全自動定氮法測定植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮

摘要：制訂植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮的測定方法對飼料業進行監督、指導、規范非常必要。實驗室測定經驗，制定植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮的測定方法（全自動定氮法），通過研究分析該測定方法的范圍、原理，并從實驗儀器、設備、用試劑的準備過程，與采樣、試樣設備、樣品處理、定氮實施過程及最終的結果計算與精密度分析過程進行詳細介紹，以期為其他地方植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮的測定提供借鑒。

關鍵詞：植物蛋白;飼料;揮發性鹽基氮;全自動定氮法

中圖分類號：S816 文獻標識碼：B doi：10.3969fj.issn.2096-3637.2019.19.011

0 引言

目前我國飼料工業蓬勃發展，飼料產品不斷創新，特別是發酵的植物蛋白飼料原料和含有植物性蛋白飼料原料的飼料產品，憑借易消化吸收、報酬高、使用范圍廣等特點，發展較快。河北省作為養殖和飼料產業大省，是發酵飼料發源地之一，近年更是發展迅猛。

植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮主要是由于發酵中生產條件失當或雜菌生長過多產生，揮發性鹽基氮指在蛋白飼料受到有關酶與細菌的作用，逐漸發生變質腐敗中，原本的蛋白質分解而產生氨以及胺類等堿性含氮物質。該類物質具有加強的揮發性，含量的高低與氨基酸破壞程度呈正比，因此也是檢查原料腐敗變質情況的重要依據。飼料作為養殖業必不可少的的食物來源，直接影響畜產品的質量安全。河北省曾發生過因揮發性鹽基氮含量過高造成飼料企業巨大經濟損失的案例。植物蛋白飼料原料和含有植物性蛋白飼料原料的飼料產品中揮發性鹽基氮的檢驗方法亟待制定。

1 范圍

方法規定了飼料中揮發性鹽基氮測定的原理、儀器和設備、試劑、采樣及試樣制備、樣品準備、滴定、結果計算、準確度和精密度。

方法適用于植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮的測定。

方法檢出限為0.18mg/100g。

2 原理

試樣中的揮發性鹽基氮用高氯酸液浸提，將浸提液調至堿性，蒸餾，用硼酸吸收液吸收，再以鹽酸標準溶液滴定，計算含量。

3 儀器與設備

實驗室用樣品粉碎機或研缽;分樣篩（孔徑0.45mm）;分析天平（感量0.1mg）;電爐;低速離心機;微量酸式滴定管（最小分度值為0.01mL）;錐形瓶（250mL）;容量瓶（50mL）;全自動定氮儀。

4 試劑

除另有規定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規定的三級水。

（1）高氯酸溶液（0.6mol/L），量取高氯酸50mL，加水定容至1000mL。 （2）氫氧化鈉溶液（40g/L），稱取氫氧化鈉40G，加水溶解并稀釋至1000mL。

（3）鹽酸標準溶液[c（HCL）≈0.01mol/L]，吸取濃鹽酸0.85mL，加水定容至1000mL，搖勻，并按照GB/T601的方法進行標定。

（4）硼酸吸收液（10g/L），稱取硼酸10g，溶于1000mL水中。

（5）硅油消泡劑。

（6）混合指示劑，甲基紅0.1%乙醇溶液與溴甲酚綠0.5%乙醇溶液等體積混合，臨用前配置。

（7）甲基紅指示劑（10g/L），稱取甲基紅指示劑1g，溶解于100mL95%乙醇中。

5 采樣及試樣制備

按照GB/T14699.1采樣，按照GB/T20195進行樣品制備，粉碎后過0.45mm孔徑的分析篩，混勻密閉保存，48h內檢測。

6 樣品準備

6.1 樣品處理

稱取試樣約5g（精確至0.1mg）于錐形瓶中，加入高氯酸溶液（5.1）40mL，振搖30min均勻混合，然后將試溶液全部轉移至50mL容量瓶，并用高氯酸溶液（5.1）定容，搖勻;再用50mL的離心管從試樣浸提液中提取約30mL的液體，3500r/min離心5min，最后取上清液在2～6℃的環境中貯存24h后，以備后期實驗測定。

