RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變及結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義

趙巍 李琳 張肖潔 何英 蔣萍 龍培濱 柳平平 王丹丹

[摘要]目的 探討RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變及結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義。方法 選擇2012年1月～2018年1月我院病理科確診的262例結(jié)直腸鋸齒狀病變，其中增生性息肉（HP）87例，廣基鋸齒狀息肉/腺瘤（SSA/P）96例，傳統(tǒng)鋸齒狀腺瘤（TSA）79例;另選取60例正常腸黏膜標(biāo)本以及60例結(jié)直腸癌（CRC）標(biāo)本。通過(guò)免疫組化染色對(duì)各標(biāo)本中RUNX3和p53的表達(dá)進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。結(jié)果 RUNX3陽(yáng)性表達(dá)率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸降低，在SSA/P、TSA及CRC中明顯降低;SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的RUNX3陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。p53陽(yáng)性表達(dá)率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸升高，在SSA/P、TSA及CRC中明顯升高;SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的p53陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 RUNX3和p53在鋸齒狀病變到CRC的發(fā)生過(guò)程中起作用，兩者可能是促進(jìn)鋸齒狀腺瘤惡變的危險(xiǎn)因素，對(duì)鋸齒狀腺瘤的患者預(yù)測(cè)CRC的發(fā)生具有一定的臨床價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]RUNX3;p53;結(jié)直腸鋸齒狀病變;免疫組化

[中圖分類(lèi)號(hào)] R734.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）7（b）-0040-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of RUNX3 and p53 in colorectal serrated lesions and colorectal cancer. Methods A total of 262 specimens of colorectal serrated lesions diagnosed in the pathology department of our hospital from January 2012 to January 2018 were selected， including 87 cases of hyperplastic polyps （HP）， 96 cases of sessile serrated adenoma/polyp （SSA/P）， and 79 cases of traditional serrated adenoma （TSA）. Another 60 normal intestinal mucosa and 60 colorectal cancer （CRC） specimens were selected. The expression of RUNX3 and p53 in each specimen was analyzed and evaluated by immunohistochemical staining. Results The positive expression rate of RUNX3 gradually decreased in normal intestinal mucosa， HP， SSA/P， TSA， CRC， and significantly decreased in SSA/P， TSA and CRC. The positive rate of RUNX3 between SSA/P， TSA， CRC and normal intestinal mucosa， HP was statistically significant （P<0.05）. The positive expression rate of p53 increased gradually in normal intestinal mucosa， HP， SSA/P， TSA， CRC， and increased significantly in SSA/P， TSA and CRC. The positive rate of p53 between SSA/P， TSA， CRC and normal intestinal mucosa， HP was statistically significant （P<0.05）. Conclusion RUNX3 and p53 play the roles in the occurrence of serrated lesions to CRC. They may be the risk factors of the progress of serrated adenoma to adenocarcinoma. The detection of RUNX3 and p53 in serrated adenoma patients can help to predict the occurrence of CRC.

[Key words] RUNX3; p53; Colorectal serrated lesion; Immunohistochemistry

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。國(guó)外有研究顯示大部分的CRC是由“腺瘤-癌”的經(jīng)典途徑發(fā)展而來(lái)，約35%的CRC是由鋸齒狀途徑發(fā)展而來(lái)[1]。鋸齒狀腺瘤（serrated adenoma，SA）的惡變率較高，發(fā)展迅速，因此引起人們的廣泛關(guān)注。WHO（2010）消化系統(tǒng)腫瘤新分類(lèi)把鋸齒狀病變分為4類(lèi)[2]：增生性息肉（hyperplastic polyp，HP）、廣基鋸齒狀息肉/腺瘤（sessile serrated adenoma/polyp，SSA/P）、傳統(tǒng)鋸齒狀腺瘤（traditional serrated adenoma，TSA）、鋸齒狀腺癌（serrated adenocarcinoma，SAC）。這些病變經(jīng)歷了多個(gè)階段，有多種因素及多個(gè)基因共同參與，引起基因?qū)W及多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常，最終導(dǎo)致鋸齒狀病變發(fā)展為CRC[3-7]。

