miR-21與子宮內膜癌的相關性研究

河南科技大學第一附屬醫院（471003）韓振坤 王曉宏

探尋子宮內膜癌的發病機制，明確其治療靶標，是提高子宮內膜癌治療效果的根本途徑。miRNAs的表達或功能異常可能是惡性腫瘤發生的主要誘因。miR-21是一種新發現的miRNA。既往研究表明，miR-21在胃癌、腎癌、肺癌等多種惡性腫瘤組織中呈現高表達態勢，并發揮類似促癌基因的作用。但miR-21在子宮內膜癌組織中的表達及其臨床意義尚未完全明確。本研究旨在探討子宮內膜癌組織中miR-21表達水平變化，并分析其與子宮內膜癌臨床病理特征的關系，以期為子宮內膜癌的臨床診療提供依據。

1 材料與方法

1.1 組織樣本 50例子宮內膜癌組織樣本由河南科技大學第一附屬醫院提供（2014年10月～2017年10月所收治子宮內膜癌病例）。患者年齡25～68歲，平均年齡（53.8±10.4）歲；所有樣本均經病理證實為原發性子宮內膜癌，術前均未接受放化療，且病理資料完整。同時取對應癌旁組織（距癌組織邊緣≥1cm），并經病理證實為正常子宮內膜組織。

1.2 試劑與設備 RT-PCR儀（美國Bio-Rad）；逆轉錄試劑盒、RT-PCR試劑盒（美國Promega公司）；TRIzol試劑（美國Invitrogen公司）；miR-21、U6引物由上海生工生物工程有限公合成。

1.3 總RNA提取 取2mm3組織樣本制備組織勻漿，按TRIzol試劑盒說明書提取組織中總RNA，DEPC水溶解，取1μLRNA經1%瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性，采用Bio-Rad檢測RNA純度及濃度。

1.4 逆轉錄反應 嚴格按照說明書操作。

1.5 PCR擴增 嚴格按照說明書操作。

1.6 統計學方法 SPSS20.0進行數據分析，計量資料用均值±標準差（Mean±SD）表示，組間比較用t檢驗，P＜0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 子宮內膜癌組織與正常子宮內膜組織miR-21表達水平比較 RT-PCR檢測結果顯示，子宮內膜癌組織中miR-21表達水平顯著高于正常子宮內膜組織（2.38±0.31 vs 0.65±0.11）（t=5.823，P＜0.05），見附圖。

2.2 子宮內膜癌組織miR-21表達水平與臨床病理特征的關系 miR-21表達水平與FIGO分期及淋巴轉移有關（P＜0.05），miR-21表達水平與年齡、絕經、病理類型及分化程度無關（P＞0.05）（見附表）。

3 討論

既往認為，子宮內膜癌的發生與長期雌激素刺激有關。但之后人們發現，并非所有類型的子宮內膜癌都是激素依賴型的。進一步明確子宮內膜癌的發病機制，對于子宮內膜臨床診療具有積極的指導意義[1]。miRNA屬于高度保守的非編碼小分子單鏈RNA，并廣泛存在于真核生物中，調控著約30%的人類基因。正常生理狀態下，機體內miRNA表達遵守嚴格的組織、時序特異性；但在腫瘤環境下，甲基化、基因組丟失或擴增等均可導致miRNA表達異常[2]。Zhai等[3]研究顯示，子宮內膜癌組織中miR-205表達顯著高于正常子宮內膜組織（P＜0.05）；且miR-205表達與臨床預后密切相關，miR-205表達越高者生存期越短。周飛梅等[4]研究發現，相較于正常子宮內膜組織，子宮內膜癌組織中miR-101表達顯著降低，且miR-101表達水平與子宮內膜癌臨床分期、分化程度及肌層浸潤深度有關（P＜0.05）。上述研究提示，miRNAs參與子宮內膜癌的發生與發展。因此，深入研究miRNAs與子宮內膜癌的相關性有利于進一步明確子宮內膜癌的發病機制。

