珍貴紅木樹種檀香紫檀組培快繁體系的建立

徐呈祥　馬艷萍　彭碧琳　潘建芳　廖苑蓓

摘要：【目的】探究檀香紫檀植株高效、穩定的離體再生技術，為其苗木的規模化生產提供參考依據。【方法】以檀香紫檀種子為外植體，以MS培養基為基本培養基，添加不同濃度瓊脂、蔗糖、IBA、IAA和6-BA進行無菌播種、誘導萌芽、增殖和生根培養，建立檀香紫檀組培快繁體系。【結果】檀香紫檀種子以0.1% HgCl2溶液消毒8 min的萌發率最高，為31.7%;微莖段芽萌發、生長及分化效果隨培養基中IBA濃度提高而增強，當IBA濃度為0.3 mg/L時微莖段腋芽誘導率最高，為94.5%，且生長狀況最佳，但與添加0.2 mg/L IBA的處理無顯著差異（P>0.05）;IBA促進微莖段愈傷組織發育和增殖的作用強于6-BA，二者配合使用的協同作用更明顯，以培養基添加0.3 mg/L IBA和3.0 mg/L 6-BA對愈傷組織發育和芽梢增殖的效果最佳，增殖系數為2.8;接種在含1.0 mg/L IBA、0.25 mg/L IAA、0.05 mg/L 6-BA的生根培養基，微莖段生根率最高，為65.2%，且苗木生長發育最佳。【結論】以種子為外植體，通過無菌播種、微莖段增殖和生根培養可獲得大量優質組培苗，是實現檀香紫檀工廠化育苗的理想途徑。

關鍵詞： 紅木樹種;檀香紫檀;無菌播種;組培繁殖

中圖分類號： S722.8? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）12-2741-08

Tissue culture and rapid propagation of red sandalwood plantlets

XU Cheng-xian， MA Yan-ping， PENG Bi-lin， PAN Jian-fang， LIAO Yuan-bei

（College of Life Sciences， Zhaoqing University， Zhaoqing，Guangdong? 526061， China）

Abstract：【Objective】Exploring the efficient and stable regeneration technology of plantlets in vitro of red sandalwood（Pterocarpus santalinus） to provide reference for the large-scale production of the seedlings. 【Method】Red sandalwood seeds were used as explants，MS medium was used as the basic medium，and different concentrations of agar，sucrose，IBA，IAA and 6-BA were added for aseptic sowing，germination，proliferation and rooting culture，a tissue culture rapid propagation system of red sandalwood was established. 【Result】The seed germination rate was the highest after disinfection in 0.1% HgCl2 solution for 8 min，and the induction rate was 31.7%; the bud germination，growth and differentiation of sterile micro-stem increased with the increase of IBA concentration of the medium. When the concentration of IBA was 0.3 mg/L，the axillary bud induction rate of micro-stem was the highest（94.5%），and the growth status was the best，however，it was not significantly different from the medium of adding 0.2 mg/L IBA（P>0.05）. The effect of 6-BA on the development and proliferation of micro-stem callus was stronger than that of 6-BA，but the synergy effect of the two was more effective，the callus growth and proliferation effect was the best when added 0.3 mg/L IBA and 3.0 mg/L 6-BA，and the proliferation coefficient was 2.8. When inoculated in rooting medium containing 1.0 mg/L IBA，0.25 mg/L IAA and 0.05 mg/L 6-BA，the rooting rate of the micro-stem segment was the highest，which was 65.2%，and the young plant growth and development was the best. 【Conclusion】With seeds as explants， large-scale tissue culture seedlings can be obtained through sterile sowing， micro-stem proliferation and rooting culture. This is an ideal way to achieve industrial culture of seedlings of red sandalwood.