RUNX3（runt-related transcription factor 3）是一種抑癌基因，國(guó)外研究顯示[7]，其在人類(lèi)腸道腫瘤中表達(dá)異常。RUNX3能指導(dǎo)TGF-β信號(hào)通路過(guò)程，通過(guò)抑制細(xì)胞增生、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，在CRC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著重要角色。p53基因是另一種抑癌基因，其能維持細(xì)胞的正常增殖，當(dāng)發(fā)生突變時(shí)，抑制癌細(xì)胞的功能就會(huì)喪失，從而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化最終發(fā)展為CRC。本研究旨在探討RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變及CRC中的表達(dá)情況，為CRC的預(yù)防提供臨床依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

收集2012年1月～2018年1月我院病理科確診為息肉的2814例標(biāo)本，進(jìn)行回顧性閱片。根據(jù)WHO（2010）消化系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，由3名病理科醫(yī)師從上述標(biāo)本中篩選出鋸齒狀病變262例，其中HP 87例，SSA/P 96例，TSA 79例。另選取正常腸黏膜及CRC各60例，進(jìn)行免疫組化染色。HP病理診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]：①膨脹細(xì)長(zhǎng)的隱窩，表淺1/3～1/2為鋸齒狀結(jié)構(gòu)，基底1/2為非鋸齒狀結(jié)構(gòu);②細(xì)胞核小并且一致，細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，靠近基底側(cè)排列規(guī)則;③被覆成熟的、結(jié)構(gòu)正常的柱狀細(xì)胞及杯狀上皮細(xì)胞。SSA/P病理診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]：①鋸齒狀隱窩結(jié)構(gòu)明顯異常，腺體扭曲擴(kuò)張;隱窩基底部呈分枝狀、L型或倒置T型;②多累及下1/3隱窩，上皮/間質(zhì)>50%，底部的隱窩可見(jiàn)成熟的杯狀細(xì)胞;③整個(gè)隱窩扭曲變形，增殖區(qū)位于隱窩側(cè)壁，呈不對(duì)稱(chēng)分布。TSA病理診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]：①腺體呈明顯彌漫的鋸齒狀輪廓，具有明顯異型增生，細(xì)胞質(zhì)呈彌漫嗜酸性;②可見(jiàn)異位、擴(kuò)張的隱窩。排除標(biāo)準(zhǔn)：病理切片不完整或不能完全符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定。

1.2主要試劑

RUNX3抗體購(gòu)于日本MBL公司;p53抗體購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3方法

標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，免疫組化染色采用Envision法，實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以PBS代替一抗設(shè)陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性結(jié)直腸腺體組織為陽(yáng)性。

1.4評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

RUNX3和p53的陽(yáng)性表達(dá)均定位于細(xì)胞核。3名病理科醫(yī)師負(fù)責(zé)判讀各免疫組化結(jié)果，陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)定為棕褐色、棕黃色及黃色。以組織切片中細(xì)胞的染色程度和陽(yáng)性細(xì)胞的比率進(jìn)行評(píng)分。規(guī)定細(xì)胞染色用分?jǐn)?shù)計(jì)算，細(xì)胞核的顏色越深則分?jǐn)?shù)越高，棕褐色為3分，棕黃色為2分，黃色為1分，未著色為0分。在400倍顯微鏡下，隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)高倍視野中計(jì)數(shù)100個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，若陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為0%～9%，計(jì)為0分;10%～25%，計(jì)為1分，26%～50%，計(jì)為2分，51%～75%，計(jì)為3分，76%～100%，計(jì)為4分。將兩種評(píng)分的結(jié)果相加，若最終得分為1～3分判定為陰性，4～7分判定為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 RUNX3在正常腸黏膜、鋸齒狀病變及CRC組織中的表達(dá)