附圖 子宮內膜癌組織及正常子宮內膜組織中miR-21表達水平比較。注：與正常子宮內膜組織比較，**P＜0.05。

附表 子宮內膜癌組織miR-21表達水平與臨床病理特征的關系分析（±s）

附表 子宮內膜癌組織miR-21表達水平與臨床病理特征的關系分析（±s）

病理特征 例數 miR-21相對表達量 t P絕經 是 18 2.41±0.35 0.042 0.985否 32 2.36±0.47年齡 ≥40 26 2.48±0.58 0.194 0.846＜40 24 2.34±0.29病理類型子宮內膜樣腺癌 35 2.55±0.63 1.782 0.092非子宮內膜樣腺癌 15 2.32±0.76 FIGO分期中分化 20 2.36±0.33低分化 13 2.39±0.54淋巴結轉移I～II 21 2.08±0.55 3.251 0.034 III～IV 29 2.89±0.43分化程度高分化 17 2.47±0.27 0.391 0.071是 12 2.78±0.25 3.178 0.041否 38 2.21±0.30

miR-21是公認的促癌基因，其定位于人類17q23.2染色體FRA17B脆性區域上，而17q染色體區域的擴增可誘發多種惡性腫瘤。故認為，以17q染色體區域擴增為主的表觀遺傳調控是導致miR-21表達上調的主要因素。轉染干擾質粒simiR-21至結腸癌細胞HT-29，可沉默細胞中miR-21表達，同時抑制細胞增殖、遷移及浸潤能力，并促進細胞凋亡，其機制可能與靶向程序性細胞死亡因子4（programmed cell death factor 4，PDCD4）有關。

食管癌組織中miR-21表達顯著高于癌旁上皮組織（P＜0.05），利用siRNA技術抑制食管癌EC109細胞中miR-21表達可顯著降低細胞侵襲和轉移能力，同時顯著提高細胞肌球家族蛋白1（tropomyosin 1，TPM1）表達，提示miR-21可能通過靶向TPM1表達介導食管癌細胞侵襲和轉移。沉默卵巢上皮性癌順鉑耐藥細胞中miR-21表達，可抑制PTEN/PI3K/Akt信號通路激活，減輕卵巢上皮性癌順鉑耐藥細胞的抗凋亡能力，并提高卵巢上皮性癌順鉑耐藥細胞對順鉑化療的敏感性，提示miR-21過表達可能是導致卵巢癌順鉑耐藥的主要分子機制。上述研究提示，miR-21在多種惡性腫瘤的進展過程中發揮著與促癌基因相似的作用。但其在子宮內膜癌進展中的作用尚不明確。

本研究結果顯示，子宮內膜癌組織中miR-21表達水平顯著高于正常子宮內膜組織（P＜0.05），該結果與相關報道一致，提示miR-21過表達可能在某種程度上促進子宮內膜癌的發生與發展。進一步分析子宮內膜癌組織中miR-21過表達與子宮內膜癌臨床病理特性相關性發現，FIGO分期越高則miR-21表達越高（P＜0.05），提示miR-21過表達可能是促進子宮內膜癌進展的主要因素；盆腔淋巴轉移者miR-21表達與高于無淋巴轉移者（P＜0.05），提示miR-21過表達可能參與了子宮內膜癌細胞侵襲及遷移。此外，miR-21表達水平與年齡、絕經、病理類型及分化程度無關（P＞0.05），提示miR-21表達不易受個體因素或其他因素影響，其可能是子宮內膜癌早期診斷、療效判定和預后評估的潛在指標。

綜上所述，miR-21在子宮內膜癌組織中過表達，且其過表達與子宮內膜癌FIGO分期及盆腔淋巴轉移密切相關。miR-21可能是子宮內膜癌的診斷標志物和治療靶點。