2017-2018年貴州省畢節市羊小反芻獸疫診斷及血清學監測調查

張平 賀志昊 宋德榮 周大榮 彭華

摘要：為切實掌握畢節市羊小反芻獸疫疫情發展趨勢，增強小反芻獸疫情預警預報能力，研究對2017-2018年畢節地區部分發病羊場的小反芻獸疫羊只進行臨床及實驗室診斷，同時對縣區利用春、秋兩季集中監測及專項監測對羊小反芻獸疫免疫抗體進行血清學監測。結果顯示，實驗室利用熒光定量PCR方法檢測更為準確。2017-2018年畢節市小反芻獸疫免疫抗體陽性率平均達80%以上，總體處于較高水平，各縣區免疫抗體水平略有差異。研究調查為畢節市科學、有效防范小反芻獸疫病疫情發展趨勢提供理論依據。

關鍵詞：小反芻獸疫;抗體水平;監測評估

中圖分類號：S858.26

文獻標識碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.001

0引言

小反芻獸疫（PestedesPetitsRuminants，PPR）是一種急性或者亞急性的接觸性傳染病，潛伏期為3～6d，最長可長21d，山羊發病時癥狀較綿羊嚴重。該病是由于感染小反芻獸疫病毒（PestedesPetitsRuminantsVirus，PPRV）而導致發病率和死亡率都較高。病羊主要是發熱、水樣腹瀉、黑痢，口鼻有粘性、膿性分泌物，口腔黏膜潰瘍、壞死，消瘦。小反芻獸疫首次在我國西藏發生。目前畢節已有該疫情發生，對畢節市畜牧業發展造成極其嚴重的影響。

小反芻獸疫常用的檢測方法是酶聯免疫吸附法（ELISA）和熒光定量RT-PCR方法。研究通過2017-2018年，對畢節市9個縣（區）開展小反芻獸疫血清學與實驗室診斷檢測。監測結果為掌握畢節羊群小反芻獸疫免疫接種效果和感染情況，制定小反芻獸疫的防控決策提供科學依據。

1材料

1.1疫苗與診斷試劑

新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產的小反芻獸疫（Nigeria75/1株）弱毒活疫苗，為政府招標采購疫苗[1]。小反芻獸疫競爭ELISA檢測試劑盒、小反芻獸疫熒光RT-PCR檢測試劑盒，均購自中國動物衛生與流行病學中心[2]。

1.2樣品采集與保存

2017-2018年，在畢節全市范圍內，重點對規模養殖場、活畜交易市場和發生過小反芻獸疫疫情的區域采集羊血液、鼻拭子和部分病料樣品。

1.3主要器材

酶標儀（美國伯樂BIO-RADiMark）、洗板機（美國伯樂BIO-RAD1575）、熒光PCR擴增儀（美國伯樂BIO-7500）等。

2方法

2.1臨床癥狀觀察

研究對2017-2018年畢節市各縣區發生的6起小反芻獸疫疫情病例進行現場解剖及臨床診斷。

2.2實驗室RT-PCR檢測

提取病死羊組織臟器或羊鼻腔拭子的RNA，利用熒光定量RT-PCR方法進行病毒核酸檢測[3]。試驗結果成立條件為，陰性對照無Ct值，同時無特定擴增曲線，陽性對照Ct值≤30并出現特定的擴增曲線[4]。待檢樣品Ct值≤30，且出現特定的擴增曲線判為PPRV陽性;待檢樣品30<Ct<37并出現特定擴增曲線判為可疑，需要重新復檢，再擴增后進行檢測結果判定，如仍為可疑，則可判定為陽性;被檢樣品Ct值≥37時，判定為陰性[5-7]。

2.3血清學監測

調查研究利用畢節市春秋防集中監測及專項監測，對畢節2017-2018年4300份羊血清進行免疫抗體監測。其中商品代養殖場2563份血清、散養戶1737份血清。

3結果與分析

3.1臨床癥狀

畢節發生的小反芻獸疫病例均出現精神倦怠，站立不穩，眼結膜發炎并附著有黃色粘稠物，腸系膜出血，水樣腹瀉，部分出現紅色糞便臨床癥狀。見圖1。

3.2實驗室RT-PCR檢測結果

2017-2018年采集鼻拭子和組織，應用RT-PCR檢測PPRV病原。病原學監測樣品總數量為6份，陽性數3份，陽性率為50%，見圖2。

3.3抗體監測結果

2017-2018年連續2年對畢節市免疫小反芻獸疫羊的抗體水平進行了監測。38個規模場（戶）55個散養戶開展小反芻獸疫抗體監測工作，檢測血清樣品4300份，免疫抗體合格樣品3746份，免疫抗體合格率87.11%。結果顯示，各年份抗體陽性率平均達到80%以上，均已經達到國家規定的70%的標準。

比較規模場和散養戶免疫后抗體的陽性率，發現各年度二者之間的差異均不顯著。其中2017年養殖場與散戶的免疫抗體水平低于2018年養殖場與散戶的免疫抗體水平近10個百分點，見圖3，2018年呈上升態勢。2017年散養戶高于規模場PPR抗體陽性率近3%，2018年畢節規模場和散養戶PPR抗體陽性率基本接近。

比較畢節市各個縣區的免疫抗體陽性率，發現2017-2018年各個縣區免疫抗體水平都在70%以上，七星關區PPR抗體水平略有下降，其中威寧縣PPR抗體水平整體高于其他縣，黔西縣PPR抗體水平相對低于其他縣區10%～26%。總體上小反芻獸疫免疫抗體水平達到農業部規定標準。見圖4。

4討論

研究對6例送檢樣品進行熒光定量PCR檢測，其中3例呈現小反芻獸疫陽性，3例呈現陰性。通過對2年的血清學樣品進行監測統計分析。結果顯示畢節本地區2017年小反芻獸疫免疫抗體水平低于2018年，整體免疫抗體水平達到80%以上，呈現逐年上升趨勢，商品代養殖場抗體水平整體高于散戶抗體水平近10%。另外各縣區免疫抗體水平參差不齊。

5結束語

PPR在畢節地區是一種新傳入的動物疫病，近年由于混合感染疫病的不斷出現，小反芻獸疫疫病已經不能簡單的通過臨床癥狀進行診斷，熒光定量PCR檢測是一種準確、有效的診斷方法[8-9]。受于檢測設備的限制，各縣區實驗室目前還不能進行實驗室診斷，羊只發生不明原因死亡，采樣送檢，進行實驗室檢測，是確診小反芻獸疫最直接的方式。隨著小反芻獸疫免疫抗體水平逐年上升以及防疫人員免疫操作技能的不段加強，畢節地區爆發大規模的疫情的風險也隨之降低。畢節堅持政府主導、社會參與、部門合作、區域協作的原則，強化省際間合作，對發現疫區運出的羊只，在采取撲殺等措施同時，及時通報相關省（區）獸醫部門，防止動物疫病跨區域傳播。

參考文獻

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