努比亞山羊BMPR-IB基因多態性與其產羔性狀的關聯分析

鄒輝 瞿秋紅 夏琴 崔悅悅 江雨航 韋玲靜 嚴雪瑜 蔣欽楊 韋英明

摘要：【目的】明確努比亞山羊骨形態發生蛋白受體-IB（BMPR-IB）基因多態性與其產羔性狀的關聯，為山羊育種尋找新的遺傳分子標記。【方法】采用DNA池結合PCR產物直接測序技術檢測努比亞山羊BMPR-IB基因全部編碼區的變異情況，以時間飛行質譜列陣技術對候選SNP位點進行基因分型，并分析BMPR-IB基因多態性與產羔性狀（產羔數、初生重和斷奶重）的關聯性。【結果】努比亞山羊BMPR-IB基因5'UTR第469位存在A→G堿基突變，內含子1第1664位和內含子9第11344位處存在G→A堿基突變。3個SNP位點（5'UTR 469th、Intron1 1664th和Intron9 11344th）存在3種基因型（GG型、GA型和AA型），對應的多態信息含量（PIC）分別為0.37、0.11和0.37，其中Intron1 1664th位點的基因頻率和基因型頻率處于Hardy-Weinberg平衡狀態（P?0.05），5'UTR 469th和Intron9 11344th位點則處于Hardy-Weinberg不平衡狀態（P<0.05）。關聯分析結果表明，努比亞山羊BMPR-IB基因5'UTR第469位堿基由A→G，其GG型母羊比AA型母羊的產羔數和子代平均初生重有所減少，但子代平均斷奶重增加;內含子1第1664位堿基由G→A，其GA型母羊比GG型母羊的產羔數和子代平均初生重均有所增加，但子代平均斷奶重減輕;內含子9第11344位堿基由G→A，其AA型母羊比GG型母羊產羔數少，但子代平均初生重和平均斷奶重均增加。可見，努比亞山羊BMPR-IB基因的3個SNP位點對其產羔性狀均無顯著影響（P>0.05）。【結論】努比亞山羊BMPR-IB基因存在3個SNP位點（5'UTR 469th、Intron1 1664th和Intron9 11344th），但對努比亞山羊產羔性狀影響不顯著，說明BMPR-IB基因對山羊的產羔性狀具有一定種屬特異性。

關鍵詞： 努比亞山羊;BMPR-IB基因;SNP位點;產羔性狀;多態性;關聯分析

中圖分類號： S827.92? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）04-0860-07

Abstract：【Objective】The correlation between Nubian goat bone morphogenetic protein receptor-IB（BMPR-IB） gene polymorphism and its lambing traits was clarified to search new genetic molecular markers related to goat breeding. 【Method】In this study， DNA pool and PCR products sequencing technique were used to detect the variation of whole coding region of Nubian goat BMPR-IB gene. Time flight mass spectrometry was applied to perform the genotype of candidate SNP loci， and analyze the relationship between polymorphism of BMPR-IB gene and goat lambing traits（lamb number， primary weight and weaning weight）. 【Result】There was a G→A base mutation at the 469th position of 5'UTR of BMPR-IB gene of Nubian goat， a G→A base mutation at the 1664th position of intron 1 and the 11343th position of intron 9. The three SNP loci（5'UTR 469th， Intron1 1664th and Intron9 11344th） had three genotypes（GG type， GA type and AA type）， the polymorphic information content（PIC） respectively were 0.37， 0.11 and 0.37. The gene frequency and genotype frequency of Intron1 1664th were in Hardy-Weinberg equilibrium state（P?0.05）， 5'UTR 469th and Intron9 11344th were in Hardy-Weinberg imbalance（P<0.05）. Correlation analysis showed that the 5'UTR 469th base of the BMPR-IB gene of Nubian goat was A→G， which resulted in a reduction of the lamb number and the average primary weight of the lamb in GG ewes compared with the AA ewes，but increase of the average weaning weight of the offspring. Intron1 1664th base was mutated from G to A， while the lamb number and the average primary weight of the GA ewes were higher than those of the GG ewes， but the average weaning weight of the offspring was reduced. Intron9 11344th base was mutated from G to A. The AA type ewes had fewer lambs than the GG ewes， and their offspring’s average primary weight and average weaning weight increased.The three SNP loci of BMPR-IB gene of Nubian goat had no significant effects on its lambing traits（P>0.05）. 【Conclusion】There are three SNP loci in the BMPR-IB gene of Nubian goats（5'UTR 469th， Intron1 1664th and Intron9 11344th）， but the effect on the lamb traits of Nubian goats is not significant， indicating that the BMPR-IB gene has species specificity on lamb traits for goats.

