王老吉、香薷散對熱應(yīng)激大鼠HSP70、皮質(zhì)醇和抗氧化功能的影響

李樺 屈倩 劉翠 郭世寧 石達(dá)友

摘要：Wistar雄性大鼠80只，隨機分成4組，每組20只，分為王老吉組、香薷散組、熱應(yīng)激陽性對照組（簡稱熱應(yīng)激組）和適溫組，分別給2中藥試驗組大鼠按7 mg/kg·BW灌服中藥復(fù)方煎液，試驗期7d。在熱應(yīng)激后3h、1d、3d、7d時檢測血清熱休克蛋白（ HSP70）及皮質(zhì)醇（Cor）水平和抗氧化功能。結(jié)果顯示，王老吉和香薷散煎液均能抑制大鼠熱應(yīng)激下血清HSP70和Cor水平升高，并提高機體抗氧化功能，降低丙二醛（MDA）的生成。

關(guān)鍵詞：王老吉;香薷散;試驗動物;熱應(yīng)激

中圖分類號：R285

文獻標(biāo)識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.17.001

0引言

在熱應(yīng)激影響下動物機體會產(chǎn)生一系列的損傷，王老吉能改善應(yīng)激下小鼠免疫機能，提高抗氧化能力;研究還證實香薷中的揮發(fā)油類、黃酮類、香豆素類等多種活性成分具有抗病原微生物、消炎、增強免疫等藥理作用。試驗主要觀察王老吉和香薷散分別用于急性熱應(yīng)激的試驗動物大鼠，并通過測定血清皮質(zhì)醇及HSP70濃度、抗氧化指標(biāo)和小腸段病理切片，觀察王老吉和香薷散對熱應(yīng)激大鼠相關(guān)功能的影響，為中藥防治熱應(yīng)激應(yīng)用研究工作提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1試驗動物

7周齡的雄性無特異性病原體級（ SPF） Wistar大鼠（ 180±10）g，購自南醫(yī)科大學(xué)試驗動物中心，質(zhì)量合格證號：440021000005777），按照SPF級試驗動物常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2藥品與制備

王老吉由仙草、雞蛋花、布渣葉、菊花、金銀花、夏枯草、甘草7味組成，先將中藥泡20 min，頭煎15 min，二煎10 min，將2次煎煮中藥混合，最終減壓濃縮為1.08 g/mL生藥。香薷散由香薷、黃芩、黃連、甘草等組成，其中香薷加8倍量水泡0.5 h，提取揮發(fā)油5h，收集揮發(fā)油備用，蒸餾后的水溶液另器收集。藥渣與其余9味藥材加10倍量水煎煮3次，每次2h，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，減壓濃縮至含量為1.12 g/mL生藥，冷卻后，攪拌下加入吐溫-80與香薷揮發(fā)油的混合液（揮發(fā)油：吐溫-80=1：2），加入0.3%山梨酸鉀，濾過，即得。

1.3試驗分組與處理

80只成年Wistar雄性大鼠，隨機分成4組，每組20只，試驗1、2和3組是熱應(yīng)激組，用室內(nèi)加熱器將溫度保持在35 ～38℃，濕度為50% ～ 70%，試驗4組是適溫組，溫度20 ～26 ℃環(huán)境下飼養(yǎng)。試驗1組在熱應(yīng)激下，每天按7mg/kg·BW灌服王老吉，試驗2組灌服與試驗1組等濃度的香薷散，試驗3組和4組分別熱應(yīng)激下和適溫下灌胃等量生理鹽水，自由飲水、采食，試驗期7d。

1.4樣品采集與保存

在熱應(yīng)激第3h、1d、3d和7d時，每組隨機取5只大鼠，1%戊巴比妥鈉按50 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血4 mL，于- 20℃冰箱保存用于血清皮質(zhì)醇及HSP70濃度和抗氧化指標(biāo)的測定。

1.5數(shù)據(jù)處理

試驗結(jié)果采用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”（

±S.E）表示，用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件one-way ANOVA分析各組間的差異顯著性，通過Duncan's新復(fù)極差檢驗法進行各組間的多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1 大鼠血清皮質(zhì)醇Cor濃度影響

