苯醚甲環唑·丙環唑對水稻紋枯病室內配方篩選試驗

陳紅丹,孟慶寶,范偉贈,楊明君，趙梅勤，徐雅飛

(浙江天豐生物科學有限公司，浙江 金華 321025)

苯醚甲環唑(Difenoconazole)是三唑類殺菌劑，具有保護、治療和內吸活性。是甾醇脫甲基化抑制劑，抑制細胞壁甾醇的生物合成，阻止真菌的生長。殺菌譜廣，葉面處理或種子處理可提高作物的產量和保證品質。可用于番茄、甜菜、香蕉、禾谷類作物、水稻、大豆、園藝作物及各種蔬萊等。丙環唑(Propiconazole)是一種具有保護和治療作用的內吸性三唑類殺菌劑，可被根、莖、葉部吸收，并能很快地在植物株體內向上傳導，防治子囊菌，擔子菌和半知菌引起的病害，特別是對小麥全蝕病、白粉病、銹病、根腐病，水稻惡菌病，香蕉葉斑病具有較好的防治效果。兩者混用可擴大殺菌譜、降低各自單劑用量，減少使用成本。本試驗測定了其藥劑不同施藥劑量下的防除活性，為其工業化生產提供科學的理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗靶標

水稻紋枯病菌(R.solani AG-1 IA)由浙江天豐生物科學有限公司新產品開發與研究室提供。

1.2 單劑及其復配制劑對水稻紋枯病菌的抑菌測定

1.2.1 培養基的配制 先洗凈去皮，再稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛(煮沸20～30min，能被玻璃棒戳破即可)，用八層紗布過濾，加熱，再據實際實驗需要加瓊脂，繼續加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，加入葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補足水分至1000mL，分裝錐形瓶，加塞、包扎，(121℃)滅菌20min左右后取出試管擺斜面或者搖勻，冷卻后貯存備用。

1.2.2 含毒介質法 首先將藥劑配制成不同濃度的含毒培養基平板，以沒有加藥的平板培養基為對照，每處理設置3皿。待含毒培養基平板冷卻凝固后，在每個平板上放入2個全蝕病菌菌餅(直徑為6mm)，用保鮮膜密封，寫好標簽，在適宜條件下培養72～96h后，測定菌落直徑。

1.2.3 調查方法 每個菌落用直尺以十字交叉法測定菌落的凈生長量，計算其抑制率。

相對抑制率=(對照菌落凈生長量-含藥菌落凈生長量)/對照菌落凈生長量×100%，并建立回歸方程，進行抑制中濃度EC50的比較。

根據各藥劑濃度對數值及對應的防效幾率值作回歸分析，計算各藥劑的EC50、EC90等值及其95%置信限。

進行藥劑聯合毒力測定時，根據Wadley法計算混劑的增效系數(SR)，評價混劑的聯合作用類型。

Wadley法：根據增效系數(SR)來評價藥劑混用的增效作用，即SR<0.5為拮抗作用，0.5≤SR≥1.5為相加作用，SR>1.5為增效作用。增效系數(SR)按式(1)、式(2)計算：X1=(PA+PB)/(PA/A+PB/B)×100 ………(1)

式中：X1—混劑的EC50理論值，單位為毫克每升(mg /L)；

PA—混劑中A的百分含量，單位為百分率(%)；

PB—混劑中B的百分含量，單位為百分率(%)；

A—混劑中A的EC50值，單位為毫克每升(mg /L)；

B—混劑中B的EC50值，單位為毫克每升(mg /L)。

SR=X1/X2 ………………………………(2)

