滇龍膽化學成分和藥理作用的研究進展

張延智，劉佳樂，杜一民，陳旭冰,2*

(1.大理大學藥學院，云南 大理 671000；2.云南省昆蟲生物醫藥研發重點實驗室，云南 大理 671000)

滇龍膽 (Gentiana rigescens)，又名堅龍膽、苦草、青魚膽、小秦艽，為龍膽科 (Gentianaceae) 多年生草本植物，生于海拔1100～3000米的山坡草地灌叢、林下及山谷，主要產于云南、四川和貴州[1]。龍膽味苦、性寒，具有清熱燥濕，瀉肝定驚的作用，主治濕熱黃疸、小便淋痛、陰腫陰癢、濕熱帶下、肝膽實火之頭脹頭痛、目赤腫痛、耳聾耳腫、肋痛口苦、熱病驚風抽搐[1]。《滇南本草》記載，苦龍膽草，一名地膽草，味苦，性大寒，治咽喉疼痛，洗疥瘡腫毒。

對滇龍膽化學成分的研究較多，研究人員從滇龍膽的根和根莖中發現了大量化合物，其中龍膽苦苷(gentiopicroside)、獐牙菜苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)、馬錢子苷酸(lognic acid)、熊果酸(ursolic acid)、齊墩果酸(oleanolic acid)、龍膽堿(gentianine)等為滇龍膽的主要化學成分和藥效成分。現代藥理研究發現，滇龍膽不僅具有瀉火保肝、解熱鎮痛的傳統藥理作用，還有抗腫瘤、抑制甲狀腺亢進、促膠原蛋白合成、促神經元再生等新的藥理活性。本文對近年來滇龍膽的化學成分及藥理作用研究作一歸納總結，為滇龍膽的開發利用提供理論依據。

1 滇龍膽的化學成分

1.1 環烯醚萜類成分

環烯醚萜類成分是滇龍膽的主要化學成分之一。1982年，陸蘊如[2]首次從滇龍膽中分離出化合物龍膽苦苷(1)。Liu H，Jiang R W等人[3,4]從滇龍膽中分離出龍膽苦苷和獐牙菜苦苷(2)，gentiotrifloroside(3)，獐牙菜苷(4)。2006年，Xu M等[5]從滇龍膽中分離出了一種新的裂環烯醚萜類化合物堅龍膽A(5)，以及其它幾種已知的化合物，即龍膽苦苷，獐牙菜苷，獐牙菜苦苷，馬錢苷酸(6)，6 '-Ο-β-D-吡喃葡萄糖基-龍膽苦苷(7)，6 '-Ο-β-D-吡喃葡萄糖基-馬錢苷酸(8)，四乙酰開聯番木鱉苷(9)。2013年，Suyama Y[6]從滇龍膽中分離到了4種新的環烯醚萜類化合物，分別是rigenolide A (10)，2 '-(2,3-二羥基苯甲酰)-龍膽苦苷(11)，3 '-(2,3-二羥基苯甲酰)- 獐牙菜苷 (12)，2 '-(2,3-二羥基苯甲酰)-獐牙菜苦苷(13)。見表1。

1.2 三萜類成分

據文獻報道，共有14個三萜類化合物從滇龍膽中被分離出來。2002年，Xu M等[7]從滇龍膽根部分離得到6種達瑪烷型三萜類化合物，分別是gentirigenic acid(14)和gentirigeoside A～E(15～19)。2009年，趙磊等[8]從滇龍膽的地上部分分離得到6個三萜類化合物，分別為熊果酸(20)，齊墩果酸(21)，α-香樹脂醇(22)，α-香樹脂醇棕櫚酸酯(23)，β-香樹脂醇(24)和β-香樹脂醇棕櫚酸酯(25)。朱衛萍等[9]從滇龍膽中分離得到羽扇豆醇(26)和羽扇豆醇棕櫚酸酯(27)。見表1。

1.3 黃酮類成分

2009年，趙磊等[8]從滇龍膽地上部分中分離得到肥皂草素(28)，異肥皂草素(29)和異葒草素(30)。Xu M等[10]從滇龍膽根部分離出化合物異葒草素-3 '-Ο-β-D-葡萄糖苷(31)。見表1。

