天津部分地區種公豬常溫精液帶菌情況調查

張丹 殷茵 戈成 趙子墨 李富強 崔茂盛

摘要：該試驗通過對天津市部分地區種公豬常溫精液的抽樣調查，分別對所采樣品進行細菌培養，最終利用全自動微生物分析系統儀對所培養的細菌分離鑒定。該次試驗共檢測出3種細菌，分別是埃希氏菌屬大腸桿菌、腸道球菌屬糞鏈球菌及粘質沙雷菌。

關鍵詞：常溫種公豬精液;細菌培養;分離鑒定

中圖分類號：S852.6

文獻標識碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.22.003

0引言

豬的人工授精技術在我國于20世紀60-70年代已廣泛開展，經過不斷研究，目前此項技術已較為完善，大幅度提高優秀種公豬的利用率，并且在一定程度上減少了疫病傳播。但是常溫保存下的種公豬精液很容易滋生細菌等微生物，這些微生物很有可能導致精液質量下降，直接影響母豬受胎率[1]。因此種公豬常溫精液中細菌的分離鑒定對精液的保存及利用也是至關重要的。

1試驗準備

1.1儀器

恒溫培養箱（品牌：博訊;型號：GSP-9050MBE）;生物安全柜（品牌：力康;型號：Hfsafe-1500A2）;生物顯微鏡（品牌：奧林帕斯;型號：BX43）;高壓滅菌器（品牌：博訊;型號：YXQ-0LS-50SII）;醫用常溫冰箱（品牌：海爾;型號：HY°C-260）;全自動微生物分析系統儀（品牌：BiomerieuxsaFrance;型號：VITEK2 compact）

1.2材料

培養基（普通營養瓊脂培養基、血液瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基）;革蘭氏陰性菌鑒定卡;革蘭氏陽性菌鑒定卡;營養肉湯;革蘭氏染色套裝;酒精燈;接種環等。

2試驗步驟

2.1樣品準備

（1）分4次共抽取不同種公豬、不同時間的100份種公豬常溫精液作為樣品，每次獲得樣品數量25份。

（2）將抽取的樣品保存在精液保存箱中，在精液管上標注好采樣時間及所取種公豬的耳標號。

2.2細菌培養及提純

（1）每次試驗在25份樣品中隨機抽取5份種公豬常溫精液，搖勻，取普通營養瓊脂10個（每個樣品接種2個），用無菌接種環挑取精液樣本，均勻涂抹在培養基上;蓋好皿蓋，標記好接種時間，所取樣品的耳標號（每個耳標號接種2份）;然后將普通營養瓊脂平板倒置放入37°C的細菌恒溫培養箱中培養24～48h。見圖1、圖2。

（2）24～48h后，從原始的培養皿中依次挑取一半的單一菌落，依次在瓊脂培養基平板中劃線接種。然后將平皿蓋蓋好，用高壓過的記號筆寫下接種時間、菌種來源，倒置放人恒溫培養箱中培養。按照此方法操作，直到將樣品接種培養基上的所有菌落分離，得到單一純化菌種。見圖3、圖4。

（3）將選取待檢菌落，同時挑取剩下半個單一檢菌落接種在營養肉湯中培養18～24h。在肉湯管上，標記好接種時間、菌種來源，以備待用。

（4）采用革蘭氏染色方法，對分離到的微生物菌落進行涂片染色，觀察菌體的形態和結構，判斷其陰陽性。

（5）利用全自動微生物分析系統儀對待檢細菌進行鑒定。

2.3細菌鑒定

利用自動微生物分析系統儀對樣品進行鑒定，得到鑒定結果。

2.4常溫精液鑒定

其余95份常溫精液樣品，依照2.2、2.3步驟進行鑒定。

3結果與分析

本次試驗共檢測出3種細菌，按照細菌的生長特點、染色后的鏡檢結果，以及微生物分析系統的鑒定報告，現已確定分離出的細菌種類為3種，分別是埃希氏菌屬大腸桿菌、腸道球菌屬糞鏈球菌及粘質沙雷菌。其中大腸桿菌和糞鏈球菌均為腸道內常駐菌，而粘質沙雷菌可存在于尿道中。見圖5。

4討論與結論

豬精液中微生物有動物性和非動物性2種來源，第1種主要是由于公豬發生疾病，病原微生物是病毒感染生殖道或其他組織所致。第2種污染來源主要來自于收集精液，即采精過程，精液暴露于環境中受環境微生物侵染[2]。本次所檢測的對象來源均為正規種公豬場，皆有嚴格的疫苗接種及疫病監護手段，同時從檢測結果分析，所檢出的3種細菌所占比例均不超過10%，故可暫且不考慮動物自身帶有疾病的可能，當然若需明確排除，還要進一步輔助檢測手段。

市場上銷售的稀釋劑中普遍添加有抑菌效果的抗生素類藥物，比較常見的有氨基糖甙類、林可酰胺類和乳胺類抗生素[3]，所以稀釋后的常溫種公豬精液應該是無菌的，但從檢測出大腸桿菌的結果進行分析，在實際使用中依然存在微生物在稀釋精液中大量存在，并且生長繁殖生命活動可以正常進行，或者在短時間可以達到抑菌作用，但保存時間達到2～3d后微生物抑制效果就已衰弱的現象，究其原因可能是添加的抗生素類藥物對感染精液的微生物不敏感。因此，應定期對常溫種公豬精液進行細菌檢測，通過藥敏試驗篩選出抑菌效果好的抗生素。

檢測出糞鏈球菌的樣品中均為檢測出大腸桿菌這一試驗結果，可推測出糞鏈球菌可能具有抑制大腸桿菌的作用;而粘質沙雷氏菌的檢出，不排除采集精液時有尿液混人的可能，因此建議應嚴格控制采精流程，提高采精人員的技術水平，以免精液在采集過程中受到污染。

參考文獻

[1]張家慶，伏彭輝，毛獻寶，等.公豬精液中細菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].養豬，2009（6）：55-56.

[2]金穗華，劉源遠，許國林，等.公豬精液中細菌種類及藥敏試驗[J].養豬，1994（1）：19-20.

[3]孫曉軍，滾雙寶、豬精液常溫保存稀釋液篩選試驗[J].甘肅畜牧獸醫，2010，40（4）：13-15.