大腸桿菌與哺乳仔豬關系的定性研究

廖生錢

福建省南靖縣山城畜牧獸醫站 福建南靖 363600

仔豬大腸桿菌病是規模化養豬場普遍而又危害較嚴重的傳染病之一[1]。仔豬黃白痢病死率雖然不高，但嚴重影響仔豬生長發育，導致飼養成本增高，給養豬業帶來巨大經濟損失。目前，關于豬大腸桿菌病的流行病學以及預防和治療已受到普遍的認識，但關于大腸桿菌在養豬場3日齡內仔豬中的實際分布及其規律的研究卻鮮有人知。筆者在工作期間，利用一存欄6 000頭的規模豬場和南靖縣農業農村局實驗室的條件，結合豬場的生產實際，采用定性方法檢測大腸桿菌在3日齡內仔豬不同部位不同時間段出現的情況，以探討大腸桿菌在試驗豬中的實際分布和規律，分析微生物與豬的相互關系，為現代養豬場環境監控及生物安全提供科學的參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 直徑9 cm培養皿，麥康凱培養基；恒溫箱（國產）；冰箱（國產）；滅菌高壓鍋（國產）；溫度計，鑷子，酒精燈，彩色記號筆，滅菌棉簽，滅菌水，手術刀等。

1.2 試驗動物 不同產房3日齡以內的初生哺乳仔豬3頭，以色筆為記；分娩過程悶死的仔豬3頭。

1.3 試驗方法

1.3.1 大腸桿菌定性監測點的確定 通過考察大腸桿菌可能分布的位置，進行實地檢測，考察大腸桿菌實際分布及其疏密程度。

1.3.1.1 初生至3日齡內仔豬 對仔豬從初生即開始檢測其口腔、腹部、肛門、肛門深部（黏膜）等部位的大腸桿菌，按以下時間點進行檢測：0 min、5 min、15 min、30 min、60 min、120 min、3 h、5 h、7 h、2 d、3 d。

1.3.1.2 分娩過程悶死的仔豬 發現因悶死的仔豬，立即按無菌要求剖開并檢測口腔、胃、十二指腸、大腸。

1.3.2 大腸桿菌定性測定結果判定依據 接種后的麥康凱培養基立即置37℃恒溫箱培養24 h，根據培養皿上紅色菌落的多少及其紅色菌落疏密程度（以下稱疏密度），判定如下：－：不見紅色菌落；＋：紅色菌落數少，不相連；＋＋：紅色菌落多，有相連；＋＋＋：紅色菌落有相連，有單個；＃：紅色菌落成片。

1.3.3 試驗過程

1.3.3.1 試驗準備 把麥康凱培養基從冰箱中取出，待晾干后用彩色筆在培養皿背面劃六等分、四等分若干個分區，并對其進行編號，分別為①～⑥、①～④，各對應培養皿分別用阿拉伯數字（1、2、3---）編號標記。

試驗母豬分娩的仔豬編號（4997a、4602a、5625a） 在 0 min、5 min、15 min、30 min、60 min、120 min、3 h、5 h、7 h、2 d、3 d 十一個檢測時間點分別依次對應培養皿編號（1、2、3、---31、32、33）。

悶死的仔豬（死胎一、死胎二、死胎三）分別對應培養皿（34、35、36）編號。

1.3.3.2 檢測點大腸桿菌的分離接種 按照試驗設計，分別對選定的各檢測點，用滅菌棉簽在滅菌水中蘸濕后，逐一做同心圓涂擦約1 min，無菌條件下操作，立即在培養基規定的區內劃線分離接種。并注意劃線時不要劃破培養基[2]，盡可能密些，同一培養皿上的不同區注意不可互相連接。劃線接種后立即將培養皿放入恒溫箱37℃培養24 h，觀察有無細菌生長及其菌落疏密度。

