HPLC法測定鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞含量的研究

司孝清

摘? 要：鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中含有抑菌劑硫柳汞，為了更好控制該產品質量，精確測定硫柳汞的含量，特建立高效液相色譜法（HPLC）的測定方法。方法： 色譜柱：Angilent HC-C18 （4.6mm×250mm，5μm）;流動相：1%三乙胺溶液（用磷酸調pH至3.0）-甲醇（30：70）;檢測波長：220nm;進樣量：20μL;流速1.0mol/min;柱溫：40℃。結果：硫柳汞峰面積與濃度的線性關系良好（r>0.999），線性范圍為0.1578～0.6312μg，加樣回收率為99.6%～100.8%之間。結論：本方法靈敏，快速，準確，重復性好，可用于鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的含量測定。

關鍵詞：鹽酸萘甲唑啉滴鼻液;硫柳汞;含量;HPLC

中圖分類號：R927.2? ? ? ? 文獻標志碼：A 文章編號：2095-2945（2019）24-0085-02

Abstract： Naphthazolin Hydrochloride Nasal Drops contain thiomersal. In order to better control the quality of the product and accurately determine the content of thiomersal， a method for the determination of thiomersal by high performance liquid chromatography（HPLC） was established. Methods： The chromatographic column was Angilent HC-C18（4.6mm×250mm， 5μm）; mobile phase， 1% triethylamine solution （adjusted to pH 3.0 with phosphate）-methanol （30：70）， the detection wavelength was 220nm; the injection volume was 20μL， the flow rate was 1.0 mol/min;column temperature： 40 ℃. Results： The linear relationship between thiomersal peak area and concentration was good（r>0.999）， the linear range was 0.1578～0.6312μg， and the recovery was 99.6%～100.8%. Conclusion： The method is sensitive， rapid， accurate and reproducible， and can be used for the determination of the content of thiomersal in Naphthazolin Hydrochloride Nasal Drops.

Keywords： Naphthazolin Hydrochloride Nose Drops; thiomersal; content; HPLC

前言

鹽酸萘甲唑啉屬于咪唑啉類的擬交感神經藥，是廣泛用于眼和鼻粘膜的減充血劑，是一種有效的作用于結膜小動脈α腎上腺素能受體的血管收縮劑。當應用于粘膜時，萘甲唑啉引起血管收縮，從而達到迅速并能夠延長減少腫脹和結膜充血的作用，廣泛用于成人過敏性及炎癥性鼻充血、急慢性鼻炎。鹽酸萘甲唑啉無抑菌作用，為了防止鹽酸萘甲唑啉滴鼻劑多次使用時發生微生物增長，在處方中添加了抑菌劑，以確保用藥的安全性。查閱收集到的產品說明書，發現市場上銷售的鹽酸萘甲唑啉滴鼻液處方中標注的抑菌劑為硫柳汞。中國藥典2015版（ChP2015）收載的鹽酸萘甲唑啉滴鼻液沒有硫柳汞的檢測，為考察鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的穩定性，建立鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的檢測方法。

1 儀器與試藥

SARTORIUS BT125D型電子天平，LC-2030島津二極管陣列檢測器，LC-2030四元低壓泵，Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱。硫柳汞對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號135050-201401），2，2'-二硫代水楊酸（北京百靈威科技有限公司），三乙胺（分析純，廣州化學試劑廠），磷酸（分析純，廣州化學試劑廠）、甲醇（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司），鹽酸萘甲唑啉滴鼻液（ 廣東恒健制藥有限公司自制）。

2 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）;流動相：1%三乙胺溶液（用磷酸調pH至3.0）-甲醇（30：70）;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;檢測波長：220nm;進樣量：20μL;溶劑：水。2，2'-二硫代水楊酸與硫柳汞峰的分離度應大于1.5（圖1）。

3 方法與結果

3.1 溶液的配制

系統適用性試驗溶液：稱取2，2'-二硫代水楊酸和硫柳汞對照品各約10mg，置50ml量瓶中，加甲醇-水（90：10）適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取1ml，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液：精密稱取硫柳汞對照品適量，加水定量稀釋成0.02mg/ml的溶液。

供試品溶液：取鹽酸萘甲唑啉滴鼻液作為供試品溶液。

3.2 專屬性試驗

取供試品溶液（硫柳汞陰性）、供試品溶液以及對照品溶液，分別進樣20μl，記錄色譜圖。結果：鹽酸萘甲唑啉和其他輔料均不干擾硫柳汞的檢測。（圖2～圖4）

3.3 線性和范圍

精密稱取硫柳汞對照品適量，加水定量稀釋成0.2mg/ml的溶液，精密量取適量，分別加水稀釋成8μg/ml、12μg/ml、16μg/ml、20μg/ml、24μg/ml、32μg/ml的溶液分別進樣20μl，記錄色譜圖。以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積A為縱坐標，繪制標準曲線（圖5），求得回歸方程y=2823068.8x-10654.4，r=1.0000（n=6），結果表明：硫柳汞進樣量在0.1578～0.6312μg范圍內與峰面積成良好線性關系。

3.4 進樣精密度

取對照品溶液進樣20μl，連續進樣6次，RSD為0.08%，進樣精密度良好。

3.5 重復性試驗

取供試品溶液6份，分別進樣20μl，RSD為0.12%，方法重復性良好。

3.6 回收率試驗

精密稱取硫柳汞對照品適量，加稀釋劑（取鹽酸萘甲唑啉和其他輔料按處方比例配制而成）稀釋至刻度，配制成相當于硫柳汞標示濃度的80%、100%、120%的供試品溶液，每個濃度配制3份，分別進樣20μl，計算回收率（%）。結果：本方法回收率在99.6%～100.8%之間，RSD（n=9）為0.33%，方法準確度良好。

3.7 討論

（1）2，2'-二硫代水楊酸為硫柳汞主要降解產物，美國藥典40版（USP40）對硫柳汞中雜質A（2，2'-二硫代水楊酸），經對鹽酸萘甲唑啉滴鼻液進行酸、堿、氧化、光照、高溫破壞，樣品中硫柳汞的含量檢測結果表明：硫柳汞在光照條件下降解較快（圖6），降解產物為2，2'-二硫代水楊酸。故本檢測方法中以2，2'-二硫代水楊酸峰和硫柳汞峰的分離度作為系統適用性，以增加方法的專屬性和準確度，硫柳汞對光敏感，溶液的配制應避光操作。

1.光照降解產物（2，2'-二硫代水楊酸）;2.硫柳汞

（2）本研究使用等度洗脫，硫柳汞峰的出峰時間在5～6min之間，能達到快速分析的目的，方法靈敏、準確、重復性好，適用于鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中硫柳汞的含量測定。

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