重樓多糖提取工藝的優化

錢蕾 陳陽 皖南醫學院 法醫病理學教研室 安徽蕪湖 241002

重樓,又名"蚤休",屬華中珍稀瀕危植物【1】,廣泛分布于云南、四川等地,以蚤休之名始載于《神農本草經》【2】,味苦、微寒,具清熱解毒、消腫止痛功效,民間多用于治療毒蛇咬傷、流行性腮腺炎,也用于驚風抽搐.其主要化學成分有甾體皂苷、黃酮以及多糖,其中多糖具有降血壓、抗氧化及免疫調節等活性,因此日益成為中藥材評價指標之一.前期研究表明重樓多糖具有較好的體外活性,對其提取工藝的研究報道較少,故本實驗通過熱水浸提法提取重樓多糖,設計正交實驗優化提取工藝,優選最佳提取條件,為重樓多糖在醫藥及保健領域的開發應用提供科學依據.

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器

小型高速粉碎機WK-2000A (青州市精誠醫藥裝備制造有限公司) SHB-ⅢS循環水式多用真空泵 (鄭州長城科工貿有限公司) 酶標儀 (美國Bio-TeK公司) 離心機SIGMA4K15

1.2 試劑與材料

重樓(安國藥源商貿有限公司) 葡聚糖標準品 (色譜純,美國Sigma-Aldrich公司)

所用試劑均為分析純,水為去離子水 三氯甲烷、正丁醇、無水乙醇

2 方法與結果

2.1 標準曲線的繪制

采用改良蒽酮硫酸法, 以葡萄糖為標準品, 濃度為橫坐標, 吸光值為縱坐標, 繪制標準曲線, 得線性回歸方程:Y=3.6927X-0.0067,R2=0.9987.

2.2 單因素考察

稱取5份重樓粉末2g,分別按固液比1:20、1:30、1:40、1:50、1:60加入純水,70℃提取2h,提取液補足減失重量,離心、抽濾,稀釋至適當濃度用改良蒽酮硫酸法630nm測吸光度,結果提取率先增大后減小,1:30最大.

稱取5份重樓粉末2g,加80mL純水,分別40、50、60、70、80℃提取2h,同法測吸光度,結果提取率先增大后減小,60℃最大.

稱取5份重樓粉末2g,加80mL純水,70℃分別提取1、1.5、2、2.5、3h,同法測吸光度,結果提取率先增大后減小,2.5h最大.

3 正交試驗

結合單因素試驗結果,設計三因素三水平正交試驗,分別進行9組實驗.結合方差分析,對多糖得率影響最大的是提取時間,最佳提取條件為,固液比1:30、提取溫度60℃、提取時間2.5h,此條件下多糖得率為13.91%.

表1 L9(33)正交實驗結果

表2 正交實驗結果方差分析

4 結論

通過單因素分析,設計正交試驗,提取時間對多糖得率影響最大,PC<0.01,因素C具有極顯著性差異.通過本文研究發現:重樓多糖的最佳提取條件是,固液比1:30、提取溫度60℃、提取時間2.5h.在此條件下,重樓多糖得率為13.91%.該研究結果提高了重樓多糖的提取效率,優化了提取工藝,為重樓多糖的開發利用提供科學依據.