八重緋寒櫻組培工廠化技術研究

陳齊明

摘要：闡述了八重緋寒櫻的工廠化育苗技術。以萌芽條莖段為外植體材料，研究不同培養基和植物生長調節劑組合對八重緋寒櫻組培快繁的影響，試驗研究結果表明：八重緋寒櫻較好的誘導培養基為：MS+6BA 0.8 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1+ NAA 0.5 mg·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠5.8 g·L-1，誘導率達91.2%;繼代增殖最佳培養基配方為改良MS+6BA 0.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠5.8 g·L-1，繼代增殖系數可達38倍;根誘導最佳培養基配方為改良1/2MS+ABT 03 mg·L-1+IBA 12 mg·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠58 g·L-1+活性炭0.2 g·L-1+L-半胱氨1 mg·L-1，生根率可達95.8%;八重緋寒櫻的最佳組培苗移栽基質為泥炭∶發酵杉木樹皮∶珍珠巖=2∶1∶1，30 d統計的移栽成活率94.8%。

關鍵詞：八重緋寒櫻;工廠化育苗;組織培養;繼代培養;生根培養

中圖分類號：S753文獻標識碼：A文章編號：1004-3020（2019）05-0013-05

Study on the Tissue Culture and Factorybased Seedling Technology

of Cerasus campanulata Maxim. ‘DoublefloweredChen Qiming

（Xinmin Seedling Limitted Company of Fujian ProvinceFuqing350301）

Abstract： This paper expounds the factory nursery technology of Cerasus campanulata Maxim. ‘Doubleflowered. Using the sprouted stem segments as explant materials， we studied the effects of the combinations of different media and plant growth regulators on the rapid propagation of Cerasus campanulata Maxim. ‘Doubleflowered by tissue culture. The results indicate that： The preferred induction medium is MS+6BA 0.8 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1+ NAA 0.5 mg·L-1+white sugar 30 g·L-1+carrageenan 5.8 g·L-1， and the induction rate is as high as 91.2%; The optimal medium for subculture is modified MS+6BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+white sugar 30 g·L-1+carrageenan 5.8 mg·L-1，and the subculture coefficient can reach 3.8 times; The optimal medium for root induction is improved 1/2MS+ABT 0.3 mg·L-1+IBA 1.2 mg·L-1+white sugar 30 g·L-1+carrageenan 5.8 mg·L-1+activated carbon 0.2 g·L-1+L-Cysteine 1 mg·L-1，and the rooting rate can reach 95.8%; The best tissue culture seedling transplanting substrate is peat∶ fermented fir bark∶ perlite = 2∶1∶1， and the 30day transplant survival rate reached 948%.

Key words：Cerasus campanulata Maxim. ‘Doubleflowered;factory nursery;tissue culture;multiplication culture;rooting culture

八重緋寒櫻Cerasus campanulata Maxim.‘Doubleflowered系福建山櫻花C.campanulata少數幾個改良品種之一[1]， 屬落葉性小喬木或中喬木，樹形圓整，每年冬末春初開花，先花后葉，花呈下垂性開展，重瓣型花朵，花色濃艷，較福建山櫻花單瓣種具有更喜充足光照和溫暖環境，且有較好的耐高溫和陰涼性，適宜東南沿海低海拔地區和其它夏季高溫高濕地區種植[2]。八重緋寒櫻是優良的園林觀賞及景觀美化的極佳樹種，花重瓣，花朵大，花色艷麗，觀賞價值極高，可地栽造景，孤植、數株叢植，既適用于庭院綠化美化，也可植于公園草坪之上，又可列植充當行道樹使用，在公園、生態觀光地等可大片群植，景色震撼，游人如織，具有廣闊的開發應用前景。八重緋寒櫻在臺灣地區有大規模的種植，福建、廣東等地近年來已引種成功，并生長良好，但因其只開花不結果[3]，目前其繁殖方法主要采用嫁接繁殖的方式，嫁接雖能在較短時間內獲得新植株，但嫁接所用砧木、嫁接時間與天氣、嫁接方法及嫁接后的管理直接影響到嫁接的成活率，苗木培育成本較高，難于規模化生產，繁殖數量有限[4]，無法滿足不了市場的巨大需求。盡管目前有關福建山櫻花組培的研究報道已有一些[410]，但對八重緋寒櫻品系組培工廠化技術研究尚未見系統地報道。本研究采用八重緋寒櫻優良單株的當年生萌條為材料，進行了組織培養技術研究，包括無菌材料的建立、腋芽誘導、增殖、生根、移栽等技術內容，構建八重緋寒櫻優良無性系組培快繁技術體系，為八重緋寒櫻優良無性系的大規模組培苗生產提供技術支撐。