1.4 木脂素類成分

滇龍膽中也含有木脂素類成分，Xu M等[10]從滇龍膽中分離得到鵝掌楸堿(32)，Tortoside B(33)，(-)-丁香脂素-Ο-β-D-葡萄糖苷(34)，(-)-松脂醇-Ο-β-D-葡萄糖苷(35)，(-)-7R,8S-Dehydro-diconiferyl alcohol-4,9'-di-Ο-β-D-glucoside (36)和(-)-7R,8S-Dehydro-diconiferyl alcohol-4-Ο-β-D-glucoside(37)。朱衛萍等[9]也從滇龍膽中分離得到鵝掌楸堿。見表1。

1.5 生物堿類成分

20世紀80年代，孫南君和夏春芳[11]從滇龍膽地上部分分離出龍膽堿(秦艽堿甲)(38)、龍膽次堿(秦艽堿乙)(39)和龍膽醛堿(秦艽堿丙)(40)。但是楊書彬[12]、楊維霞[13]等人認為從滇龍膽中提取分離到的生物堿很可能不是天然的，而是在提取過程中加氨水與滇龍膽中其它成分反應轉化而來的。見表1。

1.6 苯甲酸酯類成分

近年來，研究人員從滇龍膽中分離和鑒定出一系列苯甲酸酯類成分，共有11種，分別被命名為苯甲酸酯A～K(41-51)[14-16]。見表1。

1.7 其他化學成分

據報道，滇龍膽中含有多糖類成分，趙磊等人[8-10]從滇龍膽中分離得到2,3-二羥基苯甲酸酯3-Ο-β-D-葡萄糖基-(1→6)-β-D-葡萄糖苷(52)，2,5-二羥基苯并5-Ο-β-D-木糖基-(1→6)-Ο-β-D-葡萄糖苷(53)，4-Ο-β-D-葡萄糖基-丁香酸(54)，2-羥基-3-甲氧基苯甲酸葡萄糖酯(55)，3,5-二甲氧基-4-對羥基甲醇-4-Ο-β-D-葡萄糖苷(56)，香草基乙醇-Ο-β-D-葡萄糖苷(57)，4-羥基-3-甲氧基苯基-Ο-β-D-木糖基-(1→6)-Ο-β-D-葡萄糖苷(58)，3-Ο-β-D-咖啡酸苷(59)，Oct-1-en-3yl arabinosyl-(1→6)-Ο-β-D-glucoside(60)，胡蘿卜苷(61)，β-龍膽二糖(62)。見表1。

表1 滇龍膽中的化學成分

表1(續)

2 滇龍膽的藥理作用

2.1 保肝作用

龍膽苦苷是滇龍膽的主要成分之一，研究發現[17,18]，龍膽苦苷能明顯降低CCl4所致的急性肝損傷小鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天冬氨酸轉氨酶(AST)水平，增加肝組織中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性，促進膽汁分泌，增加膽汁中膽紅素的濃度，具有明顯的保肝作用。Luo Y D等[19]通過微量透析技術對給藥小鼠的血漿進行研究，發現獐芽菜苷與獐牙菜苦苷口服易吸收、代謝，具有高效的保肝作用。Lian L H[20]等通過D-半乳糖胺和脂多糖誘導的小鼠肝損傷模型實驗，發現龍膽苦苷有明顯的保肝作用。Tang X W[21]等通過α-荼基異硫氰酸鹽誘導小鼠膽汁淤積肝損傷模型的研究發現，龍膽苦苷能夠改善膽酸的代謝，使細胞內膽酸的代謝顯著降低回到正常水平，其保護機制與膽酸相關的轉運蛋白的調節有關。