Key words： rosewood species; red sandalwood; aseptic sowing; propagation by tissue culture

0 引言

【研究意義】檀香紫檀（Pterocarpus santalinus）俗稱小葉紫檀，其心材是唯一被稱為“紫檀”的木材（楊家駒，2000），不僅是最珍貴的紅木，也是國際上公認的具有重要價值的藥材（姜笑梅等，2010）。由于檀香紫檀很早就被列入《瀕危野生動植物種國際貿易公約》，國際上不僅對其木材交易嚴格限制，對其種子的管控也十分嚴格（翟東群等，2014;黎云昆，2016;孟倩等，2017）。檀香紫檀在我國沒有自然分布，主要為20世紀50年代通過民間途徑引入，生長表現良好，但長期未受重視（曾杰等，2000;馬艷萍等，2015），目前僅在海南島有少量栽培，種子產量很低，場圃發芽率更低，苗木非常稀缺（陳青度等，2004;馬艷萍，2013;Xu et al.，2016）。近年來的研究表明，檀香紫檀扦插成活率很低，屬扦插難生根樹種，其無性繁殖技術研究中的最大突破是嫁接育苗（徐呈祥等，2017;Huang et al.，2019），并發現以大果紫檀（P. macrocarpus）為砧木嫁接繁育可促進檀香紫檀主干髓心及周圍組織及早心材化（Xu et al.，2018），但嫁接繁殖周期較長，效率不高。植物組織培養育苗繁殖周期短、效率高，且不受季節和氣候限制，可保持親本優良性狀，生長整齊標準（王鑫和孔祥生，2014;Efferth，2019）。因此，開展檀香紫檀苗木組織培養研究，對促進我國熱帶、南亞熱帶地區珍貴紅木樹種引種栽培具有重要意義。【前人研究進展】針對扦插難生根樹種的組培快繁，目前已有不少研究報道。裘珍飛等（2013）以米老排（Mytilaria laosensis）當年生枝條莖段為外植體，建立了以芽繁芽的組織培養快速繁殖體系，月增殖率2.43，生根率在81.8%以上。陳怡佳等（2015）以紅葉紫薇（Lagerstroemia indica ‘PinkVelour’）優株當年生半木質化枝條為外植體，采用叢芽發生途徑建立其組培快繁技術體系，腋芽誘導率88%，增殖系數5.21，生根率100%。韓云花等（2015）以楸樹（Catalpa bunge）一年生枝條水培萌發芽為外植體建立其優良無性系組培快繁技術體系，初代增殖系數為4.78，繼代增殖系數為7.97，生根率96.69%。葉小玲等（2017）以大島櫻（Cerasus speciosa）優良單株‘小喬’櫻的半木質化嫩枝為外植體，通過基本培養基設置、不同激素成分及濃度水平配比優化，建立了高效、穩定的離體植株再生技術。田奧磊等（2017）以武夷巖茶大紅袍（Camellia sinensis ‘Dahongpao’）的無菌種胚為外植體，通過對其胚的誘導、繼代增殖及生根誘導培養的篩選，建立了完整的組織培養體系，誘導率100%，生根率在80%以上。孫紅英等（2019）以日本紅楓‘青龍’（Acer palmatum ‘seiryu’）木質化枝條為外植體，采用叢生芽誘導途徑建立其組培快繁體系，啟動率96.1%，增殖系數4.8，生根率96.7%。可見，不同樹種或器官的外植體材料組培快繁技術差異明顯。【本研究切入點】目前未見檀香紫檀苗木組培快繁的相關研究報道。【擬解決的關鍵問題】以檀香紫檀種子為外植體，通過檀香紫檀無菌播種、無菌苗初代培養、繼代培養和生根培養，建立以檀香紫檀種子為外植體的組培快繁體系，為其苗木的規模化生產提供參考依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

