早期的骨髓有核細胞數減少無明顯的作用，但是通過觀察到CBLB502組集落數的增加，表明CBLB502對輻射后造血干細胞具有較明顯的保護作用。CBLB502的輻射防護作用可能和細胞因子的表達調控和信號通路相關，其可能的作用機制為減少了骨髓造血干祖細胞凋亡和體內細胞因子表達增加，從而促進骨髓造血干細胞的更新和存活，發揮輻射防護作用。

綜上所述，CBLB502對造血干細胞輻射防護作用，值得在臨床中推廣。

參考文獻

[1] Lei W， Wen Z， Ge C H， et al. Toll‐likereceptor 5 signaling restrains T‐cell/natural killer T‐cell activation and protects against concanavalin A–induced hepatic injury[J]. Hepatology， 2017， 65（6）：2059-2073.

[2] Lopetuso L R， Jia R， Wang X M， et al. Epithelial-specific Toll-like Receptor （TLR）5 Activation Mediates Barrier Dysfunction in Experimental Ileitis.[J]. Inflammatory Bowel Diseases， 2017， 23（3）：392-403.

[3] Jager S D， Pijvelde G V， Anas A A， et al. 36Leukocyte TLR5 deficiency inhibits atherosclerosis by reduced macrophage recruitment and defective T cell responsiveness[J]. Scientific Reports， 2017， 7（103）：42688.

[4] 張源， 楊福軍， 徐文清. 輻射防護藥物研究最新進展[J]. 國際放射醫學核醫學雜志， 2017， 41（5）：353.