Key words： Nubian goat; BMPR-IB gene; SNP locus; lambing trait; polymorphism; association analysis

0 引言

【研究意義】山羊產羔性狀與其群體的繁衍速度和規模密切相關，是影響養羊業經濟效益的重要因素。骨形態發生蛋白（Bone morphogenetic proteins，BMPs）是20世紀60年代發現的一個受體蛋白，可與骨形態發生蛋白受體（Bone morphogenetic protein receptor，BMPR）結合，誘導胚胎腹側中胚層、軟骨和骨的形成，具有調節細胞增殖分化、遷移凋亡、細胞支持及胚發育等生物功能（鄒輝等，2018）。骨形態發生蛋白受體-IB（Bone morphogenetic protein receptor-IB，BMPR-IB）是一種重要的跨膜受體蛋白，主要參與轉化生長因子β通路，在調控成骨分化、細胞擴散及卵巢卵泡發育等過程中發揮重要作用，并直接影響綿羊等動物的繁殖性狀（孫紅霞等，2009;邵勇鋼等，2012）。因此，篩選出BMPR-IB基因的分子標記對提高山羊產羔性能具有重要意義。【前人研究進展】BMPR-IB是轉化生長因子B（Transforming growth factor B，TGFB）超家族中的一員（Dash et al.，2018），屬于TGF-β家族的I型受體，編碼一個轉移生長因子β亞基（TGFβ）受體家族成員（焦丹等，2016）。BMPR-IB基因是多種骨形態發生蛋白的膜受體基因，在動物輸卵管、骨骼肌、腎臟、下丘腦、子宮、骨骼、垂體、脊髓、耳和卵巢中的表達量逐漸升高（王小佳等，2017），參與調節顆粒細胞生長和分化、促進卵泡發育及增加卵泡數目，與卵母細胞上的生長因子、GDF9和BMP15共同影響動物的繁殖性能（Vacca et al.，2010）。已有研究證實，BMPR-IB基因敲除、沉默及其多態性均與動物排卵數等繁殖性能相關（Rodriguez et al.，2016）。綿羊BMPR-IB基因位于第6號染色體上，其mRNA序列全長3255 bp，DNA序列全長225039 bp，含有12個外顯子和11個內含子（李闖等，2018）。BMPR-IB基因第8外顯子存在1個FecB（Fecundity booroola）突變（A746G），導致第249位氨基酸由谷氨酰胺突變成精氨酸（Gln→Arg），該突變對綿羊排卵數有加性效應，對產羔數呈部分顯性效應，每增加1個拷貝將多排卵1.65枚;BMPR-IB基因除存在FecB突變位點外，還存在其他突變位點（姚雅馨，2017）。Souza等（2001）研究發現，C1113A突變導致出現大量小型有腔卵泡早熟、排卵率增加等表型特征，同時發現20個新的突變位點，其中3個突變位點（G922T、T1043C和G192T）導致氨基酸改變，但未影響產羔數。孫紅霞等（2009）、邵勇鋼等（2012）分別以小尾寒羊、蒙古羊和策勒黑羊為研究對象，發現BMPR-IB基因可能是控制小尾寒羊和灘羊多胎性能的主基因;但Chu等（2012）研究濟寧青山羊、文登奶山羊和蒙古絨山羊外顯子1、外顯子2、外顯子6、外顯子10和3'UTR的多態性時發現，BMPR-IB基因檢測出的突變位點對產羔數無顯著影響。李文楊等（2012）、劉遠等（2012a，2012b）分別采用PCR-RFLP對戴云山羊、閩東山羊、福清山羊和南江黃羊BMPR-IB基因進行SNP位點檢測，也未發現影響產羔數的堿基突變。Wang等（2015）研究發現，小尾寒羊和湖羊的BMPR-IB基因均存在3個突變位點（A746G、C718T和C47T），且對產羔數有一定影響，表明BMPR-IB基因可作為產羔性狀的遺傳分子標記。可見，要明確BMPR-IB基因對產羔數的影響是否具有種屬或品系特異性，還需進一步對更多數量和種類的羊群進行研究。【本研究切入點】目前，關于BMPR-IB基因對動物繁殖性狀的遺傳效應研究已有很多報道，但該基因在努比亞山羊產羔性狀中的研究較少。【擬解決的關鍵問題】采用DNA池結合PCR產物直接測序技術檢測努比亞山羊BMPR-IB基因全部編碼區的變異情況，以時間飛行質譜列陣技術對候選SNP位點進行基因分型，并對BMPR-IB基因多態性與產羔性狀（產羔數、初生重和斷奶重）進行關聯分析，以期為山羊育種尋找新的遺傳分子標記。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

