化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術對雞血藤飲片煮散質 量體系進行探索

陶愛波

摘要：分析雞血藤飲片煮散質量體系應用化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術探索情況發(fā)現(xiàn)：化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術對雞血藤飲片煮散質量體系有較好的識別檢測功能，同時雞血藤煮散飲片的浸出率、質量均一性均較高。

關鍵詞：雞血藤飲片;DNA條形碼分子鑒定技術;化學指紋圖譜法;質量體系

雞血藤飲片是臨床上較常用的中藥，其功效主要包括活血、補血、通絡等，在月經(jīng)不調(diào)、血虛等疾病的治療上有較好的療效[1]。雞血藤主要來源于自然環(huán)境，但近年來的過度采摘，導致資源儲備量下降，進而進一步影響雞血藤藥材的質量，導致其重要的化學成分含量存在很大差異，從而對臨床藥物的穩(wěn)定性、應用效果均產(chǎn)生直接的影響。雞血藤飲片煮散可有效減少雞血藤藥材的使用量，但對于該中藥識別溯源存在很大的困難度，故需一種易于鑒定、檢測方式[2]。因此為了分析雞血藤飲片煮散質量體系應用化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術探索情況，特選取雞血藤飲片200g作為研究對象行對比分析，現(xiàn)將結果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取雞血藤飲片200g作為研究對象，將雞血藤原飲片作為對照組（100g），將余下雞血藤飲片粉碎后過篩得到雞血藤煮散飲片，將其作為觀察組（100g）。

1.2方法

化學指紋圖譜法：應用高效液相色譜儀系統(tǒng)（美國Waters2695型），選擇Empower色譜工作站、W2998 DAD 檢測器，建立色譜條件，制備表兒茶素（中國藥品生物制品鑒定所，生產(chǎn)批號：110878-200102，含量：≥98%）對照品溶液，將其置于4℃冰箱中，保存?zhèn)溆茫苽潆u血藤飲片（康美藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：160301031）供試品溶液;DNA條形碼分子鑒定技術取對照組與觀察組飲片樣本，應用液氮磨碎，并應用植物DNA提取試劑盒提取基因組總DNA，ITS2序列擴增應用正向引物、反向引物進行擴增，PCR模板DNA為2.0μL，反應體系為25μL，PCR擴增產(chǎn)物應用1.2%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，并應用PCR 儀（美國Applied Biosystems公司，型號：2720Thermal Cycler）雙向測序PCR產(chǎn)物。雞血藤飲片，雞血藤煮散飲片與雞血藤原飲片采用標準湯劑煎煮法進行提取，分別加水浸泡、煮沸、過濾，再加水煎煮、過濾，減壓旋蒸，蒸干，計算出膏率。

1.3觀察指標

①對比兩組患者表兒茶素RSD、出膏率、表兒茶素含量、指紋圖譜相似度以及相對峰面積。

1.4統(tǒng)計學處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，正態(tài)計量數(shù)據(jù)用“”表示，組間比較采用t檢驗，樣本率的比較采用χ2檢驗;以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

觀察組表兒茶素RSD顯著低于對照組;觀察組出膏率、表兒茶素含量、指紋圖譜相似度以及相對峰面積顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。具體見表1。

3 討論

雞血藤飲片煮散通過粉碎雞血藤，使其成為一定的粒度，再應用水與之共煎，過濾沉渣，取上述汁，制成煮散，來進一步提高雞血藤藥材煎煮效率，節(jié)約雞血藤用量，但雞血藤飲片煮散過程中由于需要粉碎，導致雞血藤藥材形態(tài)遭到破壞，使臨床上無法對該藥物進行鑒別，故提供精準的雞血藤識別與檢測，提高臨床用藥療效穩(wěn)定性尤為重要，為探究雞血藤飲片煮散質量體系應用化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術探索情況，特做此研究分析[3]。

本研究表明，觀察組表兒茶素RSD顯著低于對照組;觀察組出膏率、表兒茶素含量、指紋圖譜相似度以及相對峰面積顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結果顯示表與雞血藤原飲片相比，雞血藤飲片煮散的兒茶素RSD值明顯降低，指紋圖譜相似度顯著升高，說明后者質量均一性較高，同時出膏率顯著升高，表明雞血藤飲片煮散可有效提高該藥材有效成分的煎出率。與雞血藤原飲片比較，雞血藤飲片煮散質量體系應用標準化、規(guī)范化工藝，微小化、均勻化處理雞血藤飲片的形狀、規(guī)格，使其呈顆粒型，高效的分裝、調(diào)劑、煎煮，藥液過濾速度適度，使雞血藤飲片質量更加穩(wěn)定化，澄清度尚可，有效提高臨床雞血藤用藥的穩(wěn)定。與雞血藤原飲片指紋圖譜相比，雞血藤飲片煮散相對峰面積有所增高，指紋圖譜相似度更佳，證實應用化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術可保證雞血藤飲片煮散質量體系的質量，解決了辨藥之難的問題，提供了飲片煮散的鑒定、檢測的可靠技術，便于雞血藤飲片煮散推廣、應用。此外，與雞血藤原飲片比較，雞血藤飲片煮散可在保證療效的同時，還可有效降低雞血藤藥物用量，提高雞血藤資源的合理利用率，并提高甾體、黃酮類等雞血藤藥效物質的溶出，保證藥物質量的穩(wěn)定性。

綜上所述，對于雞血藤飲片煮散質量體系來說，應用化學指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術具有較高的臨床應用價值，可實現(xiàn)飲片的質量均一化、標準化工藝制備、自動化生產(chǎn)，為中醫(yī)臨床療效提供可靠保障。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[J].北京﹕中國醫(yī)藥科技出版社，2015：194.

[2] 舒順利，應軍，劉軍民，等. 雞血藤化學成分研究. 中藥新藥與臨床藥理，2012，23（2）：184-186.

[3] 陳士林，黃志海，丘小惠，等. 中藥精準煮散飲片[J].世界科學技術中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2016，18（9）：1430-1440.