全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定黃山貢菊中糖苷的研究

黃貴鳳 張迪 張席席 鄒敬 楊金龍

摘 要：通過(guò)酶解的方法對(duì)黃山貢菊中的糖苷進(jìn)行水解，用全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)糖苷水解后的苷元進(jìn)行測(cè)定，從而間接測(cè)定黃山貢菊中的糖苷。實(shí)驗(yàn)對(duì)酶解后萃取的溶劑種類和體積進(jìn)行優(yōu)化，以確定最佳實(shí)驗(yàn)條件。通過(guò)全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜共準(zhǔn)確鑒定出36種苷元。其中芳香族14種、萜類4種、C13降倍碳萜類4種、脂肪族9種和雜環(huán)類5種。

關(guān)鍵詞：黃山貢菊;糖苷;酶解;全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜

Abstract：The glycosides in Huangshan Gongju were hydrolyzed by enzymatic hydrolysis， and the hydrolyzed aglycones were determined by comprehensive two-dimensional gas chromatography/time-of-flight mass spectrometry， to indirectly determine the glycosides. The type and volume of extracting agent for extracting glycosides were optimized. A total of 36 kinds of aglycone have been determinated. Among them， 14 kinds of aromatics， 4 kinds of C13 nor-sesquiterpenes， 4kinds of terpenes， 9 kinds of aliphatics and 5 kinds of heterocyclics.

Key words：Huangshan gongju; Glycosides; Enzymatic hydrolysis; Comprehensive two-dimensional gas chromatography/

time-of-flight mass spectrometry

中圖分類號(hào)：S567.23

黃山貢菊又稱貢菊，是一種廣受大眾喜愛(ài)的茶飲，其氣味清香，具有清熱解毒、提高人體免疫力等功

能[1]。香氣是決定茶飲好壞的重要因素，而植物體內(nèi)的香氣物質(zhì)不僅以游離態(tài)的形式存在，也可與糖及其衍生物結(jié)合成鍵合態(tài)的糖苷存在于植物體內(nèi)。這類物質(zhì)可通過(guò)水解釋放出自由態(tài)香氣物質(zhì)，被稱為香氣前體。研究表明[2]，糖苷可通過(guò)水解釋放自由態(tài)香氣物質(zhì)，從而增加植物的香氣。本文對(duì)糖苷進(jìn)行了酶解，并用全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)所釋放的苷元進(jìn)行鑒定，建立了對(duì)菊花中糖苷進(jìn)行測(cè)定的準(zhǔn)確方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

7890A全二維氣相色譜儀;KT-2001型冷噴調(diào)制解調(diào)器;Pegasus 4D飛行時(shí)間質(zhì)譜儀。

1.2 儀器條件

載氣流速為1.0 mL·min-1，分流比2∶1。進(jìn)樣口溫度：250 ℃，進(jìn)樣量2.0 μL。一維柱（HP-5MS）在60 ℃保持1 min，以5 ℃·min-1升到270 ℃，并保持

5 min;二維柱（DB-17HT）在70 ℃保持1 min，以5 ℃·min-1升到280℃，保持5 min。電離源電壓70 eV;離子源溫度230 ℃;頻率100 Hz，質(zhì)量范圍33～450 amu，周期4 s。

1.3 樣品制備

在50 mL錐形瓶中加1 g樣品、20 mL甲醇和5 μL苯基-β-葡萄糖苷溶液，超聲30 min，重復(fù)3次。收集萃取液并過(guò)濾，氮?dú)獯蹈珊螅苡? mL pH=5.5的磷酸緩沖溶液中。加5個(gè)單位的β-葡萄糖苷，瓶口密封，40 ℃下酶解48 h。用4 mL MTBE萃取后，用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)0.45 μm有機(jī)系濾膜后，進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果討論

2.1 萃取條件的確定

實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)[3]選擇β-葡萄糖苷酶進(jìn)行酶解，酶解反應(yīng)的pH在4.0～6.0，酶解溫度為40～50 ℃。之后對(duì)萃取溶劑種類和體積進(jìn)行優(yōu)化。首先用3 mL的MTBE、二氯甲烷、環(huán)己烷、石油醚及氯仿對(duì)酶解后的苷元進(jìn)行萃取。結(jié)果表明，MTBE的萃取總峰面積最大，且沒(méi)有拖尾峰，因而萃取溶劑MTBE的萃取效率最高。分別用1、2、3、4 mL及5 mL的MTBE萃取酶解后的苷元。結(jié)果表明：萃取溶劑量為4 mL時(shí)，苯基-β-葡萄糖苷的回收率較高，且不存在過(guò)載現(xiàn)象。因此選擇4 mL為實(shí)驗(yàn)的萃取溶劑體積。

2.2 測(cè)定結(jié)果

以S/N≥100為標(biāo)準(zhǔn)，得到205個(gè)峰，通過(guò)與NIST譜庫(kù)的比照，以相似度大于800為標(biāo)準(zhǔn)，共鑒定出36種苷元（見(jiàn)表1），黃山貢菊中的糖苷種類豐富。其中芳香族14種、萜類4種、C13降倍碳萜類4種、脂肪族9種和雜環(huán)類5種。含量最高的3種化合物分別是苯乙醇、3-氧代-α-紫羅蘭醇、苯甲醇。苯乙醇具有玫瑰花香，3-氧代-α-紫羅蘭醇具有紫羅蘭花香、木香。萜類是一類很重要的生物活性物質(zhì)。因此水解糖苷不僅增強(qiáng)其香味，增加保健價(jià)值，具有很高的研究?jī)r(jià)值。

3 小結(jié)

采用酶解法對(duì)黃山菊花糖苷進(jìn)行水解，并采用全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜法對(duì)酶解釋放的苷元進(jìn)行分析。結(jié)果表明，該方法適用于黃山貢菊中糖苷的測(cè)定，共鑒定出36種苷元，主要為芳香族和C13降倍碳萜類，主要成分為苯乙醇、3-氧代-α-紫羅蘭醇、苯甲醇等，解釋了菊花花香的來(lái)源，為菊花的加工利用提供了方法上的參考和依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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[2] Dziadas M，Jeleń， Henryk H. Comparison of enzymatic and acid hydrolysis of bound flavor compounds in model system and grapes[J]. Food Chemistry，2016（190）：412-418.

[3]Gunata Y Z，Gunata Y S，Bayonove C L，Tapiero C，et al. Hydrolysis of grape monoterpenylBeta-D-glucosides by various Beta-glucosidases[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1990（38）：1232-1236.