檀香紫檀翅莢果采自中國熱帶農業科學院海南熱帶植物園，貯藏于低溫種子庫（7 ℃）中，在采收后8個月內使用修枝剪等工具從中逐粒取出種子，選擇比較飽滿、色澤光亮的種子進行浸種、消毒和接種。瓊脂、蔗糖、IBA、IAA和6-BA等購自中國醫藥集團上海化學試劑公司。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 外植體消毒和培養 精選的種子在室溫下以自來水浸泡24 h，瀝干，用5%（v/v）洗潔精溶液浸泡10 min后用自來水沖洗3次;在無菌操作臺上用75%酒精浸泡5 min，無菌水沖洗3次，以0.1% HgCl2溶液分別浸泡5、8、10、12和15 min，無菌水沖洗5次。培養基為MS培養基，1粒/瓶，每處理接種60粒，隨機分成2組。MS培養基中添加6.0 g/L瓊脂、15.0 g/L 蔗糖，pH 5.8。培養基在121 ℃、130 kP下滅菌15 min，過夜后接種。培養室溫度設為（26±2）℃（下同），播種后前10 d室內不開燈，此后設光照強度為1000 lx，光周期為12 h光照/12 h黑暗;40 d后轉接培養。以MS培養基中添加8.0 g/L瓊脂、15.0 g/L蔗糖，種子在0.1% HgCl2溶液中浸泡8 min的處理為對照（CK1）。

1. 2. 2 誘導培養 接種40 d時將真葉以上的莖段切成帶1節（長1.5～2.0 cm）的微莖段分別接種于MS+30.0 g/L蔗糖+8.0 g/L瓊脂+0.1～0.3 mg/L IBA培養基上，以促進微莖段腋芽萌發，以不添加IBA的處理為對照（CK2）。培養室光照強度1000 lx，光周期為14 h光照/10 h黑暗。每處理接種40瓶以上，隨機分成2組分別觀察統計，40 d后轉接增殖。

1. 2. 3 增殖培養 將誘導培養的莖段切成帶1節（長1.5～2.0 cm）的莖段接種于設計的培養基上。基本培養基及蔗糖、瓊脂濃度同誘導培養基。添加的生長物質為IBA（濃度分別為0、0.1、0.2和0.3 mg/L）和6-BA（濃度分別為0、1.0、2.0和3.0 mg/L），以不添加IBA、6-BA濃度為3.0 mg/L的增殖培養基為對照（CK3），共設10種處理。每種培養基接種40瓶以上，隨機分成2組。培養室光照強度2000 lx，光周期為14 h光照/10 h黑暗。培養至40 d時觀察測量增殖效果，包括每個外植體增殖芽的數量、高度及愈傷組織的橫徑和縱徑。

1. 2. 4 生根培養 將上述增殖培養的繼代苗轉接至6種培養基進行生根培養。基本培養基為1/2MS，蔗糖和瓊脂濃度分別為15.0和8.0 g/L，IBA濃度為1.0 mg/L，IAA濃度分別設0、0.25和0.50 mg/L，6-BA濃度分別設0、0.05和0.25 mg/L，以不添加IAA和6-BA的處理為對照（CK4）。插入培養基的外植體部位無腋芽。培養室光照強度2000 lx，光周期為14 h光照/10 h黑暗。每處理接種總數不少于40瓶，培養40 d計算生根率，統計長度>0.5 cm根數，測量芽梢高度。

1. 2. 5 煉苗移栽 將生根培養40 d的125株組培苗從無菌培養室轉移到塑料溫室，在覆蓋遮陽網（遮光率50%）的空間中打開瓶蓋煉苗，3 d后從培養瓶中取出組培苗，以自來水洗凈根部所沾培養基，在0.2%多菌靈溶液中浸根1 min，然后移栽到由50%園土∶40%草炭∶10%珍珠巖（v∶v∶v）組成的基質中培育，20 d后揭去遮陽網，60 d后調查統計成活率。

