尋常性銀屑病患者白細胞介素表達水平及與銀屑病面積和嚴重度指數相關性研究

夏米娜，劉彥群，翟曉翔

尋常性銀屑病是臨床上較為常見的慢性炎癥性皮膚病，鱗屑性紅斑是主要的臨床表現，復發率比較高，對患者生活、工作影響甚大，其病情的發生和發展受環境、遺傳等多種因素影響[1,2]。近年來，大量研究顯示，多種細胞因子與銀屑病的發生發展存在一定的聯系，與患者銀屑病皮損面積和嚴重度指數（PASI）評分有相關性[2,3]。相關研究指出，IL-36與銀屑病發病有著密切聯系，IL-36α和IL-36γ在銀屑病患者皮損中顯著高表達。IL-36Ra是IL-36的天然受體拮抗劑，IL-36Ra發生基因突變導致其與IL-36的結合能力下降，促使機體皮膚組織病理反應增強，引起銀屑病發生。IL-38對免疫細胞的生物學作用與IL-36Ra相似，與銀屑病的發生密切相關。本文旨在對比尋常性銀屑病患者血清IL-36、IL-36Ra、IL-38表達水平與正常人的差異，分析其與患者PASI評分之間的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 臨床資料 選擇2016年1月—2017年6月徐州市中醫院皮膚科接診治療的尋常性銀屑病患者78例，其中男45例，女33例；年齡24～62歲，平均年齡（47.7±14.9）歲。所選取的患者均符合中華醫學會尋常性銀屑病的診斷標準[3]：臨床表現為表面附著厚層銀白色鱗屑，輕刮鱗屑后基底見淡紅色發光半透明薄膜，刮除薄膜出現點狀出血，即為蠟滴現象、薄膜現象、點狀出血現象。早期組織病理學檢查表現為表皮角化過度伴有角化不全，后期表現為角化過度，以淋巴細胞和組織細胞浸潤為主。排除近期使用糖皮質激素或免疫抑制劑、有嚴重急慢性系統疾病、免疫性疾病及精神障礙的患者，所選擇的患者均符合尋常性銀屑病臨床診斷標準。選擇我院同期體檢的健康志愿者78例作為對照組，其中男41例，女37例；年齡22～61歲，平均年齡（46.8±15.2）歲；兩組在性別、年齡、一般資料相比差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究所選患者及志愿者均事先知情，簽署知情確認書，并獲得了本院倫理委員會的批準。

1.1.2 主要試劑 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（上海生物工程公司）；免疫組化染色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 病情評定 患者入院后，采用PASI評分對患者病情進行分級，按照頭頸部、上肢、軀干、下肢4個部分對全身進行分區，面積評分：檢查計算每部分病變面積百分比，按照0～6進行評分。嚴重程度評分：對每一部分紅斑、浸潤、鱗屑3項臨床特征分別進行評分，每項臨床特征按照0～4評分，嚴重度評分為各項臨床特征評分相加。PASI（頭部）=0.1×面積評分×嚴重度評分，PASI（上肢）=0.2×面積評分×嚴重度評分，PASI（軀干）=0.3×面積評分×嚴重程評分，PASI（下肢）=0.4×面積評分×嚴重度評分，PASI總分為4分部評分相加。根據PASI總分進行病情分級，輕度：PASI≤15，中度：15＜PASI＜30，重度：PASI≥30。

1.2.2 ELISA檢測IL-36、IL-36Ra及IL-38水平 采集銀屑病患者和對照者清晨空腹靜脈血5 ml，2 000 r/min離心處理10 min，采集上層血清，-80℃低溫儲存備用。采用ELISA測定IL-36、IL-36Ra及IL-38水平，具體操作如下：采用競爭性抑制法ELISA試劑盒，使用純化抗體包被微孔板，使抗體充分吸附于微孔壁，制作固相載體，實驗中加入待測樣本和酶聯親和物，酶聯親和物含有酶標記抗原，采取溫育反應使其充分結合在微孔壁上，通過與抗體競爭從而形成標記的抗原復合物，洗去未結合部分，加入底物反應后變色，讀取標準品孔的吸光度值，繪制標準曲線后反算出待測樣本的指標濃度數值。

