儀器法在檢測網織紅細胞中的應用價值

陳述英

江西省萍鄉市蘆溪縣婦幼保健院 （江西萍鄉 337200）

網織紅細胞（reticulocyte，RET）是一種尚未成熟的紅細胞，主要經骨髓進入血液，并在24～48 h內合成約20%的血紅蛋白，其是有效評價機體內骨髓造血干細胞功能的重要指標，在血液性疾病的臨床診斷及病情評估中具有較高的應用價值[1]。近年來，隨著臨床對快速診療需求的不斷提高，傳統手工法檢測RET逐漸被自動化儀器檢測RET技術所取代，儀器法檢測具有速度快、可重復等特點，與手工法的耗時長比較具有一定優勢，但目前臨床尚未有統一的標準檢測系統，對儀器檢測結果準確性的評估尚不完善，因此其臨床應用存在一定爭議性[2-3]。本研究分析儀器法在檢測RET中的應用價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年5月至2019年2月江西省萍鄉市蘆溪縣婦幼保健院72例住院及門診患者，其中男42例，女30例；年齡15～72歲，平均（38.68±5.14）歲；住院患者39例，門診患者33例。所有標本均為空腹采集的抗凝靜脈血，均于當天完成相關檢測。

1.2 方法

1.2.1 標本制作

抽取患者空腹靜脈血2 ml，放入含有乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝劑中進行抗凝處理，混合均勻后，在室溫下放置10～20 min，然后進行檢測（所有標本均于當天完成相關檢測）。

1.2.2 儀器法檢測

采用Sysmex XE-2100全自動血液分析儀及其配套的相關試劑，以Sysmex XE-2100自動模式進行標本檢測，每份標本連續檢測2次后，取平均值。

1.2.3 手工法檢測

嚴格參照試劑廠家關于RET染色液的相關使用說明操作進行，取清潔干燥試管1支，滴入2滴由珠海貝索生物技術有限公司提供的RET生產染色液（成分為新亞甲藍），并加入經過EDTA-K2抗凝處理的標本血液2滴，遵照1：1比例混合。在室溫下靜置20 min后取出1滴制片，并由2名檢驗科室經驗豐富的人員采取雙盲法分別計數1 000個紅細胞內含有的RET，換算成百分比，以%表示，求其平均值。

根據患者血紅蛋白值不同（血紅蛋白＞120 g/L、90 g/L≤血紅蛋白≤120 g/L、血紅蛋白＜90 g/L）分為高、中、低3個級別，每個級別標本24份，將每份標本采用儀器法及手工法分別測定5次RET，取其平均值。

1.3 臨床評價

比較儀器法與手工法測定RET的結果。

1.4 統計學處理

采用SPSS 24.0統計軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 儀器法與手工法檢測RET結果比較

儀器法檢測RET為（3.65±1.24）%，手工法檢測RET為（3.35±1.18）%，差異無統計學意義（t=1.487，P=0.139）。

2.2 儀器法與手工法檢測不同濃度血紅蛋白RET結果比較

儀器法檢測高、中、低濃度血紅蛋白RET結果與手工法比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 儀器法與手工法檢測不同濃度血紅蛋白RET結果比較（%，±s）

表1 儀器法與手工法檢測不同濃度血紅蛋白RET結果比較（%，±s）

檢測方法 高濃度（24份） 中濃度（24份） 低濃度（24份）儀器法 1.28±0.79 1.77±0.76 3.98±2.74手工法 1.27±0.79 1.72±0.74 4.00±2.81 t 0.044 0.231 0.025 P 0.965 0.818 0.980

3 討論

手工法是應用于RET檢測最傳統的方法，雖具有檢測時間長、重復性差等缺點，但仍是目前臨床用于RET檢測的一種有效復核方法[4]。而近年來，隨著檢驗技術的不斷發展與進步，檢測RET的全自動血液分析儀逐漸取代傳統手工檢測法，并廣泛應用于臨床各類血液性疾病檢測中。

儀器法檢測重復性優于傳統手工法，分析主要原因為血液分析儀在進行RET檢測時可有效控制質量，本研究中儀器法檢測采用Sysmex XE-2100全自動血液分析儀進行，采用半導體激光流式原理及細胞化學染色技術，提高了檢測速度及臨床應用的便捷性。全自動血液分析儀使用新型的聚次甲基熒光染料進行染色，其中含有與次甲基相連的雜環核，因此當染料與核酸或膜有效結合后，將會干涉分子運動，繼而吸收更多的光，繼而在檢測過程中發生強熒光。RET檢測過程中，應首先處理稀釋液，促使血液中白細胞及紅細胞增大，利于檢測的染色，由于不同細胞中RNA含量存在一定差異性，因此可通過染色有效區分RET及紅細胞，并根據DNA及RNA含量不同區分白細胞，繼而利用不同細胞熒光染色，于激光照射下產生不同強度的側向光及側向散射光、前向散射光，并通過不同的通道對RET進行檢測[5]。本研究結果顯示，儀器法與手工法RET檢測結果無明顯差異，且儀器法與手工法在不同濃度血紅蛋白中的RET檢測結果亦無明顯差異，表明儀器法應用于RET臨床檢測中具有較高的準確性，可為血液性疾病的診斷及鑒別提供全新的檢測指標。

與傳統手工法比較，儀器法具有檢測速度快的特點，每小時可檢測約150個標本，且檢測模式多樣，檢測靈活，可滿足對不同血液標本檢測的需求，應用范圍廣。此外，所用的儀器具有恒定的溫度及染色時間，可有效避免手工法中人為因素的不利影響，且消除了檢測中抗凝劑的影響，因此具有檢測速度快、可重復、干擾因素少、操作簡便等特點，可作為臨床血液檢測的常規方法，但儀器法檢測成本較高，無法在基層醫院及經濟困難患者中得到廣泛推廣[6]。此外，血小板團塊等可影響儀器檢測結果，且儀器法臨床應用中針對RET檢測結果較高的患者，應結合人工法再次進行檢測，以保證檢測結果的準確性，降低漏診率及誤診率。

綜上所述，儀器法與手工法檢測RET結果無明顯差異，兩者均可應用于臨床RET檢測中，但前者具有更好的重復性。