Glut-1及VEGF在結腸癌中的表達及與臨床指標的關系

宋曉華　張江國　呂紅

【摘要】 目的：探討葡萄糖轉運蛋白-1（Glut-1）及血管內皮生長因子（VEGF）在結腸癌中的表達及與臨床指標的關系。方法：選取2015年1月-2019年1月深圳市蛇口人民醫院腫瘤科收治的42例結腸癌患者的手術切除標本，應用免疫組織化學染色法檢驗Glut-1、VEGF在結腸癌中的表達及與臨床指標的關系。結果：VEGF表達與腫瘤大小和臨床分期均無關（P>0.05），而與淋巴結轉移、分化程度均有關（P<0.05）。Glut-1表達與腫瘤大小和分化程度均無關（P>0.05），與臨床分期和淋巴結轉移均有關（P<0.05）。結論：結腸癌患者的VEGF表達與淋巴結轉移、分化程度明顯相關，Glut-1表達與淋巴結轉移、臨床分期有關。

【關鍵詞】 葡萄糖轉運蛋白-1; 血管內皮生長因子; 結腸癌; 表達

Expression of Glut-1 and Vascular Endothelial Growth Factor in Colon Cancer and Their Relationship with Clinical Markers/SONG Xiaohua，ZHANG Jiangguo，LYU Hong.//Medical Innovation of China，2019，16（22）：0-048

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of Glut-1 and vascular endothelial growth factor（VEGF）in colon cancer and their relationship with clinical parameters.Method：42 cases of colon cancer were selected from January 2015 to January 2019 in Department of Oncology，Shenzhen Shekou Peoples Hospital.The expression of Glut-1 and VEGF in colon cancer and their relationship with clinical indicators were examined by immunohistochemical staining.Result：VEGF expression was not correlated with tumor size and clinical stage（P>0.05），but correlated with the differentiation degree of lymph node metastasis（P<0.05）.The expressions of glut-1 were not correlated with tumor size and differentiation degree（P>0.05），but with clinical staging and lymph node metastasis（P<0.05）.Conclusion：The expression of vascular endothelial growth factor in patients with colon cancer is significantly correlated with lymph node metastasis and differentiation，and the expression of Glut-1 is correlated with lymph node metastasis and clinical stage.

【Key words】 Glucose transporter-1; Vascular endothelial growth factor; Colon cancer; Expression

First-authors address：Shenzhen Shekou Peoples Hospital，Shenzhen 518000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.22.012

結腸癌（colon cancer）在腫瘤科中屬常見、多發疾病，是主要發生于結腸部位的消化道惡性腫瘤。據全國腫瘤登記中心最新數據顯示，目前結腸癌的發病率依舊居全國惡性腫瘤前列，較高的發病率與死亡率嚴重威脅人們的生命健康。據統計，結腸癌的好發部位主要在直腸、乙狀結腸結合部，另外橫結腸、盲腸末端以及升結腸下部等也是結腸癌的好發部位。近年來，大量臨床研究證實，腫瘤的過快增長常導致葡萄糖利用和攝取量遞增，使葡萄糖轉運蛋白-1（glucosetransporter 1，Glut-1）表達上調，而為獲得相應的營養供應，更多的葡萄糖又會被轉運至細胞內[1]。血管內皮細胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是常見的多肽聚合物，其功能極為強大，文獻[2]報道在特定體液環境下，內皮細胞特定會受VEGF的誘導作用而分裂增殖和轉移正常的內皮細胞或使內皮細胞不正常分裂增殖和轉移。借此，本文將采用免疫組化方法對結腸癌的相關指標進行檢測，分析Glut-1、VEGF與臨床病例參數的相關性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1月-2019年1月廣東省深圳市南山區蛇口人民醫院腫瘤科收治的42例結腸癌患者的手術切除標本，所有標本均經雙盲法復診確定。在42例結腸癌標本中，男21例，女21例，年齡32～80歲，平均（55.0±2.5）歲。

1.2 儀器與方法

1.2.1 主要儀器及試劑 （1）儀器：Galanz醫用微波爐（英國）、Thermo自動脫水機（英國）、Autostainer 480免疫組化染色儀（美國）、Olympus照相顯微鏡（日本）等;（2）試劑：CST兔抗人VEGF單克隆抗體（美國）、Glut-1抗體（Santa Cruz公司）、氚標-葡萄糖（中國原子能研究所）、MTT溶液（Sigma公司）。

