豬源沙門氏桿菌分離鑒定及體外抑菌試驗

侯美東

摘要：該文主要分析了中小規模養殖場保育豬出現腹瀉病的臨床癥狀，并結合病理學檢查采集相關病料，對致病菌進行分離培養，并將分離培養的致病菌進行進一步藥品試驗，確定高敏抗生素。細菌分離鑒定發現，從病死豬的肝臟腸系膜淋巴結中分離得到的致病菌形態一致，經過沙門氏菌顯色培養基培養，確定分離得到的致病菌為沙門氏菌。將分離得到的致病菌進行紙片藥品試驗，發現該種致病菌對頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏。結合分離鑒定和體外抑菌試驗，要指導養殖戶在發生同樣疾病后，選擇高敏抗生素進行對癥治療，只有這樣才能提高治療效果，縮短發病周期，降低養殖場的經濟損失。

關鍵詞：豬源沙門氏菌;分離鑒定;體外抑菌試驗

中圖分類號：S858.28

文獻標識碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.013

0引言

豬源沙門氏菌病又被稱為副傷寒，是由致病性沙門氏菌感染引起的一種消化道疾病，臨床上主要表現為急性敗血癥和壞死性腸炎。慢性病例還會表現為肺炎和大腸壞死性炎癥。豬沙門氏菌病造成的危害十分嚴重，會給生豬養殖產業造成巨大經濟損失。近年很多養殖戶在進行生豬養殖中，存在不合理的用藥行為，養殖場一旦出現發病情況，隨意使用抗生素進行治療，使很多致病原的耐藥性極大增強，多種藥物的防控效果逐漸下降。為進一步提高疾.病的診斷效率和治療效果，在明確具體在致病原的基礎上，一定要進行嚴格的藥品試驗，篩選出高敏抗生素，指導養殖戶科學用藥，合理用藥。只有這樣才能提高防控效果，降低發病率。

1材料與方法

1.1發病情況

2018年8月13日，某中小規模養殖場養殖的40頭保育豬突然出現發病情況，大部分患病豬主要表現為嘔吐腹瀉，體溫沒有表現出明顯的變化。通過對養殖場的免疫程序進一步檢查，養殖戶對保育豬免疫接種豬瘟、豬尾狂犬疫苗。發病后養殖戶交患病豬單獨隔離，但沒有及時將病情上報，自行選擇抗生素進行治療，沒有取得明顯的治療效果，發病2周后，養殖場死亡豬的數量進一步提升。結合養殖場患病豬的臨床表現，對病死豬進行妥善的病理學解剖，采集病料進行嚴格的試驗室診斷，分離得到致病原，并進行體外抑菌試驗，結合抑菌試驗篩選出高敏抗生素，很好地控制病情，避免病情進一步擴散蔓延，造成更為嚴重的損失。

1.2材料

待檢材料主要是在無菌條件下采集病死豬的病變臟器器官。在細菌分離鑒定和體外抑菌試驗中，運用到的材料主要為巧克力瓊脂培養基、沙門氏菌顯色培養基及用于藥敏試驗檢測的各種材料。

1.3細菌分離鑒定和藥敏試驗

首先，細菌分離鑒定。將養殖場的病死豬解剖后，觀察各個臟器器官的病理學變化和腸道的病變情況。然后在無菌條件下采集病死豬的典型病變臟器組織，并在無菌條件下將病料進行充分的粉碎，用接種環采集病料后劃線接種到巧克力瓊脂培養基上，然后將巧克力瓊脂培養基放置在37°C的恒溫培養箱內，持續培養48h，將培養基取出觀察致病菌的形態，小心調取分離得到的致病菌，選擇使用革蘭氏染色劑進行充分染色，放置在顯微鏡下觀察致病菌的形態。將巧克力瓊脂培養基場分離得到的致病菌轉移到沙門氏菌顯色培養基上，放置在37°C的恒溫培養箱內，持續培養24h觀察結果[1];其次，藥敏試驗。從沙門氏菌顯色培養基上挑取紫色的致病菌菌落，將其轉移到血清肉湯培養劑當中，37°C震蕩培養24h，然后選擇使用紙片擴散法進行常見的抗生素藥敏檢測。

