再生障礙性貧血和低增生性骨髓增生異常綜合征外周血中淋巴細胞亞群的表達研究

趙立新

（河南省三門峽市澠池縣人民醫院檢驗中心 澠池472400）

再生障礙性貧血（AA）是一種由多種致病因素單獨或共同導致的骨髓衰竭性疾病，因骨髓造血功能衰竭，不能提供足夠的血細胞，從而導致外周血的減少。低增生性骨髓增生異常綜合征（MDS）是一組克隆性、異質性疾病，主要由造血干細胞增殖分化障礙所導致，臨床表現為骨髓增生異常以及外周血全血細胞數減少[1]。AA 以及低增生性MDS 雖然發病機制完全不同，治療與預后均存在極大的差異，但是兩者均以全血細胞減少為主要臨床表現，且臨床尚無特異性的診斷指標，給兩者的鑒別診斷帶來較大的困難。現階段，大量的臨床實驗研究已證實，機體免疫異常在AA 以及低增生性MDS 發生發展中發揮了重要作用[2]。本研究對比淋巴細胞亞群在AA和低增生性MDS 患者外周血中表達的差異，以期為AA 和低增生性MDS 的診斷提供參考。現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017 年3 月～2019 年1月收治的AA 患者和低增生性MDS 患者各48 例為研究對象，分為AA 組和低增生性MDS 組。AA組中男28 例，女20 例；年齡24～75 歲，平均（45.68±12.37）歲。低增生性MDS 組中男30 例，女18 例；年齡25～77 歲，平均（45.73±12.33）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。所有患者均符合相關血液病診斷標準，對本研究內容知情并簽訂知情同意書，排除伴有嚴重的消耗性疾病或惡性腫瘤患者。本次研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 檢測方法 以美國Beckman Coulter 公司生產的Epics XL 型流式細胞儀檢測兩組外周血淋巴細胞亞群。檢測方法：肝素抗凝管收集患者外周血3 ml，以全血/髓溶紅細胞法制備標本，加單克隆抗體（FITC/PE/Percp/APC）標記細胞后測定并計算外周血T 淋 巴 細 胞 亞 群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+）、NK 淋巴細胞（CD3-CDl6+CD56+NK）及B 淋巴細胞（CDl9+B）比值。

1.3 觀察指標 （1）觀察兩組外周血T 淋巴細胞亞群、NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布情況。（2）根據CD4+/CD8+參考值范圍（1.02～1.95），分別將兩組劃分為比值超高組（＞1.95）、比值倒置組（≤1.02）以及比值正常組，分析NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布與CD4+/CD8+比值的關系。

1.4 統計學處理 數據采用SPSS20.0 統計學軟件處理。計量資料用表示，行t 檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血T 淋巴細胞亞群、NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞分布情況比較 兩組外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較無顯著性差異（P＞0.05）；AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細胞比例低于低增生性MDS 組，CDl9+B 淋巴細胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組外周血T 淋巴細胞亞群、NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布情況比較

表1 兩組外周血T 淋巴細胞亞群、NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布情況比較

組別 n CD3（+%） CD3+CD4（+%） CD3+CD8（+%） CD4+/CD8+ CD3-CDl6+CD56+NK（%） CDl9+B（%）AA 組4875.39±8.3743.24±8.4630.13±7.411.49±0.879.23±6.8212.63±5.67低增生性MDS 組4875.45±8.3343.31±8.4030.09±7.461.43±0.8112.44±5.2910.52±7.87

2.2 NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布與CD2+/CD8+比值的關系分析 在比值正常組中，AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細胞比例低于低增生性MDS組（P＜0.05），而兩組CDl9+B 細胞比例對比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值倒置組中，AA 組CDl9+B細胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05），而兩組CD3-CDl6+CD56+NK 細胞比例對比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值超高組中，AA 組與低增生性MDS 組CD3-CDl6+CD56+NK 細胞比例及CDl9+B細胞比例對比無顯著性差異（P＞0.05）。見表2。

表2 NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布與CD4+／CD8+比值的關系分析（%

表2 NK 淋巴細胞及B 淋巴細胞的分布與CD4+／CD8+比值的關系分析（%

組別 n CD3-CDl6+CD56+NK（%） CDl9+B（%）AA組 比值正常組208.72±6.3211.12±6.31比值倒置組1011.26±6.8912.79±7.38比值超高組188.89±6.7910.69±6.74低增生性MDS組 比值正常組1910.59±6.8710.93±6.74比值倒置組1211.24±6.858.25±5.84比值超高組179.02±6.7310.80±6.26

3 討論

AA 發病機制目前尚未明確，可能有多種病理機制參與其中，但體外實驗以及免疫抑制治療的療效已證實免疫介導的造血干細胞損傷在AA 發病中發揮了重要作用[3]。低增生性MDS 是MDS 的一種特殊類型，即骨髓增生程度低下，它的臨床表現與AA 的相似，均以外周血細胞計數以及骨髓象增生減少為主，且均存在免疫紊亂現象，臨床鑒別診斷較難，極易發生誤診[4]。鑒于AA 和低增生性MDS 患者均存在免疫系統異常，而流式細胞術是現階段在血液病分型診斷中發揮著重要作用的一種檢測手段，本研究采用流式細胞術對淋巴細胞亞群在AA和低增生性MDS 患者外周血中的表達進行了檢測。

NK 淋巴細胞近年來已被廣泛應用于惡性血液疾病的治療，它是一類在天然免疫中占據重要位置的大顆粒淋巴細胞，能夠有效抑制低增生性MDS骨髓造血祖細胞。AA 與低增生性MDS 患者由于全血細胞減少可能導致其相應的大顆粒淋巴細胞低于正常參考值，而低增生性MDS 向惡性白血病轉化的風險更高，可能由于大量惡性細胞的存在，故而反饋性地增加了天然免疫相關的大顆粒淋巴細胞。因此在本研究中，AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細胞比例低于低增生性MDS 組（P＜0.05）。B 淋巴細胞往往與T 淋巴細胞緊密相連，AA 組CDl9+B 淋巴細胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05），這可能是由于低增生性MDS 骨髓存在惡性克隆故而導致B 淋巴細胞增殖受阻。T 淋巴細胞在AA 與低增生性MDS 中起著至關重要的作用，大多數學者認為T 淋巴細胞功能異常是AA 患者主要發病機制，AA 患者更易檢測到T 淋巴細胞亞群比例異常[5]。但是本研究中兩組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較無顯著性差異（P＞0.05），這可能是由于本研究樣本個體之間存在一定差異。CD4+/CD8+比值對AA 與低增生性MDS 都存在重要影響，故本研究根據其參考值范圍對兩組患者進行分組比較后發現，在比值正常組中，AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細胞比例低于低增生性MDS 組（P＜0.05），而兩組CDl9+B 細胞比例對比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值倒置組中，AA 組CDl9+B 細胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05），而兩組CD3-CDl6+CD56+NK細胞比例對比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值超高組中，AA 組與低增生性MDS 組CD3-CDl6+CD56+NK細胞比例及CDl9+B 細胞比例對比均無顯著性差異（P＞0.05）。這充分說明了在不同CD4+/CD8+比值條件下，AA 與低增生性MDS 患者NK 淋巴細胞及B淋巴細胞的差異有不同的表現。綜上所述，淋巴細胞亞群可作為AA 和低增生性MDS 鑒別診斷的參考指標。