不同品牌膠體金免疫層析法試劑檢測原料乳中氟苯尼考的研究

□ 趙媛 宋曉東 馬文麗 林立民 內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司

氟苯尼考（Florfenicol），又名氟甲砜霉素，是一種新的獸醫專用氯霉素類廣譜抗菌藥，具有吸收性好、體內分布廣、廣譜抗菌、安全高效等特點，且對敏感菌所導致的畜禽細菌性疾病有顯著的治療效果，故其作為氯霉素的替代物被廣泛用于治療畜禽及水產品的細菌性疾病。研究表明，氟苯尼考具有胚胎毒性和耐藥性，在畜禽生產中的大量應用將導致其在畜禽產品中有所殘留，進而危害人體健康。歐盟、日本等國家均制定了動物食品中氟苯尼考的最大殘留量標準，我國農業部235號公告也對其殘留量作了嚴格規定——在牛、羊泌乳期禁用。

目前，檢測動物源性食品中氟苯尼考殘留的方法主要有電位法、分光光度法、色譜法、免疫分析法等。其中，免疫分析法中的膠體金免疫測定法是一種利用膠體金顆粒物標記抗原或抗體的一類檢測方法，具有直觀簡單、快速方便、成本低廉等特點，因此常被乳制品企業用作定性篩查方法。

本研究對市售不同品牌的膠體金免疫層析法試劑在檢出限、重復性、特異性、干擾性等方面檢測原料乳中氟苯尼考殘留結果進行對比，以期為乳制品企業選擇試劑品牌提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

讀數儀；溫育器；移液器；不同品牌氟苯尼考金標快速檢測試紙條。

1.2檢測方法

依據不同品牌氟苯尼考金標快速檢測試紙條說明書進行操作。選取市售5種不同品牌的試劑廠家進行實驗，品牌名稱分別用A、B、C、D、E代替。

1.3 樣品制備及檢測

樣品不需要前處理——回溫至室溫后直接檢測，按照不同品牌試劑的操作方法進行，并用讀數儀判讀結果。

1.4 檢出限實驗

選取陰性原料乳樣品6份，向其中5份樣品中各加入氟苯尼考標準品，分別配制成不同濃度的水平樣品，其中1份作陰性對照，按照不同品牌試劑操作方法進行檢測，并計算各個試劑的樣品陽性率。

1.5 重復性實驗

選取陰性原料乳樣品，加入氟苯尼考標準品，配制成0.1μg/kg濃度水平的樣品，按照不同品牌試劑的操作方法進行檢測，每種試劑重復檢測20組，并計算各個試劑的樣品陽性率。

1.6 特異性實驗

選取陰性原料乳樣品，加入氯霉素、氟苯尼考等同類藥物標準品，分別配制成0.1μg/kg濃度水平的樣品，按照不同品牌試劑操作方法進行檢測，每種試劑檢測6組，并測定是否存在交叉反應。

1.7 干擾性實驗

選取陰性原料乳樣品，加入干擾性物質后，分別配制成0.1μg/kg濃度水平的樣品，按照不同品牌試劑的操作方法進行檢測，每種試劑檢測6組，并測定試劑是否存在干擾。

2 結果與分析

2.1 檢出限

根據不同品牌試劑方法檢出樣品的陽性率不同，由此可得出各個試劑的檢出限。檢出限結果對比如表1所示,品牌B、C、D試劑檢出限均為0.05μg/kg,品牌A試劑檢出限為0.07μg/kg,品牌E試劑檢出限為0.1μg/kg。

表1 檢出限實驗結果對比

表2 重復性實驗結果添加濃度

表3 干擾性實驗結果(n=6)

2.2 重復性

通過檢測同一濃度水平的20組樣品，可知品牌C、D、E試劑陽性率為100%，具有良好的重復性，重復性實驗結果見表2。

2.3特異性

根據各個品牌試劑檢測同一濃度水平的同類氯霉素藥物，得出特異性實驗結果，各個品牌試劑均無交叉反應，表明試劑特異性良好。

2.4干擾性

根據各個品牌試劑檢測同一水平的干擾物質，結果顯示，除品牌E試劑存在干擾外，其余4個品牌試劑均無干擾，具有良好的抗干擾性，干擾性實驗結果見表3。

3 結論

通過對5種不同品牌膠體金免疫層析法試劑的研究，發現品牌C、D試劑方法的靈敏度高、重復性好、特異性強、抗干擾性強，在乳制品企業實際檢測工作中可以用于快速初篩原料乳中氟苯尼考藥物，提高了實驗效率，提供了技術保障，避免了質量風險。