2結果

2.1病理解剖

將養殖場的病死豬解剖后，觀察各個臟器器官和腸道組織的病變情況，發現大腸粘膜顯著腫脹，聚集成縱向的褶皺狀[2]，嚴重的呈現紫紅色，腸道切面呈現油脂狀或者腦髓狀。脾臟顯著腫大，外觀呈現淡紫色或淡藍色，切面呈現紅色，肝臟腫脹，明顯淋巴結腫，大出血，肺臟充血明顯。

2.2細菌分離鑒定

將病死豬的病變組織接觸到巧克力瓊脂培養基上，持續培養48h后可以發現有菌落生長，并且各個臟器器官病料中分離得到的致病菌形態一致。致病菌呈現無色透明，濕潤，光滑圓形。小心挑取分離得到的致病菌常規涂片染色鏡檢，可以發現革蘭氏陰性染色的桿菌存在。從巧克力瓊脂培養基上挑取致病菌菌落轉移接種到沙門氏菌顯色培養基上，放置在37°C的恒溫培養箱內，持續培養24h，可以發現菌落生長出特有的紫色[3]，結合上述特征性的變化，可以判定致病原為沙門氏菌。

2.3藥敏試驗

選取純化分離得到的治病菌進行常規抗生素敏感性檢測，檢測法為紙片擴散檢測法。檢測共選擇了9種常見的抗生素，主要包括頭孢曲松鈉、氟苯尼考、恩諾沙星、氨芐西林、氧氟沙星、多西環素、慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素。藥品試驗結果可以發現該種致病菌對頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏，抑菌圈直徑分別為22、23、21、20、19mm。

3討論

豬沙門氏菌病主要危害1～4月齡的仔豬，6月齡以上的仔豬感染該種疾病后所表現的臨床癥狀較輕，對該種致病菌的抵抗能力相對較強。結合前人的研究結果可以發現豬霍亂沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、豬傷寒沙門氏菌、德爾卑沙門氏菌、腸炎沙門氏菌等血清是引起該種疾病的主要致病原。研究采集的病料中分離形態一致的致病菌，并通過沙門氏菌顯色培養基鑒定致病原為沙門氏菌。由此可以確定養殖場是由沙門氏菌感染引起的傳染性疾病。確診為沙門氏菌病后，進行嚴格藥品試驗，最終發現該種致病菌對頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏，抑菌圈直徑分別為22、23、21、20、19mm。同時對多種抗生素的抵抗能力較強，抑菌效果較差，很多抗生素不會表現出任何的抑菌效果。由此可以看出，近年隨著生豬養殖產業不斷向前發展，沙門氏菌的耐藥性不斷增強。由于基層地區的動物試驗室檢測條件有限，沒有明確是哪種沙門氏菌，需要進一步完善。

4結束語

沙門氏菌是自然界中廣泛存在的一種條件性致病菌，隨著生豬養殖產業不斷向前發展，沙門氏菌對豬養殖業造成的危害日趨嚴重。并且沙門氏菌是極容易產生耐藥性的一種致病菌，加上生豬養殖中抗生素添加劑的胡亂使用，導致致病原的耐藥性顯著增強，耐藥譜嚴重擴大，加大對該種疾病源預防和治療的難度。養殖場的病情確診后，引導養殖戶選擇高敏抗生素進行對癥治療。選擇使用98%的左旋氧氟沙星，每千克飼料使用0.1g，連續使用1周。同時肌肉注射卡納霉素注射液，使用劑量為0.15mL/kg體重，2次/d，連續使用5d為1個療程。通過指導養殖戶采用高敏抗生素進行對癥治療，很好地控制病情，降低發病率和死亡率，養殖場患病豬在短時間內恢復健康。在生豬養殖中，應引導養殖戶充分做好該種疾病的預防工作，認識疾病的傳播流行和養殖場的飼養管理不當，衛生條件有很大關系。在疾病防控中，應始終堅持預防為主的原則，改善整體的飼養管理條件，及時清理豬舍中的各種糞便污染物，始終堅持自繁自育、全進全出的養殖模式，減少疾病傳播流行途徑。

參考文獻

[1]王楊，豬沙門氏菌病的流行病學、鑒別診斷與防控措施[J].現代畜牧科技，2019（5）：94-95.

?[2]劉小蘭，邊彥超，康紹珠，等，雞唾液乳酸桿菌的分離鑒定及體外抑菌試驗[J].黑龍江畜牧獸醫，2018（23）：169-173.

[3]李娟.豬沙門氏菌病的流行病學、臨床癥狀、診斷及其防控[J].現代畜牧科技，2018（12）：53.