不同濃度OVA溶液對小鼠OVA致敏性支氣管哮喘模型的影響

楊素明 張帷政 周旸哲 肖圣舟 劉欣佳

摘要：目的使用滴鼻的激發方式選擇不同濃度卵清蛋白（OVA）對小鼠OVA致敏性支氣管哮喘模型的影響。方法雌性昆明小鼠24只隨機分為4組，分別為空白對照組、實驗A組（生理鹽水）、實驗B組（50μg/mlOVA溶液）、實驗C組（100μg/ml OVA溶液）;制備OVA致敏性支氣管哮喘模型;模型制備的第21天到第27天用滴鼻法讓實驗組吸入不同的藥物，對照組正常喂養。第28天顯微觀察肺泡灌洗液，進行炎癥細胞分類細胞計數;制備肺組織病理切片，觀察支氣管的炎癥改變。結果小鼠哮喘激發后結果顯示，OVA溶液能夠激發OVA致敏性支氣管哮喘。炎癥細胞分類計數結果顯示，實驗B組及C組的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞數目顯著高于對照組;實驗B組各類炎癥細胞數目最高。切片結果顯示，實驗組小鼠肺組織皆有炎癥細胞侵潤，實驗B組及C組有肺泡壁結構損傷，且實驗B組侵潤及損傷最明顯。結論OVA溶液能夠激發OVA致敏性支氣管哮喘，劑量為50μg/ml時效果最佳。

關鍵詞：卵清蛋白;滴鼻;支氣管哮喘

支氣管哮喘（BA）簡稱哮喘，是由嗜酸性粒細胞（LOS）、肥大細胞（MC）、中性粒細胞（N）、T淋巴細胞等多種炎性細胞及其細胞因子參與的，以氣道高反應性等為主要特征的慢性氣道炎性反應[1]。不同的激發方式和激發時間使建立小鼠哮喘模型的方法存在較大差異，本實驗采用滴鼻法[2]，研討不同濃度的激發溶液對小鼠哮喘激發的差異，為研究支氣管哮喘動物模型提供依據。

一、材料與方法

（一）實驗動物及分組

6～8周雌性昆明小鼠24只，中南大學實驗動物中心提供，隨機均數分配為空白對照組、實驗A組（生理鹽水）、實驗B組（50vg/ml0VA溶液）、實驗C組（100wg/mlOVA溶液）。

（二）實驗試劑及儀器

氫氧化鋁[Al（OH）]凝膠，OVA購自美國Sigma公司;日本OLYMPUS公司BX51T-32P01型顯微鏡，德國Slee公司MEV型號冰凍切片機。

（三）實驗方法

1.模型的制備：小鼠分別于第0、7、14天腹腔注射含100μgOVA和0.1mlAI（OH）凝膠的混懸液0.2ml。

2.哮喘激發：在第21天到第27天使用乙醚瞬時麻醉小鼠，通過滴鼻法使不同組的小鼠自然吸入不同的溶液6天（1次/天），對照組正常喂養。

3.炎癥細胞分類計數使用乙醚瞬時麻醉小鼠，結扎全肺，用冷生理鹽水行支氣管肺泡灌洗，0.8ml/次，共3次，回收灌洗液，2000r/min離心5min，細胞沉淀用lml生理鹽水重懸，制備涂片，以蘇木精一伊紅（HE）染色，顯微鏡下進行細胞計數[2]。

4.HE染色組織切片：支氣管肺泡灌洗后，取小鼠全肺組織經10%甲醛固定24h后，常規石蠟包埋切片HE染色，光鏡下觀察各組切片上支氣管的炎癥改變[2]。

5.統計學分析：所有數據用x±s表示，采用SPSS 22.0進行統計分析。

二、結果

（一）哮喘激發后表現

激發5-6天后實驗B組及C組出現尾巴紫紺、呼吸急促、抽搐、倒地并伴有明顯腹式呼吸行為，其中B組小鼠過敏反應出現時間更早且程度更嚴重。

（二）炎癥細胞分類計數結果

實驗B組及C組的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞數目顯著高于對照組;實驗B組炎癥粒細胞及嗜酸性粒細胞數目最高。（見表一）

（三）肺組織病理切片結果：對照組小鼠肺組織結構正常;實驗組小鼠肺組織皆有炎癥細胞侵潤，實驗B組及C組有肺泡壁結構損傷，且實驗B組侵潤及損傷最明顯。

三、討論

小鼠哮喘激發后表現結果表示，OVA溶液能夠激發OVA致敏性支氣管哮喘。炎癥細胞分類計數結果顯示，實驗B組及C組的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞數目顯著高于對照組;實驗B組炎癥粒細胞及嗜酸性粒細胞數目最高。切片結果顯示，實驗組小鼠肺組織皆有炎癥細胞侵潤，實驗B組及C組有肺泡壁結構損傷，且實驗B組侵潤及損傷最明顯。

綜上所述，OVA溶液能夠激發OVA致敏性支氣管哮喘，劑量為50μg/ml時效果最佳。

參考文獻：

[1]尹靜波.炎性細胞因子在支氣管哮喘發病機制中的作用[J].國際檢驗醫學雜志，2011（10）：1087-1089.

[2]程勝，陳輝龍，王正云，王愛利，謝敏，曹勇，謝俊剛，熊維寧，徐永健.滴鼻和霧化兩種不同激發方式對小鼠支氣管哮喘模型氣道炎癥的影響[J].華中科技大學學報（醫學版），2014，43（02）：121-124.

基金項目：長沙醫學院2017年大學生研究學習和創新性實驗計劃項目：長醫教[2017]18號-315。