原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者Th1/Th2型細(xì)胞因子、M-CSF、封閉抗體檢查價值分析

亓 敏 曲蕓蕓

山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科，山東濟(jì)南 250001

復(fù) 發(fā) 性 流 產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）指的是連續(xù)2 次及2 次以上自然流產(chǎn)，發(fā)病率約1%～2%[1-3]。RSA 病因復(fù)雜，考慮與異常染色體、內(nèi)分泌異常、生殖器官異常、免疫功能異常、感染因素、全身疾病、環(huán)境因素等有關(guān)，但仍有約50%的發(fā)病原因未明確，臨床稱為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（URSA）[4-5]。為此，我院選取近期收治的URSA 患者設(shè)定研究對象，觀察Th1/Th2 型細(xì)胞因子、M-CSF、BA 的檢測水平，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

臨床資料采集2017 年10 月～2018 年10 月婦產(chǎn)科診治的80 例URSA 患者（設(shè)觀察組），選入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者早期自然流產(chǎn)次數(shù)≥2 次，最后1次流產(chǎn)在1 年內(nèi)，無生殖道畸形或感染，檢查夫妻雙方染色體均無異常，檢查配偶精液均無異常，患者、家屬知曉研究，自愿參加，簽訂同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期激素或免疫藥物服藥史，藥物過敏，夫妻染色體異常，外傷流產(chǎn)或感染，生殖道疾病，男方精液異常等患者。年齡21 ～39 歲，平均（30.3±5.3）歲，孕次2 ～4 次，平均（3.01±0.11）次，流產(chǎn)次數(shù)3 ～5 次，平均（4.21±0.31）次。另取我院80 例正常妊娠女性（設(shè)正常妊娠組），年齡20 ～37 歲，平均（30.2±4.6）歲，孕次1 ～3 次，平均（2.45±0.32）次，孕周5 ～18 周，平均（10.43±0.56）周。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計意義（P ＞0.05），具有可比性。本院倫理會同意該項研究。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 流式細(xì)胞儀（BDFACS Calibur）、Th1/Th2 亞群檢測試劑盒（杭州賽基生物科技有限公司）、ELISA 試劑盒及配套酶標(biāo)儀（美國Pierce 公司）、流式細(xì)胞儀（貝克曼FC500 型號）及配套試劑盒。

1.2.2 采集與檢測 兩組分別采集空腹?fàn)顟B(tài)靜脈血3mL，靜置1h，3000r/min，離心10min，取血清液，保存-20℃冰箱內(nèi)待檢。兩組均選用BDFACSCalibur流式細(xì)胞儀，行流式熒光法測定Th1/Th2 型細(xì)胞因子水平；選用ELISA 試劑盒及配套酶標(biāo)儀測定M-CSF 水平。另外，在測定BA 時，取男方空腹?fàn)顟B(tài)靜脈血2mL，置于EDTA 抗凝試管內(nèi)，選用貝克曼FC500 型號流式細(xì)胞儀及配套試劑測定BA 封閉效率。所有操作均按說明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.2.3 治療方法 觀察組施予淋巴細(xì)胞免疫療法治療，先提取患者配偶淋巴細(xì)胞，取2mL 靜脈血，裝至肝素?zé)o菌試管內(nèi)，搖勻，加Hank 液2mL 稀釋，搖勻。吸管吸取稀釋血液加至淋巴細(xì)胞分離液2mL的試管內(nèi)，稀釋血液與分離液形成分界后，離心處理，2000r/min，20min 離心，平口吸管吸取淋巴細(xì)胞層，Hanks 液清洗2 次，1500r/min，10min 離心，取上清，加至1mL 的RPMI-1640 培養(yǎng)液中，搖勻，取少量測定活性、細(xì)胞計數(shù)。然后，給予0.9%氯化鈉液稀釋淋巴細(xì)胞層至（2 ～3）×107個/mL，經(jīng)皮下為患者注入1.2mL，每15 天注射1 次，3 次為1 療程。1 療程后，若患者檢查封閉抗體顯陰，則再行第2 療程治療，待抗體顯陽后，考慮6 個月內(nèi)妊娠。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組Th1/Th2 型細(xì)胞因子[腫瘤壞死因子（TNF-α）、γ- 干 擾 素（INF-γ）、白 介 素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）]、M-CSF 水平變化及BA 陽性情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者Th1/Th2型細(xì)胞因子及M-CSF檢測情況

觀察組治療后正常妊娠的TNF-α、INF-γ、IL-2 水平低于治療前，IL-4、IL-6、IL-10 及M-CSF水平高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05），觀察組治療前、治療后URSA 的TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10 及M-CSF 水 平 差 異 有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05），觀察組治療后URSA 的TNF-α、INF-γ、IL-2 均高于正常妊娠組、治療后正常妊娠，IL-4、IL-6、IL-10 及M-CSF 水平均低于正常妊娠組、治療后正常妊娠，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05），見表1。

2.2 兩組患者BA陽性情況比較

觀察組治療前BA 陽性率11.25%比正常妊娠組85.00%低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05），觀察組治療后URSA 的BA 陽性率52.50%低于正常妊娠組85.00%、治療后正常妊娠87.50%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。