1. 3 測定項目及方法

胚根突破種皮長度達0.5 cm的種子為萌發種子。以接種后40 d時培養瓶內萌發種子占所播種子總粒數的百分數表示種子萌發率。統計受污染且未萌發種子及未受污染且未萌發種子的數量，計算各自所占的百分數。接種到誘導培養基培養40 d，統計芽的萌發和生長情況，計算誘導率，誘導率（%）=萌發外植體數/接種外植體數×100。增殖培養至40 d時統計不同培養基對增殖和生長的影響，計算增殖系數，增殖系數=增殖芽總數/接種芽總數。外植體增殖芽的高度及愈傷組織塊直徑用數顯游標卡尺進行測量。生根培養40 d時觀察統計生根情況，生根率（%）=生根外植體總數/接種外植體總數×100，并統計根長度>0.5 cm的根數。移栽60 d時調查統計移栽成活率，移栽成活率（%）=移栽成活株數/移栽生根苗總株數×100。

1. 4 統計分析

使用Excel 2013進行試驗數據統計整理，用Duncan’s新復極差法進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2. 1 0.1% HgCl2消毒時間對種子萌發的影響

由表1可知，檀香紫檀種子培養20 d左右可發芽，萌發率最高為31.7%;以0.1% HgCl2溶液消毒的時間由5 min延長至15 min，檀香紫檀種子萌發時間持續延后，表明0.1% HgCl2溶液對種子萌發有抑制或損傷作用。其中，消毒時間≤10 min的3個處理間、消毒時間≥12 min的2個處理間的萌發時間差異不顯著（P>0.05，下同），但兩者間差異顯著（P<0.05，下同）;種子萌發率隨HgCl2消毒時間的延長持續降低，其中消毒12 min較消毒5和8 min的種子發芽率顯著降低36.9%;隨著消毒時間的延長，污染種子的萌發率持續降低，但未污染也未萌發的種子萌發率持續升高。綜合評判得出檀香紫檀種子以0.1% HgCl2溶液消毒的最佳時間為8 min。經解剖發現，既未污染也未萌發的種子普遍發育較差，種子看似飽滿實則胚敗育或發育不良。此外，其他條件相同，瓊脂濃度為6.0 g/L處理的種子萌發率顯著高于瓊脂濃度為8.0 g/L處理。圖1-A和圖1-B分別為檀香紫檀初代培養中萌發的種子和長成的無菌苗。

2. 2 不同IBA濃度培養基組成對芽誘導培養的影響

由表2和圖1-C可知，接種在MS培養基上的檀香紫檀無菌微莖段萌發率在50.0%以上，有愈傷組織形成，能分化出新芽，但葉色淺，生長勢弱;培養基中添加IBA后，對其芽誘導培養的效果顯著改善，且隨IBA濃度的增大其效果趨向更優。較不加IBA的MS培養基（CK2），含0.1 mg/L IBA的MS培養基檀香紫檀無菌微莖段萌發率、至培養40 d時誘導分化芽梢數和分化芽梢高度依次分別顯著提高39.7%、69.2%和38.1%，且生長狀況明顯得到改善;當MS培養基中IBA濃度提高至0.2 mg/L，檀香紫檀無菌微莖段萌發率、至培養40 d時誘導分化芽數和分化芽高度較CK2分別顯著提高65.5%、161.5%和61.9%，生長狀況進一步得到改善;MS培養基中的IBA濃度提高至0.3 mg/L，3項指標比CK2分別顯著提高69.05%、169.2%和66.7%，但與添加0.2 mg/L IBA無顯著差異。可見，MS培養基中添加0.2 mg/L IBA對檀香紫檀無菌微莖段誘導培養比較適宜。

2. 3 培養基中IBA和6-BA濃度及其配比對芽增殖培養的影響

由圖1-D和表3可知，經誘導培養后再進行增殖培養，檀香紫檀微莖段的分化再生能力明顯增強，接種5 d后即可觀察到愈傷組織開始膨大，20 d左右多數分化出的芽可萌發，但增殖培養基中IBA和6-BA濃度及其配比顯著影響愈傷組織發育和芽的增殖，且2種生長激素的作用效果存在協同效應。無論對愈傷組織塊大小還是芽增殖系數和芽梢高度，IBA和6-BA對微莖段增殖的促進作用都隨其在培養基中濃度的增大而增強，但IBA促進增殖的作用明顯強于6-BA。