努比亞山羊母羊血液均采自廣西扶綏廣羊畜牧養殖有限公司;DNA提取試劑盒購自天根生化科技（北京）有限公司，PCR擴增試劑盒購自南京諾唯贊生物科技有限公司，瓊脂糖和DL2000 DNA Marker購自廣州東盛生物科技有限公司。

1. 2 引物設計與合成

根據山羊BMPR-IB基因序列，采用Oligo 7.0設計擴增BMPR-IB基因片段序列的引物（表1），所有引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1. 3 DNA提取

根據血液DNA提取試劑盒說明，提取240只努比亞山羊母羊血液基因組DNA。然后取1.5 μL提取的DNA，采用分光光度計檢測OD260/OD280。根據OD260/OD280預測DNA純度，純品DNA的OD260/OD280為1.6～1.9;再以1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢驗DNA， -40 ℃保存備用。

1. 4 基因片段檢測及DNA池測序

PCR反應體系30.0 μL：2×Taq Master Mix 15.0 μL，上、下游引物各1.0 μL，DNA模板2.0 μL，ddH2O補足至30.0 μL。擴增程序：94 ℃預變性5 min;94 ℃ 30 s，退火30 s，72 ℃ 2 min，進行35個循環;72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。分別取5.0 μL PCR擴增產物，用1.5%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。從有效PCR擴增產物中各挑選3管進行片段測序，測序結果與NCBI上的參考序列進行BLAST比對分析。將提取的260管DNA（50 ng/μL）分成13個組，每組20管（按序號依次編排），然后從每組20管DNA中取出0.5 μL混在1個離心管中，混勻，即為1個混合池，共產生13個DNA混合池。以混合池DNA為模板對努比亞山羊BMPR-IB基因的全部外顯子進行擴增及測序分析。

1. 5 多態性位點（SNP）基因分型

采用MassARRAY時間飛行質譜列陣對SNP位點進行基因型檢測，并針對這些SNP位點設計相應的引物進行時間飛行質譜基因分型，基因分型的引物見表2。

1. 6 遺傳學分析

基于基因序列測序結果，計算不同SNP位點在努比亞山羊母羊群體中的基因型頻率、觀測雜合度（Ho）、期望雜合度（He）、有效等位基數（Ne）、多態信息含量（PIC）及Hardy-Weinberg平衡等遺傳學參數。

1. 7 統計分析

基因序列測序結果用DNASTAR、MegALign和SAS 9.0進行統計分析。

2 結果與分析

2. 1 努比亞山羊血液DNA提取結果

提取的努比亞山羊血液DNA樣品通過分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳檢測，其濃度和純度均符合要求，獲得的條帶清晰單一（圖1），可供后續研究使用。

2. 2 努比亞山羊BMPR-IB基因片段DNA池檢測結果

以提取的努比亞山羊血液DNA混合池為模板進行PCR擴增，擴增獲得的BMPR-IB基因片段大小均與預期結果一致（圖2），經DNA池序列分析發現，努比亞山羊BMPR-IB基因5'UTR第469位存在A→G堿基突變，內含子1第1664位和內含子9第11344位存在G→A堿基突變（圖3）。

2. 3 努比亞山羊BMPR-IB基因SNP位點的基因分型及其遺傳學分析結果

利用MassARRAY時間飛行質譜列陣檢測3種不同基因型（GG、GA和AA）的分布情況，結果發現3種不同基因型的樣品在分型時分別在3個區域密集分布（圖4），僅個別樣品因偏離檢測軌道而無法檢測出其基因型，絕大部分樣品的檢測結果在正常軌道上，能很好地區分出基因型，保證分型結果的準確性。