2.2 抗炎、鎮痛作用

余昕等[22,23]采用二甲苯致小鼠耳腫脹模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性模型、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹模型和角叉菜膠致大鼠胸腔炎癥模型，篩選堅龍膽抗炎作用的活性部位及其抗炎機制，實驗結果表明，與模型組比較,各模型組小鼠耳廓腫脹、小鼠腹腔毛細血管通透性、大鼠足跖腫脹、大鼠胸腔及肺組織的炎癥因子NO,PGE2,TNF-α,IL-1β,MDA均明顯增高;與空白組比較,水部位高、中劑量對二甲苯致小鼠耳廓腫脹,急性炎癥導致的腹腔毛細血管通透性,角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹均有顯著抑制作用,堅龍膽水部位組能抑制胸腔液MDA,PGE2,TNF-α,IL-1β含量升高,堅龍膽水部位組能抑制肺組織NO,MDA,PGE2,TNF-α,IL-1β含量升高。堅龍膽水部位為抗炎活性部位,抗炎機制可能與影響炎癥介質產生和抗氧化作用有關。沈磊等[24]用二甲苯致小鼠耳腫脹模型比較滇龍膽不同部位提取物的抗炎作用，實驗結果表明，滇龍膽不同部位提取物能劑量依賴性地減輕二甲苯致炎小鼠的耳腫脹程度，且葉和莖的抑制作用要優于花和根。陳雷等[25]采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹急性炎癥模型及大鼠肉芽腫慢性炎癥模型進行實驗，研究發現，在小鼠醋酸扭體和熱板法實驗中，龍膽苦苷能減少扭體次數，提高小鼠痛域閾值，呈良好的量效關系。龍膽苦苷明顯減輕了二甲苯致小鼠耳廓腫脹，降低蛋清致大鼠足趾腫脹，抑制了大鼠肉芽腫。 結果表明龍膽苦苷對熱和化學刺激引起的疼痛反應有明顯的鎮痛作用，對急、慢性炎癥反應均有一定的抑制作用。

2.3 抑菌作用

Bibi[26]等的實驗研究表明，龍膽堿對釀膿鏈球菌和金黃色葡萄球菌具有較高抑菌活性，而對普通變形桿菌、克雷伯氏肺炎桿菌、大腸埃希菌和傷寒桿菌抑菌活性較低。Xu M[10]等從滇龍膽中分離出兩種酚苷3-O-β-D-glucopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside和2,5-dihydroxylbenzofuran 5-O-β-D-xylopyranosyl-(1-6)-O-β-D-glucopyranoside，通過紙片擴散法對荔枝霜疫霉病菌、植物病原菌、蘋果炭疽病菌和香蕉炭疽病菌的抗真菌實驗發現，化合物3-O-β-D-glucopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside對荔枝霜疫霉病菌和香蕉炭疽病菌有抑制作用，化合物2,5-dihydroxylbenzofuran 5-O-β-D-xylopyranosyl-(1-6)-O-β-D-glucopyranoside對4種真菌無活性。

2.4 抗腫瘤作用

齊墩果酸與熊果酸最主要的藥理作用在于抗腫瘤，Li J等[27]通過四唑染色法的實驗研究表明熊果酸與齊墩果酸都有抗腫瘤作用，且熊果酸的抗腫瘤活性要稍強于齊墩果酸。

2.5 預防糖尿病作用

Hitesh Vaidya等[28]通過對3T3-L1細胞實驗發現，獐芽菜苦苷對PPAR-γ和GLUT-4的mRNA的表達沒有作用，而能顯著提高脂連素的mRNA的表達。龍膽堿能顯著提高PPAR-γ、GLUT-4和脂連素的mRNA的表達。實驗結果表明，獐芽菜苦苷是通過其活性代謝產物龍膽堿，來調整PPAR-γ、GLUT-4和脂連素的mRNA的基因表達，起到預防糖尿病的作用。

2.6 對中樞神經系統的作用

Gao L J等[14]從滇龍膽中分離得到的2個2,3-二羥基苯甲酸酯成分gentiside A和gentiside B，在濃度為30μM時能促進PC12神經細胞增殖。

2.7 其他作用

實驗表明，滇龍膽還有抑制甲狀腺功能亢進作用，其作用機制是抑制肝臟對皮質醇滅活,并可抑制甲亢大鼠肝臟中的類固醇還原酶活性,從而起到抑制甲狀腺機能亢進的功效[29]。此外，滇龍膽還有預防人體免疫缺陷類疾病的作用[30]。

3 討論

滇龍膽是我國特有的藥用本草，也是《中國藥典》收錄的四大龍膽品種之一，憑借其多種藥理作用，尤其是在保肝、健脾方面展現出的良好功效，使其在臨床上得以廣泛應用。隨著對化學成分研究的不斷深入,藥理研究也從對提取物研究轉向對單體化合物篩選。但藥理實驗僅僅針對某一單體化合物或某一類成分進行研究，對于滇龍膽中各成分之間是否有協同或抑制作用仍不清楚，尚需進行大量研究。由于滇龍膽的藥用部位主要在其根及根莖，地上部分暫被作為棄物處理,因此，要加強對滇龍膽地上部分資源的評價研究。