RUNX3的陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核。RUNX3在正常腸黏膜中陽(yáng)性率為80.0%（48/60）;在鋸齒狀病變中陽(yáng)性率降低，HP、SSA/P、TSA中RUNX3陽(yáng)性率分別為74.7%（65/87）、49.0%（47/96）、40.5%（32/79）;在CRC中RUNX3表達(dá)明顯減少，僅為35.0%（21/60）。RUNX3陽(yáng)性表達(dá)率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸降低，在SSA/P、TSA及CRC中明顯降低。SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的RUNX3陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;HP與正常腸黏膜的RUNX3陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;SSA/P、TSA與CRC的RUNX3陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 p53在正常腸黏膜、鋸齒狀病變及CRC組織中的表達(dá)

p53的陽(yáng)性表達(dá)也定位于細(xì)胞核。p53在正常腸黏膜中陽(yáng)性率較低，為21.7%（13/60）;在鋸齒狀病變中陽(yáng)性率升高，HP、SSA/P、TSA中p53陽(yáng)性率分別為24.1%（21/87）、47.9%（46/96）、51.9%（41/79）;在CRC中，p53表達(dá)明顯升高，為60.0%（36/60）。p53陽(yáng)性表達(dá)率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸升高，在SSA/P、TSA及CRC中明顯升高。SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的p53陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;HP與正常腸黏膜的p53陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;SSA/P、TSA與CRC的p53陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

CRC是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的惡性腫瘤，發(fā)病率位居惡性腫瘤的第3位，死亡率位居第4位[11]。目前我國(guó)的CRC發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[12]。研究表明，CRC發(fā)病率增長(zhǎng)的主要原因之一是由HP轉(zhuǎn)變?yōu)镾SA，最終發(fā)展為SAC[3]，該通路涉及一系列基因?qū)W及多種細(xì)胞信號(hào)通路的異常。

RUNX3基因是近些年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，其定位于人類(lèi)染色體1號(hào)短臂1p36.1，在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor beta，TGF-β）介導(dǎo)的細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[13-14]。Fainaru等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在CRC的分子靶點(diǎn)中，TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其下游的信號(hào)分子是結(jié)直腸腺瘤轉(zhuǎn)變?yōu)镃RC的主要原因。RUNX3基因是一個(gè)調(diào)節(jié)TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的重要因子，極可能是TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的靶點(diǎn)，一旦RUNX3出現(xiàn)異常，就會(huì)引起TGF-β信號(hào)通路異常發(fā)生腫瘤[16]。Subramaniam等[17]研究發(fā)現(xiàn)，HP、TSA中RUNX3的陽(yáng)性表達(dá)與正常腸組織及管狀腺瘤相比有所下降。本研究結(jié)果顯示，HP、SSA/P及TSA中RUNX3陽(yáng)性表達(dá)率分別為74.7%、49.0%、40.5%，在CRC中僅有35.0%。SSA/P、TSA及CRC中RUNX3陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常腸黏膜及HP，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示RUNX3基因作為T(mén)GF-β細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的一個(gè)重要因子，其參與了TGF-β對(duì)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的負(fù)性調(diào)控，RUNX3基因的表達(dá)下調(diào)可能是鋸齒狀病變發(fā)展為CRC的原因之一。

p53基因是一種抑癌基因，定位于17號(hào)染色體的短臂上。p53基因的主要功能是監(jiān)視細(xì)胞基因組的完整性，維持細(xì)胞的正常增殖，一旦細(xì)胞的基因被破壞，p53就能修復(fù)被破壞的基因。但是，如果p53自身發(fā)生突變，它的這種抑制癌細(xì)胞的功能就會(huì)喪失，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[18-19]。p53分為野生型和突變型，由于野生型p53的半衰期非常短，用免疫組化的方法無(wú)法檢測(cè)，而突變型p53的半衰期比較長(zhǎng)，因此，本研究檢測(cè)的是突變型的p53[20]。本研究結(jié)果顯示，突變的p53在正常腸黏膜中表達(dá)陽(yáng)性率為21.7%，而SSA/P及TSA的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高，達(dá)47.9%、51.9%，在CRC中陽(yáng)性率達(dá)到60.0%，提示突變型p53可能發(fā)生在CRC的早期，與CRC的發(fā)生相關(guān)。

綜上所述，RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變到CRC的發(fā)生過(guò)程中起作用，兩者可能是促進(jìn)SA惡變的危險(xiǎn)因素，對(duì)SA的患者預(yù)測(cè)CRC的發(fā)生具有一定的臨床價(jià)值。

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（收稿日期：2019-02-19? 本文編輯：任秀蘭）