6.2 定氮

采用全自動定氮儀，按方法參數編寫程序進行測定。

7 滴定

用鹽酸標準溶液（4.3）滴定至溶液由藍綠色變為灰紅色為終點。

同時用高氯酸溶液（4.1）10.00mL代替浸提上清液進行空白試驗。

8 結果計算

所得實驗數據按公式（1）計算。

$x=＼frac{（V1-V0）＼timesc＼times14.01}{m＼timesV{‘}/V}＼times 100$…………………………………………………（1）

式中：

x—試樣中揮發性鹽基氮的含量，單位mg/100g;

V1—測定用樣液消耗鹽酸標準溶液體積，單位為mL;

V0—空白時消耗鹽酸標準溶液體積，單位為mL;

c—鹽酸標準溶液的濃度，單位為mol/L;

V—試樣提取液定榮體積，單位為mL;

V’一試樣提取液定榮體積，單位為mL;

14.01一與1.00mL鹽酸標準溶液（4.3）相當于以克表示的氮的質量;

m—試樣質量，單位為g。

9 精密度

9.1 重復性

在重復條件下，獲得的2次獨立測試結果的絕對差值不超過這兩個測定值的算術平均值的10%。

9.2 再現性

在再現條件下，獲得的2次獨立測試結果的絕對差值不超過這2個測定值的算術平均值的15%。

10 參考引用文件

GB/T601（化學試劑標準滴定溶液的制備）;GB/T6682（分析實驗室用水規格和試驗方法）;GB/T14699.1（飼料采樣）;GB/T20195（動物飼料試樣的制備）;GB/T8170-2008（數值修約規則與極限數值的表示和判定）。

11 結束語

做植物蛋白飼料中揮發性鹽基氮的測定非常重要，揮發性鹽基氮含量過高時會造成養殖動物中毒現象。近年，非洲豬瘟、口蹄疫、禽流感時有發生，因此保障飼料的質量安全，進而保證畜牧業的質量安全尤為重要，制訂此方法對飼料業進行監督、指導、規范非常必要。

參考文獻

[1]中農.蠶豆能替代黃豆等豆科植物作為雞的蛋白飼料嗎？[J].農家之友，2018（8）：56.

[2]楊闖，王俊玲，王勝男.生物抗菌肽研究進展及在植物蛋白飼料中的應用[J].產業與科技論壇，2015，14（24）：36，38.

[3]孫志強.蛋白飼料儲存期間品質變化的研究[D].無錫：江南大學，2014.

[4]張吉鹍.功能大豆寡肽蛋白飼料在奶牛生產中的應用研究.中國畜牧獸醫學會、中國農業工程學會.生態環境與畜牧業可持續發展學術研討會暨中國畜牧獸醫學會2012年學術年會和第七屆全國畜牧獸醫青年科技工作者學術研討會會議論文集：T07家畜微生態與健康養殖專題.中國畜牧獸醫學會、中國農業工程學會：中國畜牧獸醫學會，2012：11.

[5]陸敘元，祝天龍，向天勇，顧良根.物理活化玉米秸稈發酵蛋白飼料對乳豬下痢的影響研究[J].湖北畜牧獸醫，2012（4）：11-13.

[6]何霆，梁琳，潘穗華，余衛雄，甘潤基.添加木瓜蛋白酶飼養肉用仔雞的效果觀察[J].廣東畜牧獸醫科技，1992（2）：9-11.

[7]劉銘.用植物飼料取代肉用仔雞的動物蛋白飼料[J].國外畜牧學（飼料），1990（3）：44.

[8]楊闖，王俊玲，王勝男.生物抗菌肽研究進展及在植物蛋白飼料中的應用[J].產業與科技論壇，2015，14（24）：36，38.

[9]李愛科.新型優質發酵及酶解餅粕蛋白飼料資源開發利用現狀與展望[C]//.動物營養研究進展（2012年版）：中國畜牧獸醫學會動物營養學分會，2012：8.

[10]張貞奇.植物蛋白飼料的飼用價值[J].飼料與畜牧，1990（3）：27-28，14.

[11]李思漢.高膳食賴氨酸誘發雞高膽固醇血癥[J].國外醫學（衛生學分冊），1983（6）：371.

作者簡介：段培姿（1980-），女，河北饒陽人，研究生，衡水市農業環境與農畜產品質量監督管理站副站長，主要從事農業環保與農畜產品檢驗監測工作。