NSCLC患者尿液中游離miRNAs qPCR內參基因的選擇

鐘 鵬， 郁霞青， 陳志剛， 易婉婉， 賈成友， 呂中偉

(1. 同濟大學附屬第十人民醫(yī)院核醫(yī)學科，上海 200092; 2. 同濟大學附屬上海市肺科醫(yī)院呼吸科，上海 200433)

尿液作為血液經(jīng)過腎臟過濾的體液，可及時、如實地反映體內的生理和病理情況。尿液還是真正意義上的無創(chuàng)取樣來源，可連續(xù)采集并含有多種成分[1]。最新用多種方法包括質譜聯(lián)用可檢測到尿中蛋白數(shù)量6085種[2]，實體腫瘤患者的數(shù)量則會比正常人還要多近1000種[3]。尿液中總共超過3000多種代謝物[4]，還有循環(huán)核酸，包括循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)，循環(huán)RNA或微小RNA(miRNA)等[5]。但開發(fā)尿液在疾病診斷治療當中應用的研究卻任重道遠。尿液中miRNAs最開始作為標志物應用在泌尿生殖系統(tǒng)疾病，且數(shù)量僅限200～300種[6]，但日本學者通過納米柱法可以從尿液中檢測到近1000種miRNAs，并且首次發(fā)現(xiàn)尿液中的某些miRNAs在非泌尿生殖系統(tǒng)以外的肺癌、肝癌、胰腺癌等疾病中也具有顯著差異表達[7]，因此開啟了尿液miRNAs在腫瘤診斷方面更廣闊的應用前景。

確定內參對于各種檢測的重要性都不言而喻，尿液中miRNAs的半定量檢測亦需要相應的內參基因來標定，但對于miRNAs的內參標準卻有不同的報道。有報道在尿液中，HY3、RNU48[8]、5s RNA[9]、RNU44和U6[10]等均可作為尿液囊泡或血漿或尿液中miRNAs的內參基因，但不同文章的結果卻不一致。

為了解決尿液中的內參基因不一致的問題，本研究以非小細胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)患者和健康對照組為研究對象，通過BGISEQ-500 miRNA建庫和NGS，并用qPCR進行驗證，探討適用于正常人和NSCLC的尿液中的miRNAs內參，期望能為今后尿液中miRNAs作為疾病診斷標志物提供重要的參考。……