雞大腸桿菌病病原的分離鑒定及藥敏試驗

荊麗珍

摘 要 本試驗目的是采用6種常用抗菌藥物進行藥敏試驗，再篩選出敏感藥物，為預防和治療大腸桿菌病提供理論依據并指導臨床用藥。方法是對送檢的病死雞和瀕死雞進行了剖檢、病理學診斷和病原檢測，無菌采取的病死雞組織進行細菌的分離鑒定，并通過藥敏紙片法對其純化培養物進行藥敏試驗。

關鍵詞 大腸桿菌；分離與鑒定；藥敏試驗

雞大腸桿菌病是由某些致病性血清型大腸埃希菌引起的雞的不同類型疾病的總稱。大腸桿菌致病性菌株的致病因子是由侵襲力、感染力和致病性這三個主要特征決定。大腸桿菌主要有菌體抗原、莢膜抗原、鞭毛抗原三個病原類型，這三種抗原形成了眾多的血清型。該菌對外界抵抗力比較弱，一般高壓蒸汽滅菌鍋121℃30min便可將其殺死，對一般消毒藥的抵抗力也很弱，常用的消毒藥水均能將其殺死。

本實驗對海陽六合雞場送檢的瀕臨死亡的雞只和病死雞進行了解剖檢查，并且進行了病理學診斷和病原檢測，確診該海陽雞場發生了大腸桿菌病。通過做藥敏試驗，選擇出幾種藥物，而這些藥物通常是對此致病菌比較敏感的，然后進行藥物治療，以此達到控制疫情效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料及實驗動物

所有病料來自海陽六合養殖場送檢的疑似大腸桿菌病的病雞、瀕臨死亡雞40只，已經死亡雞只的死亡時間不超過18h。實驗動物為：20只健康小白鼠和20只7日齡健康雛雞。

1.1.2 儀器與設備

恒溫箱，光學顯微鏡，全自動高壓滅菌器，超凈工作臺，美國微量移液器、剪刀、試管等。

1.1.3 培養基與試劑

伊紅美蘭瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、普通肉湯培養基、營養瓊脂培養基。

卡那霉素、新霉素、慶大霉素、青霉素、鏈霉素和四環素等藥敏片，硝酸鹽還原劑、氧化酶試劑、微量生化試驗管。

1.2 方法

1.2.1 外部觀察和病理剖檢

根據大腸桿菌病的流行病學特點，表現出來臨床癥狀，以及對送檢的40只病死雞和瀕臨死亡的雞只進行的病理臨床剖檢及相關病理癥狀觀察，根據表現出來的相關剖檢特征， 可以對大腸桿菌病作出初步診斷。

1.2.2 細菌分離培養

在無菌條件下采集瀕臨死亡雞只的肝臟、腎臟、脾臟、心血等組織器官，分別接種在普通營養瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美蘭瓊脂平板及普通營養肉湯，放于恒溫箱中37℃，24h后觀察培養基的變化。

1.2.3 染色鏡檢

用接種環分別挑取具有代表性的麥康凱瓊脂、伊紅美蘭瓊脂和普通營養瓊脂平板上培養24h的菌落進行涂片，將涂片在火焰上方15-20cm處進行順時針方向旋轉固定，在火焰中穿過三次，等待涂片冷卻后進行革蘭氏染色。顯微鏡下觀察并記錄菌體形態。

1.2.4 生化試驗

a. 糖發酵試驗：用滅菌接種環取疑似菌，依次將其接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖發酵管內，置于溫箱內37℃，24h，然后對觀察到的現象進行記錄。

b. MR試驗和VP試驗：用滅菌接種環取疑似菌，接種于葡萄糖蛋白胨水，置于溫箱內37℃，24h之后分別加入MR和VP指示劑，然后觀察并記錄結果。

c. 吲哚試驗：取蛋白胨水培養管，先往培養管內加入少量的乙醚，然后把橡膠塞密切塞上，來回搖動試管，充分混勻乙醚和培養液，最后在試管架上靜置片刻，等到乙醚浮在液面上層的時候，沿著管壁加入2-3滴吲哚試劑，并觀察其顏色變化。

2 結果與分析

2.1 外部觀察及剖檢結果

患病雞只多精神狀態差，羽毛松亂，不想進食，腹部膨大，糞便呈灰綠色或黃色。有的病雞肛門下方羽毛潮濕、污穢粘連，關節腫脹、跛行，眼睛顏色呈灰白色，角膜污濁不清；剖檢病雞肝臟腫大、質脆，有纖維素性壞死灶；脾臟出現腫大，肺臟有充血、淤血的現象；腎腫大，有尿酸鹽附著；十二指腸有出血變化。

2.2 細菌分離培養結果

將接種細菌的普通營養瓊脂平板，37℃培養20h，可見上面出現大小均等偏中間，高于瓊脂板圓形，表面呈現光滑濕潤的菌落，半透明狀，偏灰色的菌落。在麥康凱瓊脂平板上，表面呈中等大小，光滑濕潤的粉紅色菌落。在伊紅美蘭瓊脂上長出黑色帶金屬光澤的菌落。在普通肉湯中平均散在其中呈濁狀，在試管的最下面可見灰白色物質，用手扇一下聞到糞臭味。

2.3 細菌形態學觀察結果

病死雞只的肝臟、腎臟、脾臟等組織器官培養物經過涂片染色，顯微鏡下鏡檢，都可出現兩端鈍圓，多數呈散在排列，有的有2-3個連在一起的革蘭氏陰性短桿菌，沒有芽孢。

2.4 生化試驗結果 結果詳見表1.

3 討論與小結

本次試驗是主要從可疑病雞及病死雞體內分離得到的可疑菌，通過鏡下及培養條件觀察、生理生化試驗分析鑒定，鑒定的結果為雞大腸桿菌的感染。通過藥敏試驗的結果，得出卡那霉素、新霉素、慶大霉素等藥物對大腸桿菌敏感度高，四環素藥物為中度敏感的藥物，青霉素、鏈霉素等藥物具有耐藥性。根據大腸桿菌抗原鑒定和擴增結果，由此更加斷定我所分離得到的待測菌為大腸桿菌。由于不同菌株對藥物的敏感性存在明顯差異，一般在使用藥物治療病原菌時，應該增加對病原菌的耐藥性檢測，從而選擇出對病原菌敏感的藥物，為臨床合理用藥做出指導，用以減緩細菌耐藥性的產生。加強飼養管理，疫苗免疫，合理選藥、提高療效。

參考文獻：

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學[M].第四版.中國農業出版社，2005，50-51.

[2]戴建軍.鄭明球.等.不同來源雞大腸桿菌致病性研究[J].畜牧與獸醫，2001，33（2）：3-5.