由表3還可知，檀香紫檀微莖段基部形成的愈傷組織縱徑普遍大于橫徑，且縱徑對IBA和6-BA濃度及配比的響應更敏感。在10個處理中，以接種在MS+8.0 g/L瓊脂+30.0 g/L蔗糖+3.0 mg/L 6-BA培養基（CK3）上的愈傷組織最小，添加0.1 mg/L IBA后愈傷組織塊的縱徑、橫徑及平均值較CK3分別增加71.4%、127.3%和104.8%，增幅顯著;培養基的IBA濃度增至0.2 mg/L，6-BA濃度設計為0、1.0、2.0和3.0 mg/L，愈傷組織塊的平均直徑分別較CK3增大1.43、2.48、3.10和3.62倍，且5個處理間差異均達顯著水平;培養基的IBA濃度增至0.3 mg/L，6-BA濃度設計為0、1.0、2.0和3.0 mg/L，愈傷組織塊平均直徑分別比CK3增大2.48、3.19、3.90和5.00倍，均與CK3達顯著差異水平，但6-BA濃度為2.0和3.0 mg/L的2個處理間差異不顯著。因而，參試的10個培養基配方，以接種在MS+8.0 g/L瓊脂+30.0 g/L蔗糖+0.3 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA培養基上形成的愈傷組織最大，培養40 d的橫徑和縱徑分別為9.8和11.3 mm，平均為10.5 mm，但與接種在MS+8.0 g/L瓊脂+30.0 g/L蔗糖+0.3 mg/L IBA+2.0 mg/L 6-BA培養基上的差異不顯著。

綜上所述，增殖培養基中IBA和6-BA濃度及配比對檀香紫檀無菌微莖段芽增殖系數和芽梢高度的影響與其對愈傷組織塊大小的影響規律基本一致，只是不同處理間的差異幅度相對較小，不如對愈傷組織塊大小的影響明顯，2種生長激素的協同作用有所減弱，表現為：（1）增殖培養基中添加0.1 mg/L IBA和3.0 mg/L 6-BA與只添加3.0 mg/L 6-BA相比，增殖系數和芽梢高度均無顯著差異;（2）增殖培養基中IBA濃度增至0.2 mg/L、6-BA濃度分別為0和1.0 mg/L時，均促進無菌微莖段的芽增殖系數和芽梢高度，但2個處理間無顯著差異;（3）增殖培養基中IBA濃度≥0.2 mg/L、6-BA濃度≥2.0 mg/L的4種處理間增殖系數和芽梢高度均無顯著差異，培養40 d的增殖芽數最小為2.5、最大為2.8，芽梢高度最低為3.9 cm、最高為4.5 cm，但以絕對數值評價，仍以接種在MS+8.0 g/L瓊脂+30.0 g/L蔗糖+0.3 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA培養基上的增殖效果最佳（圖1-D），比接種在不添加IBA、6-BA濃度為3.0 mg/L的增殖培養基分別增加154.5%和87.5%（表3）。