一般情況下，PIC<0.25為低度多態，0.25<PIC<0.50為中度多態，PIC>0.50為高度多態。由表3可知，5'UTR 469th和Intron9 11344th位點的PIC均為0.37，屬于中度多態;Intron1 1664th位點的PIC為0.11，為低度多態。此外，Intron1 1664th位點的Ho較高，缺少AA基因型個體，5'UTR 469th和Intron9 11344th位點的Ho和He較適中，均接近0.50。

從表4可看出，Intron1 1664th位點在努比亞山羊群體中的基因頻率和基因型頻率均處于Hardy-Weinberg平衡狀態（P?0.05），而5'UTR 469th和Intron9 11344th位點的基因頻率和基因型頻率則處于Hardy-Weinberg不平衡狀態（P<0.05），可能是在日常飼養及育種過程中經過人為選擇的結果。

2. 4 努比亞山羊BMPR-IB基因SNP位點與其產羔性狀的關聯性

BMPR-IB基因對努比亞山羊產羔性狀（產羔數、初生重和斷奶重）的關聯分析采用固定模型Yi=μ+Gi+ei。式中，Yi為產羔性狀記錄值;μ為群體均值;Gi為基因型效應;ei為隨機殘差效應。采用SAS 9.0中的GLM過程對不同BMPR-IB基因SNP位點與產羔數、初生重和斷奶重的相關性進行分析。結果（表5）表明，努比亞山羊BMPR-IB基因5'UTR第469位堿基由A→G，其GG型母羊比AA型母羊的產羔數和子代平均初生重有所減少，但子代平均斷奶重增加;內含子1第1664位堿基由G→A，其GA型母羊比GG型母羊的產羔數和子代平均初生重均有所增加，但子代平均斷奶重減輕;內含子9第11344位堿基由G→A，其AA型母羊比GG型母羊產羔數少，但子代平均初生重和平均斷奶重都增加。由表5可知，努比亞山羊BMPR-IB基因的3個SNP位點對其產羔性狀均無顯著影響（P>0.05）。

3 討論

BMPR-IB基因是影響動物繁殖性狀的重要基因（潘章源等，2015）。Mahdavi等（2014）采用RFLP-PCR檢測發現Kalehkoohi綿羊FecB基因BB型和B+型的羊產羔數分別較++型的多0.52和0.35只;Miao等（2016）通過全基因組轉錄組分析得出BMPR-IB基因與山羊的繁殖力關系密切。BMPR-IB基因在山羊上的研究已有較多報道，并獲得一些實用的分子標記投入生產實踐。Wang等（2015）研究發現小尾寒羊和湖羊的BMPR-IB基因均存在3個突變位點（A746G、C718T和C47T），且對產羔數有一定影響，表明BMPR-IB基因可作為產羔性狀的遺傳分子標記;但Chu等（2012）研究發現濟寧青山羊、文登奶山羊和蒙古絨山羊BMPR-IB基因的突變位點對產羔數無顯著影響，李文楊等（2012）在戴云山羊、閩東山羊、福清山羊和南江黃羊上也未發現影響產羔數的BMPR-IB基因突變。本研究結果表明，努比亞山羊BMPR-IB基因的3個SNP位點對其產羔性狀均無顯著影響，說明BMPR-IB基因對山羊的產羔性狀具有一定種屬特異性。

DNA混合池檢驗SNP位點和時間飛行質譜列陣基因分型是一種成熟且實用的技術（李隱俠等，2017）。本研究以努比亞山羊血液為材料，提取的DNA經濃度調節后確保在制備DNA混合池時各組分濃度相近，不會出現因濃度不均而引起的誤差。經DNA混合池PCR測序發現，努比亞山羊BMPR-IB基因存在3個SNP位點，且這3個SNP位點的疊峰部分均在90%以上，說明其多態性較明顯，也證實本研究的試驗方法可行可靠。本研究在努比亞山羊BMPR-IB基因片段上發現3個SNP位點，但這些SNP位點的變異對努比亞山羊產羔性狀影響不顯著，可能是所采集血液樣品上存在數據結構上的特異性，也有可能是SNP位點的遺傳效應具有種屬效應。因此，本研究雖然得出BMPR-IB基因上的SNP位點對努比亞山羊產羔性狀影響不顯著，但并不能說明該位點對山羊的產羔性狀沒有影響，而需進一步對BMPR-IB基因進行研究。