式中：SR——混劑的增效系數；

X1—混劑EC50理論值，單位為毫克每升(mg /L)；

X2—混劑EC50實測值，單位為毫克每升(mg /L)。

1.3 儀器設備

電子天平(感量0.1mg)；人工氣候培養箱；生物培養箱；培養皿；接種器；移液槍；超凈工作臺；卡尺等。

1.4 試驗設計和安排

1.4.1 試驗藥劑及配制 97%苯醚甲環唑/TC、95%丙環唑/TC均由浙江天豐生物科學有限公司提供。將原藥用有機溶劑溶解配成母液，按設置劑量用含0.1%的吐溫-80的蒸餾水稀釋成試驗劑量進行處理。苯醚甲環唑處理劑量為50、56.25、62.5、68.75、75mg/L (編號分別為A1～A5)；丙環唑處理劑量為50、60、70、80和90mg /L(編號分別為B1～B5)；苯醚甲環唑和丙環唑混劑分別設置50、56.25、62.5、68.75、75mg/L 5個濃度梯度，然后按照苯醚甲環唑與丙環唑9∶21、12∶18、15∶15、18∶12、21∶9，5個配比；另設空白對照，每一處理設4次重復。

2 結果與分析

2.1 苯醚甲環唑、丙環唑單劑及混劑對水稻紋枯病菌的毒力

2.1.1 苯醚甲環唑與丙環唑單劑的毒力 表1，隨著用藥劑量的增加苯醚甲環唑和丙環唑兩個藥劑對紋枯病菌的抑制作用逐漸增加。本試驗中苯醚甲環唑施用到最高劑量對水稻紋枯病菌的防效僅為53.50%。用藥梯度間防效下降差異不是很明顯，試驗中最低用藥劑量防效僅為15.00%。劑量與毒力成回歸相關，相關系數為0.9917，回歸方程為y=7.0226+6.4912x，EC50為71.14mg/L。苯醚甲環唑施用到最高劑量對紋枯病菌的防效達到了99.13%，用藥劑量降至70mg/L防效差異下降并不明顯，當用藥劑量從60mg/L降至50mg/L時，防效下降幅度達到了41%。用藥劑量與毒力成回歸相關，相關系數R為0.9958，回歸方程為y=14.5645+11.2493x x，EC50為54.85mg/L。

2.1.2 苯醚甲環唑、丙環唑混劑的毒力 表2是苯醚甲環唑與丙環唑不同配比不同施藥劑量下對水稻紋枯病菌的抑制作用。隨苯醚甲環唑和丙環唑混劑用藥劑量的增加，對水稻紋枯病菌的抑制作用均有不同程度的提高，混劑配比為15∶15用藥劑量為62.5mg/L時最高防效達到了100%。苯醚甲環唑和丙環唑配比為9∶21、12∶18、18∶12、21∶9抑制水稻紋枯病菌生長用藥劑量與毒力成回歸相關，其毒力回歸方程、抑制中濃度、和增效系數分別為：y=49.7050+31.2627x，EC50=56.21mg/L，SR=1.05；y=50.1507+31.5584x，EC50=55.92mg/L，SR=1.08；y=48.9616+31.4522x，EC50=51.96mg/L，SR=1.22；y=15.5359+11.5596x，EC50=59.77mg/L，SR=1.09。

表1 不同濃度苯醚甲環唑與丙環唑對水稻紋枯病菌的毒力

表2 苯醚甲環唑、丙環唑復配對水稻紋枯病菌的毒力

3 結論

通過室內測定苯醚甲環唑、丙環唑五種不同配比的混劑對抑制水稻紋枯病菌的中濃度EC50和增效系數SR。結果表明，二者復配對兩種靶標均表現出一定的增效作用，其中苯醚甲環唑和丙環唑五種配比本試驗中對水稻紋枯病菌均表現出明顯的增效作用。苯醚甲環唑、丙環唑以15∶15進行復配時對水稻紋枯病菌的中濃度最小，為41.20mg/L，增效系數SR為1.503，增效作用明顯。因此，綜合考量兩者復配對于兩種靶標的增效作用，推薦苯醚甲環唑和丙環唑的最佳配比為苯醚甲環唑：丙環唑=12～18∶12～18，廠家推薦配比為15∶15，在該合理配比范圍之內。可見，其配比基本科學合理。

試驗結果表明，在一定的用藥劑量范圍內，苯醚甲環唑和丙環唑復配對水稻紋枯病菌均具有抑制作用。由于以上結果是在室內完成，室內各種環境條件同大田有一定的差異，有必要開展田間藥效試驗進一步驗證配方的合理性及確定使用劑量范圍。