2. 4 培養基組成對微莖段生根和生長的影響

由表4可知，將檀香紫檀增殖培養的無菌微莖段轉接至生根培養基培養40 d，當基本培養基為1/2MS、瓊脂和蔗糖濃度分別為6.0和15.0 g/L，培養基中IBA、IAA、6-BA濃度及其配比對生根誘導效果和生根苗生長發育有明顯影響（圖1-E）。（1）培養基中IAA濃度為0 mg/L，與不添加IBA（CK4）相比，分別添加0.05和0.25 mg/L IBA的微莖段生根率、根數和苗高隨IBA濃度增大而減小，減小幅度依次分別為3.4%、8.7%、4.7%和20.8%、47.8%、25.6%，表明生根培養基中IBA濃度為1.0 mg/L時添加6-BA會抑制檀香紫檀微莖段生根，6-BA濃度達0.25 mg/L時顯著抑制生根;（2）生根培養基中IBA濃度保持1.0 mg/L，添加0.05和0.25 mg/L 6-BA的同時添加0.25 mg/L IAA，上述6-BA對檀香紫檀微莖段生根的抑制作用得到一定程度的緩解，接種在較高濃度（0.25 mg/L）6-BA培養基上的微莖段生根率、根數及苗高分別增加11.8%、25.0%和9.4%，接種在較低濃度（0.05 mg/L）6-BA培養基上的微莖段的3項指標值分別增加29.1%、38.1%和22.0%;（3）與CK4相比，微莖段生根誘導（即1.0 mg/L IBA+0.50 mg/L IAA處理）效果顯著提高、生根苗生長發育狀況改善，生根率、根數和苗高分別增大15.7%、13.0%和4.7%，效果顯著高于上述生長物質組合1.0 mg/L IBA+0.25 mg/L IAA+0.25 mg/L 6-BA，但遜于生長物質組合1.0 mg/L IBA+0.25 mg/L IAA+0.05 mg/L 6-BA，差異不顯著。可見，培養基中IBA、IAA、6-BA濃度及其組合是檀香紫檀無菌微莖段生根誘導效果的關鍵，優良的誘導效果需要3種生長物質共同作用。

2. 5 煉苗與移栽

在生根培養基上培養40 d的檀香紫檀組培苗，當其苗高為4～5 cm、長度大于0.5 cm的根系每株達2～3條時，選擇發育較好的125株轉移到溫室中在遮光條件下進行煉苗馴化，3 d后移栽到50%園土+40%草炭+10%珍珠巖組成的基質中培育，20 d后可長出新葉片，60 d后調查統計發現其成活96株，成活率為76.8%，1年后盆栽苗生長情況如圖1-F所示。

3 討論

外植體選擇是植物組織培養的首要環節。樹木是木本植物，組織培養難度較大，外植體選擇更為重要。莖段是組織培養中最易獲得的原材料，也是研究者通常最先想到的外植體。在扦插難生根樹種的組培快繁中，利用半木質化枝條或休眠枝水培后長出的新梢作為外植體行之有效。但由于內生菌的影響，并非所有樹種均適宜選用莖段作為組培快繁的外植體，有些樹種即使獲得“無菌”植株，增殖培養中的污染現象仍然比較嚴重，究其原因是難以克服植株的內生菌（王志偉等，2015;葉小玲等，2017）。楊亞萍等（2015）在茶樹（Camellia sinensis）微莖段組培快繁中發現使用發根農桿菌抑菌劑雖然有效抑制農桿菌，但顯著降低叢生芽增殖率，且叢生芽畸形率明顯增加。本課題組前期選取檀香紫檀水培枝的莖段作為外植體，污染率非常高，為此本研究改以種子為外植體，污染率明顯降低，且對HgCl2的耐受力強于莖段，但實施過程中應注意檀香紫檀翅莢果的貯藏溫度，保證所用種子質量良好。

本研究結果表明，在檀香紫檀種子萌發的最佳培養基（MS+6.0 g/L瓊脂+15.0 g/L蔗糖）中未添加激素且蔗糖濃度設計在較低水平的前提下，無菌苗生長勢良好，可能與種子萌發后子葉發揮了重要功能和作用有關，與付姝穎等（2015）對猴耳環（Pithecellobium clypearia）、田奧磊等（2017）對茶樹、張建瑛等（2019）對胡桃楸（Juglans mandshurica）的研究結果相似，但在種子萌發后的無菌微莖段腋芽萌發誘導培養中必須添加IBA，且其濃度不宜低于0.2 mg/L，否則外植體誘導分化率低，培養20 d后開始出現生長明顯減緩、葉片脫落甚至干枯死亡的現象。檀香紫檀組培快繁中的這種現象在木本植物組培快繁中普遍存在，通常在誘導培養基中添加適當種類的生長激素（6-BA）即可解決（陳怡佳等，2015;趙富群等，2017）。本課題組前期曾多次使用6-BA進行試驗，但誘導效果較裘珍飛等（2013）、田奧磊等（2017）的研究結果差，也低于改用IBA后外植體分化率最高可達94.5%且差異十分顯著，在愈傷組織誘導和增殖培養階段也獲得相似的促進效果。IBA和6-BA屬于不同大類的生長激素，但均具有促進細胞分化和分裂、促進維管束系統發育的功能。低濃度IBA誘導微莖段腋芽萌發和分化是否具有廣泛性仍需進一步驗證。