1.2.2 染色方法 （1）將石蠟切片保持在36 ℃環境下烘烤2 h，然后用二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水，在37℃的過氧化氫（H2O2）溶液中孵10 min，接著用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）沖洗3次，5 min/次。（2）將其置入1 000 mL枸櫞酸（Citric Acid）緩沖液中煮沸（95 ℃）15～20 min，自然冷卻（>20 min）后用冷水沖洗缸子，然后降溫冷卻至常溫后再用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次。（3）使用正常羊血清工作液將其封閉在37 ℃環境下10 min，滴加一抗后放置在冰箱（4 ℃）孵育過夜，使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次（PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）;接著滴加生物素標記二抗，并在37 ℃環境下孵育0.5 h，磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次;滴加辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）標記的鏈霉素卵白素工作液，在37 ℃環境下孵育0.5 h，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗3次，5 min/次。（4）DAB/過氧化氫（H2O2）反應染色，接著用自來水沖洗后使用蘇木素復染，最后常規脫水、透明干燥、封片和攝片。

1.3 觀察指標 觀察VEGF表達與各項臨床指標的關系，Glut-1表達與各項臨床指標的關系。

1.4 統計學處理 采用SPSS 21.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF表達與各項臨床指標的關系 VEGF表達與腫瘤大小和臨床分期均無關（P>0.05），而與淋巴結轉移、分化程度均有關（P<0.05），見表1。

2.2 Glut-1表達與各項臨床指標的關系 Glut-1表達與腫瘤大小和分化程度均無關（P>0.05），Glut-1表達與臨床分期和淋巴結轉移均有關（P<0.05），見表2。

3 討論

近年來，某腫瘤微環境的相關研究指出，大部分腫瘤患者的病理組織學特征常出現在低氧組織區域，且隨著腫瘤的不斷生長，腫瘤的惡性程度也會隨之遞增[3-5]。而造成這種惡性表型生長的重要因素則與低氧微環境中存活的HIF-1調控腫瘤細胞相關，其中HIF-1下游基因中所包含的Glut-1及VEGF兩種糖酵解代謝相關基因又與腫瘤的進展、轉移和腫瘤新生血管形成息息相關[6-10]。

通常情況下，Glut-1是廣泛分布于血腦屏障的內皮細胞和紅細胞等正常組織中，它作為葡萄糖轉運蛋白家族中的重要組成成員之一，在許多惡性腫瘤中均有過表達，文獻[11-15]報道其與腫瘤的轉移、臨床分期和預后密切相關，這在結腸癌中同樣有體現。本研究中，VEGF表達與腫瘤大小和臨床分期均無關（P>0.05），而與淋巴結轉移、分化程度有關（P<0.05）;Glut-1表達與腫瘤大小和分化程度均無關（P>0.05），Glut-1表達與臨床分期和淋巴結轉移均有關（P<0.05）。結合實際情況來看，這可能是不同的抗體濃度、實驗方法、結果判定標準等誤差造成的，但Glut-1在結直腸癌組織中的表達明顯高于正常組織[16-20]。大量臨床研究數據表明，新生血管的形成是實體腫瘤生長和轉移的重要步驟，當最初的實體腫瘤細胞生長到小集落時（通暢情況下，體積<1 mm3），它的生長與存貨則與其促進血管生成和適應缺氧環境的能力相關。VEGF可通過酪氨酸激酶受體調節內皮細胞的運動和增殖及改變新生血管通透性而為腫瘤提供營養，促進新生癌組織的血流灌注，增強癌細胞的增殖活性。本研究中，VEGF表達與腫瘤大小與臨床分期均無關（P>0.05），而與淋巴結轉移、分化程度均有關（P<0.05），提示VEGF在結腸癌發展和轉移過程中起著重要作用。

結腸癌患者的VEGF表達與淋巴結轉移、分化程度明顯相關，Glut-1表達與淋巴結轉移、臨床分期有關。

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（收稿日期：2019-03-20） （本文編輯：張爽）