4 結論

努比亞山羊BMPR-IB基因存在3個SNP位點（5'UTR 469th、Intron1 1664th和Intron9 11344th），但對努比亞山羊產羔性狀影響不顯著，說明BMPR-IB基因對山羊的產羔性狀具有一定種屬特異性。

參考文獻：

焦丹，劉秀，李少斌，王繼卿，閆偉，李文浩，羅玉柱. 2016. 綿羊BMPR1B基因的生物信息學分析[J]. 甘肅農業大學學報，51（4）：1-6. [Jiao D，Liu X，Li S B，Wang J Q，Yan W，Li W H，Luo Y Z. 2016. Bioinformatics analysis of BMPR1B gene in sheep[J]. Journal of Gansu Agricultu-ral University，51（4）：1-6.]

李闖，柳海星，高見紅，喬佳琦. 2018. 羊主效多胎基因的研究現狀[J]. 延邊大學農學學報，40（1）：87-93. [Li C，Liu H X，Gao J H，Qiao J Q. 2018. A research progress on major prolificacy genes in sheep[J]. Agricultural Science Journal of Yanbian University，40（1）：87-93.]

李文楊，劉遠，林仕欣，張曉佩，高承芳，林碧芬，董曉寧. 2012. BMPR-IB，BMP15，GDF9基因作為福建省4個主要山羊品種多胎性能候選基因的研究[J]. 浙江農業學報，24（6）：975-979. [Li W Y，Liu Y，Lin S X，Zhang X P，Gao C F，Lin B F，Dong X N. 2012. Studies on BMPR-IB，BMP15 and GDF9 as candidate genes of fecundity in four breeds of goats in Fujian[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis，24（6）：975-979.]

李隱俠，張俊，錢勇，孟春花，王慧利，鐘聲，曹少先. 2017. 湖羊NR5A1基因SNPs篩選及其與產羔數的關聯分析[J]. 江蘇農業學報，33（1）：124-132. [Li Y X，Zhang J，Qian Y，Meng C H，Wang H L，Zhong S，Cao S X. 2017. SNPs selection of NR5A1 and its association analysis with litter size in Hu sheep[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，33（1）：124-132.]

劉遠，李文楊，林仕欣，張曉佩，高承芳，林碧芬，董曉寧. 2012a. BMPR-IB、BMP15、GDF9基因作為福清山羊高繁殖力候選基因的研究[J]. 中國草食動物科學，32（3）：12-14. [Liu Y，Li W Y，Lin S X，Zhang X P，Gao C F，Lin B F，Dong X N. 2012a. Study on BMPR-IB，BMP15 and GDF9 as candidate genes for fecundity in Fuqing goat[J]. China Herbivore Science，32（3）：12-14.]

劉遠，李文楊，林仕欣，張曉佩，高承芳，林碧芬，董曉寧. 2012b. BMPR-IB、BMP15、GDF9基因作為閩東山羊多胎性能候選基因的研究[J]. 家畜生態學報，33（1）：19-22. [Liu Y，Li W Y，Lin S X，Zhang X P，Gao C F，Lin B F，Dong X N. 2012b. Study on BMPR-IB，BMP15 and GDF9 as candidate genes for fecundity in mindong goat[J]. Acta Ecologae Animalis Domastici，33（1）：19-22.]

潘章源，狄冉，劉秋月，儲明星. 2015. 綿羊多羔主效基因BMPR1B的研究進展[J]. 家畜生態學報，36（5）：1-6. [Pan Z Y，Di R，Liu Q Y，Chu M X. 2015. Advances in ovine prolificacy gene BMPR1B[J]. Journal of Domestic Animal Ecology，36（5）：1-6.]

邵勇鋼，米日尼薩汗·庫爾班，劉武軍.2012. 策勒黑羊BMPR-IB基因多態性與產羔數的相關性研究[J]. 中國畜牧獸醫，39（6）：221-223. [Shao Y G，Mirinisahan Kuerban，Liu W J. 2012. Study on the relationship between the polymorphism of BMPR-IB gene and litter size in Xin-jiang Cele Black sheep[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine，39（6）：221-223.]