試驗3 h，香薷散組血清Cor濃度顯著高于適溫組（P<0.05）;在熱應(yīng)激1d，王老吉組血清Cor濃度分別顯著和極顯著低于香薷散組（P<0.05）和熱應(yīng)激組（P<0.01），香薷散組血清Cor濃度與熱應(yīng)激組相比極顯著降低（P<0.01），且極顯著高于適溫組（P<0.01）;試驗在熱應(yīng)激3d，各試驗組間血清Cor濃度無顯著差異（P>0.05）;熱應(yīng)激試驗7d，王老吉組血清Cor濃度極顯著低于熱應(yīng)激組（P<0.01）和香薷散組（P<0.01），香薷散組和熱應(yīng)激組血清Cor濃度與適溫組相比均極顯著升高（P<0.01）。表明熱應(yīng)激導(dǎo)致大鼠血清Cor增加，在飲水中添加王老吉和香薷散中藥復(fù)方煎液均能抑制血清Cor的增加，且中藥復(fù)方中王老吉效果優(yōu)于香薷散。見表1。

2.2大鼠血清HSP70濃度影響

試驗在熱應(yīng)激3h，香薷散組血清HSP70含量顯著低于熱應(yīng)激組（P< 0.05），熱應(yīng)激組血清HSP70含量顯著高于適溫組（P< 0.05）;熱應(yīng)激ld和3d，各試驗組血清HSP70含量無顯著差異（P>0.05），但均比熱應(yīng)激3 h各試驗組血清HSP70含量升高;試驗到熱應(yīng)激7d，王老吉組血清HSP70含量顯著低于香薷散組（P<0.05），且香薷散組血清HSP70含量與適溫組相比極顯著升高（P<0.01）。見表2。

2.3 大鼠血清抗氧化指標(biāo)影響

王老吉組T-AOC含量極顯著高于熱應(yīng)激組（P<0.01），適溫組、香薷散組與熱應(yīng)激組比較差異不顯著（P>0.05）;適溫組和王老吉組SOD顯著高于熱應(yīng)激組（P<0.05），香薷散組SOD活性顯著高于熱應(yīng)激組（P<0.01）;MDA含量在各組間差異均不顯著（P>0.05），熱應(yīng)激組MDA含量均比其余3個試驗組MDA含量高。表明在熱應(yīng)激下，大鼠血清抗氧化功能減弱，口服中藥復(fù)方王老吉和香薷散煎液對熱應(yīng)激下機體的抗氧化能力有恢復(fù)作用。見表3。

3討論

3.1 大鼠血清皮質(zhì)醇Cor濃度影響

高溫季節(jié)會導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì)機能亢進，血漿中糖皮質(zhì)激素水平極大提高而使動物機體分解代謝加強，以抵御外界高溫對機體造成的壓力。試驗中熱應(yīng)激組血清皮質(zhì)醇濃度普遍高于適溫組與2中藥組，中藥煎液王老吉和香薷散的添加應(yīng)用均可以降低熱應(yīng)激大鼠血清皮質(zhì)醇濃度，進而增強機體抗熱應(yīng)激能力。王老吉涼茶依據(jù)傳統(tǒng)配方，采用菊花、甘草、仙草、金銀花、夏枯草等7種上等草本材料配制而成，現(xiàn)代科學(xué)研究表明，王老吉涼茶內(nèi)含植物黃酮類等天然成分，具有清熱解毒，預(yù)防上火，提高人體免疫力之功效。運用清熱祛濕化瘀的方法能減輕糖皮質(zhì)激素不良反應(yīng)，中藥復(fù)方煎液中的某些活性物質(zhì)通過降低熱應(yīng)激條件下升高的血漿皮質(zhì)醇含量至正常水平，進而增強機體免疫功能和抗應(yīng)激能力，這與牛國慶等人的結(jié)果報道一致。

3.2大鼠血清HSP70濃度影響

在熱耐受能力形成方面，熱休克蛋白家族群（ HSPs）是可使細(xì)胞非特異性抗損傷能力增強的保護性蛋白狀況下HSPs的合成量增加，其中以HSP-70研究最為豐富。具有發(fā)表祛暑、利濕行水的香薷為常用中藥，多用于暑濕感冒、惡寒發(fā)熱、腹痛、無汗、吐瀉等癥。研究表明香薷散對啤酒酵母菌致熱大鼠的退熱作用，連續(xù)3次給藥，能延長其退熱時間，對發(fā)熱過程的體溫反應(yīng)指數(shù)有明顯的影響。在治療小兒暑熱外感時，在點滴中加入香薷飲，與對照組相比，香薷飲對小兒外感暑熱有顯著治療效果，并且可減少退燒時間。從增加體內(nèi)HSP-70的合成，抵御熱應(yīng)激的損傷。