1.4 數據整理和分析 詳細記錄試驗結果，并以圖表法整理，便于分析和對比。

2 結 果

2.1 初生仔豬不同部位大腸桿菌分布及疏密度

2.1.1 仔豬口腔 從圖1可看出，在出生0.5～2 h，初生仔豬口腔中基本檢測不到大腸桿菌，之后呈現較高程度檢出。但是與編號4602及5625母豬所生的仔豬相比，編號4997母豬所生仔豬的大腸桿菌檢出程度低得多。

2.1.2 仔豬腹部 編號4997母豬所生的仔豬腹部，出生7 h后仍呈現無大腸桿菌分布狀態，而編號4602母豬所生的仔豬無大腸桿菌狀態只維持60 min，編號5625母豬所生的仔豬維持0 min，見圖2。

2.1.3 仔豬肛門 從圖3可看出，初生仔豬肛門周圍檢測不到大腸桿菌的狀態可以維持1～3 h，之后分布程度逐漸加大。

2.1.4 仔豬肛門深部黏膜 從圖4可看出，初生仔豬肛門深部黏膜的大腸桿菌在出生后的第1 d呈現不同程度分布，但是在第2 d均有高的檢出。

2.2 分娩過程悶死仔豬消化道大腸桿菌分布及疏密度 分娩過程悶死仔豬消化道大腸桿菌分布及疏密度見圖5。分娩過程悶死仔豬消化道中基本檢測不到大腸桿菌的存在。

3 討 論

圖1 初生仔豬口腔的大腸桿菌疏密度

圖2 初生仔豬腹部的大腸桿菌疏密度

圖3 仔豬肛門周圍的大腸桿菌疏密度

試驗結果顯示，初生仔豬大腸桿菌檢出的最早時間是出生后的5 min，遲的可達3 h，之間的主要差別在于產房環境中大腸桿菌疏密度的高低。仔豬體內的大腸桿菌主要是由口腔進入，而口腔的大腸桿菌主要來自于仔豬生存的環境。隨著仔豬的活動及時間的延長，口腔及其他檢測點的大腸桿菌在不斷增多。仔豬有很強的探究性，如果仔豬周圍環境不夠清潔，也就很容易導致微生物進入口腔，因此，控制產房環境的衛生質量，尤其是對分娩母豬的外陰和乳頭進行清潔和消毒，對仔豬微生物感染程度有著很大的重要性，是減少大腸桿菌進入仔豬體內的有效方法。

圖4 初生仔豬肛門深部黏膜的大腸桿菌疏密度

圖5 分娩過程悶死仔豬消化道大腸桿菌分布及疏密度

大腸桿菌無處不在，動物一旦出生，就與大腸桿菌終生相伴[3]。同其他動物一樣，微生物與豬群之間有著密切關系。除了少數的微生物可能是豬的病原體外，許多微生物還有益于機體的健康。由致病性大腸桿菌引起的仔豬大腸桿菌病，一直困擾著養豬業的發展。仔豬培育階段是養豬生產的關鍵環節之一，大腸桿菌的感染所造成的損失，除了直接引起仔豬消化道疾病，還導致仔豬生長不良、養殖成本提高等[4]。在條件好的養豬場，對母豬產房和待產母豬體表的嚴格清潔和消毒采取了積極的措施，然而，對消毒后的效果很少去“追究”，因而相關研究資料也少見。實際上，我們對大腸桿菌的了解還是很有限，“有關大腸桿菌傳播途徑知道得還很少，許多地方還不了解，如仔豬疾病的發生，到底與感染的程度還是因為仔豬對感染抵抗力的強弱有關，目前尚未清楚”[5]。

在規模化養豬場，豬群所有的生長條件都依靠人為提供。如果對豬群尤其是仔豬出生初期，對大腸桿菌的實際分布有進一步的了解，則有利于生產過程的環境質量控制，有利于對現代養豬場生物安全措施的科學制定。本試驗研究的結果，在一定程度上彌補了規模化養豬場初生仔豬與大腸桿菌實際分布資料和科學數據的空缺。