索斯諾夫獨活對黃瓜尖孢鐮刀菌的抑制作用及田間防效

柳春燕　馬群飛　叢蘊喆　陳靠山

摘 要：目的：研究索斯諾夫獨活對黃瓜枯萎病病原菌的抑制效果。方法：用乙醇提取獲得獨活提取物，采用生長速率法測定提取物對尖孢鐮刀菌的抑制作用，用小區田間試驗測定防治效果。結果：索斯諾夫獨活的抑菌效果高于中國短毛獨活的，其抑菌中濃度EC50為0.1175，而中國獨活的EC50為0.3181。用索斯諾夫獨活提取物進行田間防效試驗，防治效果在84.1%～86.1%，優于葉枯唑的。結論：索斯諾夫獨活具有很強的抑制病原菌的作用，有效濃度是中國短毛獨活的3倍，可初步確定索斯諾夫獨活比中國的短毛獨活具有更高的抗菌殺菌活性成分。

關鍵詞：索斯諾夫獨活;尖孢鐮刀菌;抑菌;防效

中圖分類號 S435文獻標識碼 A文章編號 1007-7731（2019）15-0088-03

尖孢鐮刀菌黃瓜專化型（Fusarium oxysporum f.sp cucumerinum）是引起黃瓜枯萎病（Cucumber fusarium wilt）、影響黃瓜生產的毀滅性土傳病原菌，可借助雨水、灌溉水等進行遠距離傳播，露地和保護地栽培連作地區發生尤為嚴重[1]。使用化學藥劑防治，容易產生抗藥性，也易引起土壤環境污染問題，因此，尋求無公害低殘留的植物源殺菌劑已成為生物農藥研究的熱點之一[2]。

獨活屬在全世界的分布量約60種，多數分布于歐洲與亞洲地區，我國有23種。中藥獨活是傘形科重齒毛當歸的干燥根（Angelica pubescens Maxim. f. biserrata），其性微溫、味辛苦，具有祛風除濕、通痹的作用[3]，主產于四川、湖北、安徽等地，主要為栽培種[4]。獨活在俄羅斯境內分布有40多個品種，主要為野生種，其中索斯諾夫獨活（Heracleum sosnowskyi）的栽培面積最廣，大約為100萬hm2，在當地被稱為無用的“毒草”。

獨活在臨床上是治療風濕的首選藥[5]，但臨床應用數量有限。當前，獨活提取物在農業生產上已有了一定的應用研究，例如，張知俠研究表明，短毛獨活精油對小麥紋枯病菌（Rhizoctonia cerealis van der Hoeven）、油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum （Lib）de Bary）、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici Leonian）均具有抑制作用[6];李敏敏等研究表明，獨活乙醇提取物中含具有高效抑制柑橘炭疽菌的活性物質[7];加拿大獨活（Heracleum maximum）含有抗細菌的香豆素[8]，伊朗獨活（Heracleum persicum）揮發油中的化學成分1，8-桉葉和己酯對5種鐮刀菌具有抑制作用、但不明顯[9]。

目前，索斯諾夫獨活對植物病原真菌的抑菌活性尚未見報道。為此，本研究以尖孢鐮刀菌黃瓜專化型為模式病原菌，研究了索斯諾夫獨活乙醇提取物（以下簡稱俄羅斯獨活）和短毛獨活乙醇提取物（以下簡稱中國獨活）對病原真菌的抑制作用，并且對俄羅斯獨活提取物進行了田間防效試驗，為俄羅斯獨活作為植物源殺菌劑在解決農業生產中的土傳病害問題提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試植物 索斯諾夫獨活，由俄羅斯醫學技術科學院俄籍華僑司懷珠院士提供并鑒定。中國獨活購自亳州中藥材市場，由皖南醫學院藥學院年四輝副教授鑒定為短毛獨活（Heracleum moellendorffii）。

1.1.2 供試菌種 尖孢鐮刀菌黃瓜專化型，由山東省農業科學院植物保護研究所齊軍山研究員分離鑒定并提供，在PDA培養基上繼代培養。

1.2 試驗方法

1.2.1 獨活提取物的制備 參照王樹桐的方法[10]，略有改進。取經粉碎的獨活20g，加80%乙醇100mL，30℃、150r/min條件下恒溫振蕩提取24h，4層紗布過濾，5000r/min離心10min，取上清液，再經0.45μm膜二次過濾，取上清液，45℃旋轉蒸發至干，乙醇回收。收集提取物稱量，計算得率。

1.2.2 獨活提取物對尖孢鐮刀菌菌絲生長的抑制作用 取提取物2g溶于20mL的50%乙醇中作為母液，4℃下保存。取上述母液1mL與99mLPDA培養基混合均勻制成含1g/L的帶藥培養基，倒入8.5cm平板，冷卻后在平板中央接直徑0.6cm的尖孢鐮刀菌菌片。重復4次。以純PDA培養基平板作為空白對照，以含有0.5%乙醇的PDA培養基作本底對照。置于28℃恒溫培養箱培養，接種后3d、5d、7d、10d分別測量菌落大小（用十字交叉法測量菌落直徑），計算抑菌率。計算公式如下：

抑菌率（%）=（對照凈生長量-處理凈生長量）/對照凈生長量×100[11]

在1g/L帶藥培養基基礎上分別以2、1、0.5、0.125g/L濃度梯度的帶藥培養基接種尖孢鐮刀菌后3d（72h），測量菌落大小，試驗數據用DPS軟件做毒力回歸方程，計算EC50值。

1.2.3 田間防效試驗 田間試驗點分別設在萊陽市穴坊鎮東富山村和照旺莊鎮西淘章村2個農戶的大棚里，大棚面積均為540m2（9m×60m）。棚內連續2年種植黃瓜，黃瓜品種均為青翠一號。小區實驗設4個處理：（1）俄羅斯獨活提取物1000倍噴施;（2）俄羅斯獨活提取物2000倍噴施;（3）葉枯唑（湖北鑫農化工生產）600倍噴施;（4）清水對照。重復3次，小區面積24m2。東富山村大棚于2019年3月9號定植，西淘章村于2019年2月28日定植。2棚定植緩苗后每隔15d噴施1次，4月22日棚內已發生枯萎病，對各處理進行病情調查，計算病情指數和相對防效。病情分級標準為5級∶0級：全株無病;1級：全株25%以下葉片萎蔫;2級：全株25%～50%葉片萎蔫;3級：全株50%以上葉片萎蔫;4級：因病枯死。

2 結果與分析