1.2.3 免疫組化染色 采集78例患者皮損組織，從典型皮損位置處切取，切取范圍可擴大至皮損邊緣正常皮膚。采集的皮膚組織置于10%甲醛磷酸緩沖液中進行固定，對固定后的皮膚組織進行脫水，透明后石蠟包埋，制成蠟塊后備用。每例患者至少制作5組切片，分別檢測各項指標染色結果。采用免疫組化染色試劑盒進行染色操作，具體步驟嚴格按照試劑盒說明進行，根據光學顯微鏡拍照結果判斷陽性率。胞核或胞質內含有棕色顆粒的細胞被視為陽性細胞，細胞因子IL-36、IL-36Ra、IL-38主要分布于胞質。陰性對照為無明顯染色顆粒或組織顏色與背景色相一致。在顯微鏡下觀察表皮全層陽性細胞的染色深度和分布情況，高倍鏡視野（×200）下取5個視野，采用Image pro plus 6.0軟件分析圖像。

1.3 統計學方法

采用SPSS19.0統計學軟件進行數據處理，計量資料采用均數±標準差描述，兩組間比較采用成組t檢驗，應用非參數spearman相關性檢驗因子表達水平與相應的PASI評分的相關性，組間計量資料比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同病情分級患者一般資料比較

輕度與中重度患者男女比例、平均年齡相比差異無統計學意義（P＞0.05），詳見表1。

表1 不同病情分級患者一般資料比較 （±s）

表1 不同病情分級患者一般資料比較 （±s）

指 標 輕度患者 中重度患者 P值PASI評分 8.9±1.4 21.4±2.1 ＜0.05總例數（例） 35 43男性比例[例(%)]21(55.2) 26(52.9) ＞0.05女性比例[例(%)]14(44.8) 17(47.1) ＞0.05平均年齡（歲） 47.4±14.6 48.1±15.1 ＞0.05

2.2 IL-36、IL-36Ra及IL-38在不同病情分級患者中的免疫組化染色結果

圖1 IL-36、IL-36Ra及IL-38在不同病情分級銀屑病患者中的免疫組化組織病理（DAB染色×200）

通過對不同病情分級患者及正常人皮膚組織的免疫組化染色發現，各因子在不同病情分級患者及正常人皮膚組織中均有表達。不同病情分級尋常性銀屑病患者IL-36α主要表達在表皮各層細胞胞質中，且中重度患者明顯多于輕度患者；IL-36β主要表達在顆粒層和棘層細胞，但是在不同病情分級尋常性銀屑病患者表皮各層細胞胞核、核周及胞質中，也均有不同程度的表達，且中重度患者明顯多于輕度患者；IL-36γ主要表達顆粒層及鄰近的棘層細胞，而在正常人皮膚組織中表達顯著少于尋常性銀屑病患者；IL-36Ra與上述相反，其在不同病情分級的尋常性銀屑病患者皮膚組織中幾乎無表達，而在正常人的皮膚組織中表達于基底層；IL-38在正常人皮膚組織表皮各層細胞胞質中均有表達，而在尋常性銀屑病患者皮膚組織中，僅在棘層細胞胞質中散在表達（圖1）。

2.3 IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平比較

輕度及中重度尋常性銀屑病患者IL-36α、IL-36β、IL-36γ表達水平高于對照組，IL-36Ra和IL-38表達水平低于對照組，差異具有統計學意義（P＜ 0.05）；中重度患者 IL-36α、IL-36β、IL-36γ表達水平高于輕度患者，IL-36Ra和IL-38表達水平低于輕度患者，差異具有統計學意義（P＜0.05），詳見表2。

表2 IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平比較 （±s，ng/L）

表2 IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平比較 （±s，ng/L）

注：與對照組相比，*P＜0.05；與輕度患者相比，#P＜0.05

指 標 對照組 輕度患者 中重度患者 *P值 #P值IL-36α 1.312± 0.129 2.026± 0.203* 2.718±0.251*# 0.009 0.022 IL-36β 5.916± 0.774 7.483± 0.955* 9.805±0.859*# 0.014 0.019 IL-36γ 15.437± 2.119 21.204± 2.669* 29.103±3.179*# 0.011 0.009 IL-36Ra 81.705± 7.066 72.592± 6.308* 61.426±8.153*# 0.007 0.015 IL-38 128.658±11.229 107.319±13.028* 84.671±9.275*# 0.011 0.011

2.4 IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平與PASI評分相關性

IL-36α、IL-36β、IL-36γ表達水平與 PASI評分呈正相關性，P＜0.01；IL-36Ra和IL-38表達水平與PASI評分呈負相關性，P＜0.05，詳見表3。