1材料與方法

1.1試驗材料

本次試驗材料來自福建省鑫閩種業有限公司引進臺灣優良觀賞花木八重緋寒櫻的當年生半木質化、生長健壯、無病蟲害的枝條做為外植體。

1.2試驗方法

1.2.1外植體的滅菌

八重緋寒櫻外植體采前先使用托布津800～1000倍噴灑，待4～5 d后，選擇晴朗天氣剪取八重緋寒櫻桃新萌半木質化萌芽條，流水沖去表面污物，用洗衣粉及消毒粉浸泡清洗30 min后再用清水反復沖洗干凈。將洗凈后的嫩枝轉移到超凈工作臺上，在無菌條件下，先用75%酒精浸30 s，再用0.1% Hgcl2液浸泡10 min，最后用無菌水沖洗4～5次。將表面滅菌后的外植體切取帶芽的莖段，長2～3 cm左右，接于各種外植體誘導培養上。

1.2.2誘導培養基的篩選

以MS為基本培養基，分別附加3種主要激素成份A（6BA）、B（IBA ）、C（NAA），每因素各取3個水平，即A（0.6、0.8、1.0）mg·L-1、B（0.1、0.3、0.5） mg·L-1、C（01、03、05）mg·L-1，用L9（34）正交表安排，每個處理接種30瓶，每瓶1個外植體，重復3次，培養30 d后觀察統計不定芽誘導結果，統計外植體誘導出芽率。

誘導率（%）=誘導出芽（單芽或叢生芽）的外植體數÷接種的外植體數（無污染）×100

叢生芽誘導率（%）=誘導出叢生芽的外植體數÷接種的外植體數（無污染）×100

1.2.3增殖培養基的篩選

（1）基本培養基的篩選。 選用 MS、改良MS、1/2MS、1/4 MS等4種基本培養基，附加1.0 mg·L-16BA、0.1 mg·L-1NAA組合。每種培養基轉接30個（叢）單芽或叢生芽。接種20天后，統計觀察增殖情況。

（2）不同植物生長調節劑配比對增殖效果的影響。以（1）篩選出的培養基為基本培養基，附加不同種類不同濃度植物生長調節水平進行正交設計試驗。試驗選用因子、水平為：6BA采用3個濃度水平0.3、0.5、1.0 mg·L-1;IBA 采用3個濃度水平0.1、0.2、0.3 mg·L-1;NAA采用3個濃度水平0.1、0.3、0.5 mg·L-1。試驗共設9個處理，每處理20瓶，每瓶放置材料3個，每處理重復3次，轉接20 d后，統計在各培養基上芽苗存活率和增殖倍率，篩選適宜的植物生長調節劑濃度組合。繼代培養基附加30 g·L-1白糖，5.8 g·L-1卡拉膠，pH值均調制為5.8～6.0。

1.2.4生根培養基的篩選

以1/2MS、1/4MS、改良1/2MS為基本培養基，分別添加0.3、0.6、1.2 mg·L-1的ABT和03、06、12 mg·L-1的IBA。共9個處理，每個處理重復3次，每個重復30瓶，每瓶接種10個有效芽，即每個重復300個有效芽。生根培養20 d，觀察統計各培養基芽苗生根率、根系生長狀況，篩選出理想的生根培養基。生根培養基附加0.2 g·L-1的活性炭 （AC），1 mg·L-1的L-半胱氨酸，30 g·L-1白糖，5.8 g·L-1卡拉膠，pH值均調制為5.8～6.0。

1.2.5組培苗的移栽

將芽段基部長有2～3條不定根的生根瓶苗移至煉苗溫室里，煉苗7 d后，當生根苗高2.0 cm、根長1.0 cm以上時即可進行移栽，將小苗移栽到于不同基質處理的基質中。本研究以泥炭∶發酵杉木樹皮∶珍珠巖（2∶2∶1）、腐殖土∶椰糠∶珍珠巖（2∶2∶1）、杉木木屑∶黃心土∶珍珠巖（2∶1∶1）3種基質為研究對象進行對比試驗。移栽30 d后統計其存活率以及生長情況。

1.2.6培養條件

培養室溫度控制在（20±2）℃ ，相對濕度60%～70%，光照強度2 000～2 500 lx，光照時間長度為12 h·d-1。

2結果與分析

2.1不同激素濃度對外植體誘導的影響

以MS培養基為腋芽誘導基本培養基，添加不同濃度的6BA、NAA、IBA進行外植體腋芽誘導培養基配方的篩選，其結果如表1所示。由表1可知，6BA的極差最大，其次是NAA，再次是IBA，說明6BA對誘導率的影響最大。從平均值看，6BA 0.8 mg·L-1、IBA 0.3 mg·L-1、NAA 0.5 mg·L-1效果最好。由此可知，八重緋寒櫻誘導培養的最優培養基組合是MS + 6BA 0.8 mg· L-1+IBA 0.3 mg·L-1+ NAA 0.5 mg·L-1。由于這一組合在正交試驗中沒有體現，因此對這一組合進行了驗證試驗，用此組合進行初代培養，其誘導率可達91.2%以上。方差分析結果（表2）表明：6BA對誘導率有顯著影響，而IBA、NAA對誘導率影響不顯著。

2.2繼代增殖培養影響

2.2.1增殖培養基本培養基的篩選

誘導培養20 d或小芽長0.4～0.5 cm即可轉入繼代增殖培養（初代培養），試驗結果見表3。由表3可以看出，處理2的存活率和增殖培率均為最高，達到89.6%和3.8倍，且與其他處理差異顯著。因此，改良MS是適宜初代培養的基本培養基。

