葡萄皮提取物和維生素C配伍對小鼠免疫力的影響

孔令寧 吳雨霏

[摘要] 目的：觀察葡萄皮提取物和維生素C配伍對小鼠免疫力的影響。方法：選用ICR小鼠，進行臟器/體重比值測定、遲發型變態反應、刀豆蛋白 A（Con A）誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗、抗體生成細胞檢測、半數溶血值（HC50）測定、碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗和NK細胞活性測定，研究葡萄皮提取物和維生素C配伍是否可以調節免疫功能。結果：葡萄皮提取物和維生素C配伍能增強小鼠的遲發型變態反應，提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的數量，還能促進NK細胞的活性。但對小鼠體重、脾臟/體重、胸腺/體重、淋巴細胞增殖能力、抗體生成細胞數、半數溶血值、碳廓清功能無影響。結論：葡萄皮提取物和維生素C配伍具有一定的調節小鼠免疫功能的作用。

[關鍵詞] 葡萄皮提取物;維生素C;免疫

葡萄皮中含有豐富的營養成分，如酚類物質、酒石酸、蘋果酸、維生素、葡萄籽油、膳食纖維等。葡萄皮中白藜蘆醇含量比較豐富，屬于酚類物質。白藜蘆醇具有抗腫瘤、降低心血管疾病和糖尿病等醫療保健作用。葡萄皮提取物中還含有豐富的濃縮單寧酸，濃縮單寧酸具有調節免疫力的作用[1-2]。維生素 C（Vitamin C ，Ascorbic Acid）又叫 L-抗壞血酸，是人體必需的微量營養元素之一，它具有

抗氧化、參與合成膠原蛋白、治療和預防壞血病、預防動脈硬化、治療貧血、防癌等多種生理學功能。除此之外，維生素C還能促進機體內抗體的形成，提高白細胞的吞噬能力和對疾病的抵抗力以及對寒冷的耐受力，從而增強機體的免疫功能[3-4]。本實驗觀察葡萄皮提取物和維生素C混合粉對小鼠免疫的影響。

1 材料

1.1 實驗藥物

葡萄皮提取物維生素C復合物由實驗室自制。葡萄皮提取物（白黎蘆醇含量4.8%）比維生素C為12.5：1的比例混合制成混合粉末。

1.2 實驗動物

SPF級ICR昆明小鼠，體重（18-22）g，由北京大學醫學部實驗動物中心提供。

1.5 實驗儀器及試劑

二氧化碳培養箱、電子分析天平、臺式離心機、分光光度計、酶標儀、游標卡尺、細胞計數板、24孔和96孔細胞培養板、96孔U型細胞培養板等。RPMI1640培養液、小牛血清、、綿陽紅細胞（SRBC）、雞紅細胞、刀豆蛋白A（ConA）、Hank’s溶液、印度墨汁碳酸鈉等。

2 方法

參考《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003年版）中增強免疫力功能檢驗方法，分別進行遲發型變態反應（DTH）、ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化、血清溶血素測定實驗、抗體生成細胞檢測實驗、小鼠碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、NK細胞活性測定等項實驗，并依照該檢驗方法的判定標準，判定實驗結果。

2.1實驗分組 共分為四組，每組共60只健康雄性小鼠，再分為4個小組，每小組15只。一組進行遲發型變態反應、臟器/體重比值測定、半數溶血值（HC50）的測定和抗體生成細胞檢測;二組進行碳廓清實驗;三組進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗;四組進行實驗ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗和NK細胞活性測定。

2.2 劑量選擇與配制 成人推薦攝入量為1.0 g/60kg·BW，以日攝入量的5、10和30倍設置灌胃劑量，即0.083、0.167和0.50 g/kg·BW，各劑量組以純化水稀釋。以純化水為陰性對照組，各組小鼠灌胃量均為0.2ml/10g，連續灌胃30天后，測各組免疫指標。

2.3數據統計 采用SPSS11.5統計軟件處理數據，實驗結果以均數±標準差（ ）表示。多組比較采用單因素方差分析，方差齊時，各組間兩兩比較用LSD法;方差不齊時，各組間兩兩比較采用Tamhane法。P <0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

3.1 葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠體重及臟器/體重比值的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，四組實驗各劑量組小鼠體重與陰性對照組比較，差異無顯著差異（P>0.05），即葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠體重無影響;各劑量組胸腺/體重比值和脾臟/體重比值與陰性對照組比較，差異無顯著性（P>0.05），即葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠臟器/體重比值無明顯影響。

3.2 葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠細胞免疫功能的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，中、高劑量組足趾腫脹度與陰性對照組比較，差異有顯著性（P<0.05）;各劑量組淋巴細胞的增殖能力與陰性對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）

3.3 葡萄皮提取物維生素C混合粉對體液免疫的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，各劑量組抗體生成細胞數、半數溶血值與陰性對照組比較，差異均無顯著性（P>0.05）;

3.4葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，各劑量組碳廓清功能與陰性對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）;不同劑量組小鼠巨噬細胞吞噬噬雞紅細胞的吞噬指數與陰性對照組比較，差異有顯著性（P<0.05）。

3.5 葡萄皮提取物維生素C混合粉對小鼠NK細胞活性的影響

灌胃給予不同劑量的葡萄皮提取物維生素C混合粉30天，不同劑量組NK細胞活性與陰性對照組比較，差異有顯著性（P<0.05），結果表明葡萄皮提取物維生素C混合粉可激活小鼠NK細胞活性。

4 討論

機體的免疫反應可分為非特異性免疫反應和特異性免疫反應兩種，如果非特異性免疫反應不能抵抗病原體的入侵， 將會激發特異性免疫反應。吞噬細胞、T 淋巴細胞、B 淋巴細胞對免疫反應的感應階段所起的作用依次是對抗原的處理、呈遞和識別 ，其中T 淋巴細胞介導細胞免疫，B淋巴細胞介導體液免疫。

本實驗結果提示，葡萄皮提取物維生素C混合粉能增強小鼠的遲發型變態反應，提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的數量，還能促進NK細胞的活性。表明葡萄皮提取物維生素C配伍具有一定的調節小鼠免疫功能的作用。

參考文獻

1.王霄倩，王恒振，劉麗娜等.葡萄皮渣的營養價值及綜合利用.中國農學通報. 2017，33（27）：147-151

2.王虹玲，吳優，于子簫等.釀酒葡萄皮渣中白藜蘆醇的提取及抗氧化、抗腫瘤活性研究.中國釀造.2018年，37（7）：112-116

3.孫秀川.維生素 C 對機體免疫功能的影響.內蒙古醫學雜志.2014年，46（2）：174-176

4.維生素C對小鼠免疫功能的影響.右江名族醫學院學報.1990年3月，12（1）：1-3