表3 IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平與PASI評分相關性

3 討論

近年來，我國銀屑病的發病人數逐年上升，多為尋常性銀屑病。該病治療難度大，病情易復發，具有“隱性發病”的特征。另外病情的發生發展受環境、機體免疫功能及遺傳等多種因素影響，發病后對患者的工作、生活造成較大的負面影響，所以需要加強疾病防治[4]。

IL由白細胞產生并作用于白細胞之間，在機體的信息傳遞、免疫調節、細胞活化、增殖分化及炎癥反應中有著重要的作用，與細胞生長因子協同作用，調節機體免疫和造血功能[5-8]。目前發現了至少38種IL，按照IL-1～IL-38編號。相關研究指出，IL-17、IL-21、IL-37等多種細胞因子在銀屑病皮損中均有顯著地表達，對于銀屑病的病情分析有著重要的價值和意義[9-11]。IL-36是IL-1的家族成員之一，可由活化后的B淋巴細胞、角質形成細胞等多種細胞產生，包括 IL-36γ、IL-36α、IL-36β 3種次分類，其中 IL-36a只有T淋巴細胞可以產生，是一些具有生物活性的分子。IL-36與特異性受體IL-36R結合后才能促進炎癥的發展，IL-36Ra是IL-36的天然受體拮抗劑。IL-36、IL-36R、IL-36Ra主要表達于皮膚、氣管等上皮組織中，IL-36γ多表達于子宮中，IL-36α多表達于胸腺中，IL-36β多表達于關節軟骨細胞、滑膜組織及骨骼肌角質細胞中等[12]。有研究指出，IL-36分子在皮膚中的表達更為顯著，與銀屑病的發生發展有著緊密的聯系，銀屑病患者皮損中IL-36及IL-36R高表達，與健康人或患者未受損皮膚相比顯著偏高。IL-38原名IL-1F10，是IL-36的5個受體拮抗體之一，在人體免疫組織中的表達較為廣泛，在扁桃體B淋巴細胞和皮膚中表達更為顯著，在心臟等無免疫功能的組織中表達不明顯[13,14]。相關研究證明，IL-38與IL-36Ra具有相似的生物學作用，均是通過抑制IL-36與IL-36R相結合從而產生抗炎作用。

本文研究中，不同病情分級銀屑病患者性別、年齡無明顯差異（P＞0.05），說明尋常性銀屑病病情嚴重程度與患者年齡、性別不存在明顯關聯。銀屑病患者血清IL-36、IL-36Ra及IL-38水平顯著高于對照組（P＜0.05），中重度患者指標水平顯著高于輕度患者（P＜0.05），由此表明銀屑病病情越嚴重，外周血血清IL-36α、IL-36β、IL-36γ表達水平越高，IL-36Ra和IL-38表達水平越低，IL-36、IL-36Ra及IL-38或可作為銀屑病患者重要的外周血標志物。IL-36α（P=0.002）、IL-36β（P=0.002）、IL-36γ（P=0.003）水平與PASI評分呈正相關，IL-36Ra、IL-38水平與PASI評分呈負相關，表明IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平與PASI存在顯著的線性相關性。

相關研究指出，IL-36主要分布在皮膚、支氣管上皮和腦組織中，通過與受體復合體合作作用于上皮細胞、免疫細胞等。IL-36通過誘導促炎性細胞因子、抗菌肽、趨化因子等促進炎癥反應以抵御外界病原微生物，同時由于促炎性細胞因子及趨化因子等釋放，誘發銀屑病等自身免疫性疾病或免疫相關的炎癥性疾病，其表達水平的高低與銀屑病的發生、發展及病情程度存在緊密聯系[15]。楊曉娥[16]在其研究中指出，不同病情嚴重程度的尋常性銀屑病患者血清IL-36γ 、IL-36β、IL-36α和IL-36Ra水平存在顯著差異，中重度患者 IL-36γ 、IL-36β、IL-36α 水平明顯高于輕度患者，IL-36Ra水平明顯低于輕度患者，說明IL-36和IL-36Ra水平與銀屑病的病情嚴重程度密切相關，本文結論與其一致。

綜上所述，尋常性銀屑病患者血清IL-36、IL-36Ra及IL-38表達水平與銀屑病皮損面積和嚴重程度指數存在緊密的聯系，具有一定的相關性，可以為銀屑病臨床診斷、治療及病情分析提供參考。