組培苗能否不斷增殖是組培快繁成功的關鍵，因此生長激素配比非常重要（Seran et al.，2006;束曉春等，2019）。樹木組培快繁中主要應用細胞分裂素和生長素調節優化不定芽增殖培養效果，所使用的兩類生長激素及其組合很多，但具體效果因植物不同而異。趙富群等（2017）以毛棉杜鵑（Rhododendron moulmainense）種子為外植體，采用叢生芽發生方式建立起組培快繁體系，其最佳增殖培養基為MS+0.02 mg/L IBA +1.0 mg/L ZT，培養60 d，增殖系數4.50;束曉春等（2019）以南京椴（Tilia mique-liana）無菌苗帶腋芽莖段為外植體，在MS+0.5 mg/L 6-BA+0.01 mg/L IBA的培養基上其繁殖系數達7.53;張赫巖等（2019）以重瓣榆葉梅（Amygdalus triloba f. Multiplex）帶腋芽的莖段為外植體，最佳增殖培養基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L KT，增殖倍數為4.4。本研究中以MS+8.0 g/L瓊脂+30.0 g/L蔗糖+0.3 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA為培養基進行檀香紫檀無菌苗增殖培養的效果最優，但培養40 d時增殖系數僅2.8，與裘珍飛等（2013）對米老排的研究結果相似，可進一步優化。

生根難是木本植物組織培養中最常遇到的另一難題，尤其是扦插難生根樹種。迄今，國內外關于檀香紫檀扦插繁育的研究鮮見報道，其主要原因是枝條扦插成效不佳，難以規模化發展（Vijayalakshmi and Renganayaki，2017;陳仁利和曾杰，2018）。本研究以檀香紫檀種子為外植體開展組培快繁研究，其增殖苗微莖段轉接至最佳生根培養基（1/2MS+6.0 g/L瓊脂+15.0 g/L蔗糖+1.0 mg/L IBA+0.25 mg/L IAA+0.05 mg/L 6-BA）培養10 d左右即有新根發生，25 d左右可生長出長度在1.0 cm以上的側根2～3條，生根率為65.2%，雖遠不如一些樹種可達100%（葉小玲等，2017），但對于紅木樹種而言已屬良好，說明組織脫分化狀況是其生根誘導的基礎，激素類型與濃度配比則是其生根誘導的關鍵，適宜水平IBA、IAA和6-BA的互作有利其生根誘導。因此，可進一步完善其再生體系，深入探究其生根調控機理。

4 結論

檀香紫檀種子以0.1% HgCl2溶液消毒8 min的萌發率最高;IBA對微莖段腋芽萌發、生長及分化的促進作用顯著強于6-BA，IBA與6-BA配合使用具顯著的協同作用;以培養基添加0.3 mg/L IBA和3.0 mg/L 6-BA對愈傷組織發育和芽增殖的效果最佳;微莖段在含1.0 mg/L IBA、0.25 mg/L IAA、0.05 mg/L 6-BA的生根培養基中生根率最高、生長發育最佳。因此，以種子為外植體，通過無菌播種、微莖段增殖和生根培養可獲得大量優質組培苗，是實現檀香紫檀工廠化育苗的理想途徑。

參考文獻：

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（責任編輯 鄧慧靈）