3 討論

近幾年，臨床關(guān)于URSA 與免疫學(xué)因素之間的關(guān)系展開大量研究。臨床研究表示，在細(xì)胞免疫中，Th1 細(xì)胞是CD4 陽性細(xì)胞，主要分泌TNF-α、IFN-γ 及IL-2 等，負(fù)責(zé)參與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)，幫助細(xì)胞毒性T 細(xì)胞分化，引導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，強(qiáng)化吞噬細(xì)胞引發(fā)的抗感染免疫，尤其是抗胞內(nèi)病原體感染；而Th2 細(xì)胞主要釋放IL-4、IL-6 及IL-10 等因子，抵抗細(xì)胞外因多細(xì)胞寄生蟲所致免疫反應(yīng)，生成抗體，避免組織損傷過度；Th1 型細(xì)胞與Th2 型細(xì)胞之間的免疫應(yīng)答互相抑制，相互制約，以促進(jìn)免疫平衡[6-7]。在正常妊娠過程中，Th2 型細(xì)胞在母體中占主導(dǎo)地位，Th1 型細(xì)胞的表達(dá)性較低，免疫應(yīng)答偏離Th1 型細(xì)胞，而Th1 型細(xì)胞分泌因子以TNF-α、IFN-γ 及IL-2 等為主，與組織損傷、炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，起著免疫殺傷作用，能阻止胚胎著床，促進(jìn)細(xì)胞增長，Th2 型細(xì)胞則多產(chǎn)生IL-4、IL-6 及IL-10 等因子，對免疫、炎癥產(chǎn)生抑制，生成抗體，能發(fā)揮免疫耐受、免疫營養(yǎng)的作用[8-10]。因此，Th1/Th2 型細(xì)胞因子在正常妊娠中轉(zhuǎn)化為Th2 型細(xì)胞因子，能保護(hù)胚胎介導(dǎo)的母體免疫應(yīng)答，故有助于妊娠保持正常。在本次研究中，觀察組治療前的TNF-α、INF-γ、IL-2 均比正常妊娠組水平高，IL-4、IL-6、IL-10 均比正常妊娠組水平低，觀察組治療后正常妊娠的TNF-α、INF-γ、IL-2 低于治療前水平，IL-4、IL-6、IL-10 高于治療前水平；這與黃俊生等[11]研究結(jié)果相似。由此可知，Th1/Th2型細(xì)胞因子平衡失調(diào)時，并偏移Th1 型細(xì)胞因子，則易出現(xiàn)流產(chǎn)，經(jīng)免疫治療后，偏向Th2 型細(xì)胞因子，則能避免流產(chǎn)。另外，本研究顯示：觀察組治療前M-CSF 比正常妊娠組水平低，觀察組治療后正常妊娠的M-CSF 高于治療前水平；提示M-CSF 水平低，亦是造成流產(chǎn)原因之一。M-CSF 水平過低，能增殖滋養(yǎng)層，并抑制其分化，故而引起流產(chǎn)；反之，水平升高，則有利于胚泡黏附，促使妊娠維持正常，降低流產(chǎn)幾率[12-13]。BA 屬于IgG 類抗體，是母體免疫系統(tǒng)遭受滋養(yǎng)層、白細(xì)胞抗原及淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原等刺激所產(chǎn)生，能結(jié)合母體淋巴細(xì)胞、胎兒滋養(yǎng)葉抗原，阻止母體免疫系統(tǒng)識別、殺傷胚胎父系抗原，用于保護(hù)胎盤，保持正常妊娠[14-16]。本研究顯示：觀察組治療前BA 陽性率11.25%比正常妊娠組85.00%低，觀察組治療后正常妊娠的BA陽性率87.50%高于治療前11.25%；表明URSA 與封閉抗體缺少相關(guān)。

表1 兩組患者Th1/Th2型細(xì)胞因子及M-CSF水平比較（pg/mL）

表1 兩組患者Th1/Th2型細(xì)胞因子及M-CSF水平比較（pg/mL）

注：與正常妊娠組比較，aP ＜0.05；與同組治療前比較，bP ＜0.05；與治療后正常妊娠比較，cP ＜0.05

組別 Th1/Th2類型細(xì)胞因子 M-CSF TNF-α INF-γ IL-2 IL-4 IL-6 IL-10正常妊娠組（n=80） 1.13±0.02 3.02±1.08 2.53±1.25 26.49±8.90 21.35±7.45 10.32±3.87 143.56±6.34觀察組 治療前（n=80） 26.20±10.25a 26.86±7.43a 24.36±8.13a 2.09±0.98a 4.12±1.03a 1.23±0.35a 87.78±9.31a t 21.876 28.400 23.737 24.374 20.491 20.923 44.293 aP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05治療后妊娠正常（n=64）2.36±1.04b 2.99±0.95b 2.87±1.16b 29.79±7.44b 28.79±6.54b 12.98±4.23b 140.98±4.23b t 20.696 28.502 23.405 33.015 33.328 24.760 46.532 bP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05治療后URSA（n=16）27.69±8.96ac 28.16±5.25ac 25.76±8.56ac 2.19±0.86ac 4.09±1.14ac 1.35±0.33ac 89.77±8.68ac t 26.513 41.951 24.018 24.307 20.483 20.656 44.759 aP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 t 25.116 42.196 23.700 32.960 33.278 24.517 47.436 cP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

總結(jié)上文，URSA 與Th1/Th2 型細(xì)胞因子、M-CSF、封閉抗體存在密切聯(lián)系，Th1/Th2 型細(xì)胞因子失調(diào)、M-CSF 水平降低、封閉抗體缺少均能引起流產(chǎn)。