孫紅霞，田秀娥，王永軍. 2009. BMPR-IB、BMP15和GDF9基因作為灘羊繁殖性狀主效候選基因的研究[J]. 西北農業學報，18（5）：17-21. [Sun H X，Tian X E，Wang Y J. 2009. BMPR-IB，BMP15 and GDF9 as candidate genes for prolific trait in Tan sheep[J]. Acta Agriculturae Borea-li-Occidentalis Sinica，18（5）：17-21.]

王小佳，賀建寧，程明，劉開東，劉積風，柳楠. 2017. BMPR1B基因在細毛羊皮膚毛囊中的表達及與羊毛性狀關系的研究[J]. 中國畜牧雜志，53（1）：33-38. [Wang X J，He J N，Cheng M，Liu K D，Liu J F，Liu N. 2017. Expression of BMPR1B gene in skin and its association with wool traits in fine wool sheep[J]. Chinese Journal of Animal Science，53（1）：33-38.]

姚雅馨. 2017. 綿羊FecB突變高通量分型技術的建立及巴美肉羊多羔候選基因的篩選[D]. 北京：中國農業科學院. [Yao Y X. 2017. Establishment of high throughput genotyping methods for FecB mutation in sheep and scree-ning for candidate genes of prolificacy in Bamei Mutton sheep[D]. Beijing： Chinese Academy of Agricultural Scien-ces.]

鄒輝，崔悅悅，夏琴，程曉芳，吳延軍，張名媛，廖順連，韋英明，蔣欽楊. 2018. 山羊產羔性狀相關基因研究進展[J]. 黑龍江畜牧獸醫，（11）：63-67. [Zou H，Cui Y Y，Xia Q，Cheng X F，Wu Y J，Zhang M Y，Liao S L，Wei Y M，Jiang Q Y. 2018. Research progress on the lambing traits related genes in goat[J]. Heilongjiang Journal of Animal Science and Veterinary Medicine，（11）：63-67.]

Chu M X，Zhao X H，Zhang Y J，Wang J Y，Di R，Cao G L，Feng T，Fang L，Ma Y H，Li K. 2012. Polymorphisms of BMPR-IB gene and their relationship with litter size in goats[J]. Molecular Biology Reports，37（8）：4033-4039.

Dash S，Sarashetti P M，Rajashekar B，Chowdhury R，Mukherjee S. 2018. TGF-β2-induced EMT is dampened by inhibition of autophagy and TNF-α treatment[J]. Oncotarget，9（5）：6433-6449.

Mahdavi M，Nanekarani S，Hosseini S D. 2014. Mutation in BMPR-IB gene is associated with litter size in Iranian Kalehkoohi sheep[J]. Animal Reproduction Science，147（3-4）：93-98.

Miao X，Luo Q，Qin X. 2016. Genome-wide transcriptome analysis in the ovaries of two goats identifies differential-ly expressed genes related to fecundity[J]. Gene，582（1）：69-76.

Rodriguez A，Tripurani S K，Burton J C，Clementi C，Larina I，Pangas S A. 2016. SMAD signaling is required for structural integrity of the female reproductive tract and ute-rine function during early pregnancy in mice[J]. Biology of Reproduction，95（2）：44.

Souza C J，MacDougall C，Campbell B K，Mcneilly A S，Baird D T. 2001. The Booroola（FecB） phenotype is associated with a mutation in the bone morphogenetic receptor type 1 B （BMPR1B） gene[J]. The Journal of Endocrinology，169（2）：R1-R6.

Vacca G M，Dhaouadi A，Rekik M，Carcangiu V，Pazzola M，Dettori M L. 2010. Prolificacy genotypes at BMPR1B，BMP15 and GDF9 genes in North African sheep breeds[J]. Small Ruminant Research，88（1）：67-71.

Wang W M，Liu S J，Li F，Pan X Y，Li C，Zhang X X，Ma Y J，La Y F，Xi R，Li T F. 2015. Polymorphisms of the ovine BMPR-IB，BMP-15 and FSHR and their associations with litter size in two Chinese indigenous sheep breeds[J]. International Journal of Molecular Sciences，16（5）：11385-11397.

（責任編輯 蘭宗寶）