2.2.2不同植物生長調節劑配比對增殖效果的影響

從表4可以看出，6BA的極差值最大，其次是NAA，再次是IBA，說明6BA對有效芽增殖的影響最大，其次是NAA，再次是IBA。從平均值看，

采用篩選出的培養基進行批量繁殖，芽叢的增殖率可達3.8倍，芽生長快、叢芽很多，有效苗比例高，可以不經壯苗培養直接進入生根培養。

2.3培養基及生長調節劑濃度組合對生根率的影響

9種組合培養基誘導生根結果見表6。由表6可知，從平均生根率的極差值可推斷，3個因素對生根率影響的大小順序為 IBA> 基本培養基>ABT，試驗觀察到附加IBA的培養基芽苗主根多、根系發達。在7號培養基改良1/2MS中取得較高的生根率，根據K值大小分析，在改良1/2MS+ABT 0.3 mg·L-1+IBA 1.2 mg·L-1條件下八重緋寒櫻生根可以得到滿意的效果。因此，八重緋寒櫻的理想生根培養基應為：改良1/2MS+ABT 03 mg·L-1+IBA 12 mg·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠5.8 g·L-1+0.2 g·L-1活性炭+L-半胱氨酸1 mg·L-1。八重緋寒櫻的該培養基中的生長情況見圖2。

2.4組培苗木移栽

為篩選適合于八重緋寒櫻組培苗生長的移栽基我們比較了不同移栽基質對八重緋寒櫻移栽成活率的影響。在9～11月季節，生根培養20 d后，將經煉苗后的組培苗移栽到不同基質中，30 d后調查移栽成活率。結果見表7。由表7可知，1號處理（泥炭：發酵杉木樹皮：珍珠巖=2∶1∶1）的移栽成活率最高，30 d統計的移栽成活率94.8%。此基質配方在福建省鑫閩種業有限公司八重緋寒櫻組培苗工廠化育苗生產中得到了較好的實踐運用。

3小結與討論

本研究以當年半木質化的八重緋寒櫻莖段為外植體，通過不同培養基、外源激素種類和濃度等因子對重緋寒櫻的芽誘導、繼代增殖、生根的影響以及不同移栽基質對八重緋寒櫻移栽成活率的影響等研究，系統開展了八重緋寒櫻組培工廠化育苗技術研究，試驗研究結果表明：八重緋寒櫻較好的誘導培養基為：MS+6BA 0.8 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠5.8 g·L-1，誘導率高達];繼代增殖最佳培養基配方為改良MS+6BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠5.8 g·L-1，繼代增殖系數可達3.8倍;根誘導最佳培養基配方為活性炭0.2 g·L-1+白糖30 g·L-1+活性炭0.2 g·L-1+白糖30 g·L-1+卡拉膠5.8 g·L-1，生根率可達95.8%;八重緋寒櫻的最佳組培苗移栽基質為泥炭：發酵杉木樹皮：珍珠巖=2∶1∶1，30 d統計的移栽成活率94.8%。

櫻花資源豐富，其野生資源和栽培種類全世界有150余種[12]。隨著櫻花的廣泛應用，研究櫻花的快速繁殖技術顯得尤為重要。迄今，已有很多學者對觀賞福建山櫻花組織培養技術進行了研究[411]，但對八重緋寒櫻組培技術系統地研究未見報道，由于同一物種不同品系材料自身生物學特性差異，所需培養基種類和激素濃度存在較大差異，不同無性系（基因型）離體培養表現的差異性普遍存在[1314]，其組織培養快繁體系技術也存在較大差異。因此，本研究以八重緋寒櫻莖段為試驗材料，篩選八重緋寒櫻離體培養各階段的適宜配方，建立八重緋寒櫻組培快繁體系，可使八重緋寒櫻能在短時間內快速成苗，實現大規模產業化生產，滿足園林生產的需求，此研究具有重要的理論和現實意義。

組培工廠化育苗不受時間的限制，可終年生產。在實際生產產能做到終年生產，但瓶苗移栽則受到自然條件的制約。為了提高瓶苗移栽率，便于集約管理，一般要求在溫室內進行，但炎熱的夏季，如溫室僅有遮蔭和噴霧設施溫室內溫度仍可達40℃以上，伴隨而來的是小苗失水快，補水工作量大，溫室濕度大，病蟲害防、治困難，移栽成活率會下降;寒冷季節如12～2月，如沒有加溫措施栽成活率，僅達9～11月的60%，成本相對增加了一倍[4]。本研究試驗組培生根苗移栽時間集中在9～11月份，其他季節時間移栽及管理技術在今后的實踐中需要繼續探索，有待進一步提高。目前八重緋寒櫻無性系組培苗已進入規模化繁育階段，此研究方案已在福建省鑫閩種業有限公司福建省花卉苗木品種引進與研發創新項目中得到了較好的實踐運用，已生產八重緋寒櫻組培苗木達80多萬株。

參考文獻

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