3.3大鼠血清抗氧化指標(biāo)影響

T-AOC是機體抗氧化能力的整體表現(xiàn)。SOD能清除動物機體在新陳代謝中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，反映動物機體清除自由基的能力。MDA是動物體內(nèi)，自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的氧化最終產(chǎn)物，它的高低反映動物機體受自由基攻擊的損傷程度。在熱應(yīng)激下，大鼠血清抗氧化功能減弱，口服中藥復(fù)方王老吉和香薷散煎液對熱應(yīng)激下機體的抗氧化能力有恢復(fù)作用。香薷散中香薷能夠發(fā)汗解暑，化濕、利水，黃芩能夠清熱瀉火，燥濕解毒，二者含有的黃酮類具有清除能夠清除自由基，抑制脂質(zhì)被過氧化，黃連含有黃連苷，具有能抑制細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活性抑制自由基，降低活性氧，阻斷自由基損傷，進而發(fā)揮抗氧化損傷作用。王老吉中仙草提取物中含有大量的酚類化合物，具有較強的抗氧化、清除活性氧、保護細(xì)胞氧化損傷。雞蛋花、金銀花、布渣葉具有明顯的解熱效果。

4結(jié)論

熱應(yīng)激大鼠飲水中添加王老吉和香薷散中藥復(fù)方煎液均能抑制Cor的增加，且中藥復(fù)方中王老吉效果優(yōu)于香薷散。熱應(yīng)激導(dǎo)致大鼠血清HSP70含量升高，抗氧化功能減弱，王老吉煎液能降低血清HSP70含量。試驗以試驗動物為對象，對王老吉和香薷散抗熱應(yīng)激的藥效學(xué)進行研究，為王老吉和香薷散在畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)上抗熱應(yīng)激方面提供理論依據(jù)。

參考文獻

[1]何蓉蓉，栗原博，寶麗，等.王老吉涼茶對應(yīng)激小鼠免疫機能及體內(nèi)過氧化狀態(tài)的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2008（2）：38-42.

[2]葛冰.石香薷揮發(fā)油提取及其藥效學(xué)研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[3]陳靜，李丹丹，鄒慧，等.富硒女貞子對熱應(yīng)激小鼠內(nèi)分泌及免疫功能的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2015（6）：105-108.

[4]

Gentile N E，Andrekanic J D. Karwoski T E，et al. Sexually diergic hypothalamic-pituitary-adrenal （ HPA） responses to single-dose nicotine. continuous nicotine infusion. and nicotine withdrawal by mecamylamine in rats[J]. Brain Research Bulletin，2011. 85（ 3-4）：145-152.

[5]刁娟娟，潘月麗，襲雷鳴，等.清熱祛濕化瘀法對腎病綜合征患兒血清皮質(zhì)醇和ACTH的影響[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016（1）：46-47.

[6]牛國慶，武果桃，牛琛.中藥沖劑抗蛋雞熱應(yīng)激藥效學(xué)研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015 （1）：28-30.

[7]李琳，徐辰義，楊淑華，等.動物熱應(yīng)激反應(yīng)機制研究進展[J].動物醫(yī)學(xué)進展，2011 （4）：95-98.

[8]蔡莉君.加用中藥直腸點滴治療小兒暑熱外感療效觀察[J].廣西中醫(yī)藥，2011（ 4）：19-20.

[9]楊梅梅，李樺，屈倩，等.復(fù)方藿香煎液對熱應(yīng)激肉雞血液生化指標(biāo)和抗氧化功能的影響[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2015（11）：1201-1205.

[10]甘正偉.香薷黃酮化合物的提取、純化和抗氧化性的研究[D].長沙：中南林業(yè)科技大學(xué)，2012.

[11]郭重儀.黃芩苷對脂質(zhì)過氧化及內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護作用[J].中藥材，2012（2）：288-291.

[12]郭明川，曹艷，劉建文.胡黃連苷Ⅱ在谷氨酸誘導(dǎo)的PCl2細(xì)胞損傷中的保護作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2007（4）：440-443.

[13]Zhou C， Lin H. Ge X. et al. The effects of dietary soybean isoflavones on growth. innate immune responses， hepatic antioxidant abilities and disease resistance ofjuvenile golden pompano trachinotus ovatus[J]. Fish Shellfish Immunol. 2015，43（1）：158-166.

[14]曾聰彥，梅全喜，高玉橋，等.布渣葉水提物解熱退黃作用的實驗研究[J].中國藥房，2010（11）：973-974.

作者簡介：李樺（1990-），女，廣東省佛山人，碩士，獸醫(yī)師，

專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)。

通信作者：石達(dá)友（1977-），華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，郵箱：shidayou@scau.edu.cn。