HPLC法測定8種市售碳酸飲料中山梨酸的含量

張卓 楊巍巍 顧博文 趙映紅

摘 要：本研究采用高效液相色譜法（HPLC法）檢測了8種市售碳酸飲料中山梨酸的含量。結果表明：碳酸飲料中的山梨酸含量在0.134～0.249 g·kg-1范圍內，線性關系（r2>0.999 9），平均回收率為100.41%～103.36%，RSD為1.08%。用該方法測定的飲料中的山梨酸，均未超過最大添加量。該方法精密度、重復性和準確度均良好，可用于碳酸飲料中山梨酸含量的測定。

關鍵詞：山梨酸;飲料;高效液相色譜法

Abstract：The content of sorbic acid in 8 kinds of carbonated beverages was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）. The results showed： the content of sorbic acid in carbonated beverages ranged from 0.134 to

0.249 g·kg-1. The linear relationship （r2>0.999 9）， and the recoveries were 100.41%～103.36%， with RSD was 1.08%.The sorbic acid determined by this method did not exceed the maximum addition. The method has good precision， repeatability and accuracy， which can be used for detection of content of sorbic acid in carbonated beverages.

Key words：Sorbic acid; Beverages; High performance liquid chromatography

中圖分類號：O657.72;TS275.3

食品添加劑是為改善食品色、香、味等品質，以及為滿足防腐和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或天然物質[1]。目前我國食品添加劑有22個類別，2 000多個品種，其中防腐劑和甜味劑在目前的食品加工過程中廣泛使用[2]。山梨酸有廣泛的抗菌活性，因此常作為防腐劑添加到食品中，以滿足保藏需要。山梨酸在一定范圍劑量內，對人體無害，但如果濫用，就會有一定的毒害作用。在GB 2760-2014《食品添加劑使用標準》中，對最大使用量有明確的規定，飲料類食品中，山梨酸計最大使用量為0.5 g·kg-1。本研究利用高效液相色譜法對8種碳酸飲料中的山梨酸含量進行測定。

1 材料與方法

島津LC-16高效液相色譜儀（紫外檢測器，自動進樣器，柱溫箱，色譜工作站）;超聲波清洗器（昆山市儀器公司）;天平（METTLER TOLEDO）;0.22 μm水系微孔濾膜。

甲醇（色譜純 Fisher Scientific）;乙二胺（色譜純macklin）;山梨酸標準品（Dr.Ehrenstorfer）;碳酸飲料樣品（元氣森林汽水，格瓦斯汽水，怡泉等，均購于超市）。

2 方法

2.1 流動相與標準液的配制

2.1.1 乙酸銨溶液配制

準確稱取3.11 g乙酸銨，加入適量水溶解，用水定容至2 000 mL，經0.22 μm水系微孔濾膜抽濾。

2.1.2 標準儲備液的配制

準確稱取0.134 5 g山梨酸標準品，用甲醇溶解并定容至100 mL。其山梨酸含量為1 345 mg·L-1。

2.1.3 標準中間液

準確吸取山梨酸標準儲備液10.0 mL于50 mL容量瓶中，用水定容。其山梨酸含量為269 mg·L-1。

2.1.4 標準使用液

分別準確吸取山梨酸標準中間液0、0.05、0.25、0.50、1.00 mL及2.50 mL，用水定容至10 mL。其山梨酸含量為0、1.345、6.725、13.45、26.9 mg·L-1及67.25 mg·L-1，作為標準系列溶液。

2.2 樣品前處理

準確稱取市售的8種碳酸飲料2 g，超聲20 min，至50 mL容量瓶中，定容至刻度，經0.22 μm濾膜過濾，濾液待液相色譜測定。

2.3 色譜條件

色譜柱：C18柱（柱長250 mm，內徑4.6 mm，粒徑5 μm）;流動相：甲醇-乙酸銨溶液（體積比為5∶95）;流速：1.0 mL·min-1;柱溫：30 ℃;檢測波長：230 nm;進樣體積：10 μL;用保留時間定性，外標法定量。

3 結果與分析

3.1 系統適用性實驗

在2.3的色譜條件下，用26.9 mg·L-1的山梨酸標準溶液進樣，記錄色譜圖，見圖1。如圖所示，理論塔板數大于5 000。

3.2 精密度實驗

在2.3的色譜條件下，用26.9 mg·L-1的山梨酸標準溶液進樣，進行精密度試驗，進行6次重復測定，記錄峰面積，計算RSD。見表1。

3.3 線性范圍與檢測限

在2.3的色譜條件下，對山梨酸標準使用液系列進行測定。以標準品濃度x（mg·L-1）為橫坐標，峰面積y為縱坐標，進行線性回歸，山梨酸在0～67.25 mg·L-1范圍內線性關系良好。以3倍信噪比、10倍信噪比計算檢出限、定量限，回歸方程、相關系數、檢出限及定量限見表2，標準曲線見圖2。

3.4 加標回收率實驗

稱取一定量的碳酸飲料3份，加入2.1.3制備的標準樣品中間液，將其稀釋成濃度為6.725、13.45、

26.9 mg·L-1的溶液在2.3的色譜條件下測定并計算回收率，結果見表3。

3.5 樣品測定

取市售的8種碳酸飲料，按照2.2的方法和2.3的色譜條件進行分析，得到8種樣品色譜圖，記錄峰面積，并計算樣品中山梨酸含量，實驗結果見表4。

4 結論

通過實驗研究發現，被檢測的8種市售碳酸飲料中的山梨酸含量均未超出國家標準。該方法靈敏度高，操作簡便，結果準確，有良好的線性范圍和穩定性。

參考文獻：

[1]闞建全，龐 杰，劉 玲，等.食品化學[M].第3版.北京：中國農業大學出版社，2016.

[2]宗珊盈，李 超，張 娟，等.超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定食品中7中防腐劑和4種甜味劑[J].中國食品添加劑，2016（6）：195-199.