山茶黑斑病的生物學(xué)特性研究及毒力測定

湯宗斌

摘要 ?通過對合肥市植物園、各公園、苗圃山茶病害進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)山茶黑斑病發(fā)病嚴(yán)重。為了解和掌握山茶黑斑病病原物的生物學(xué)特性，研究了不同營養(yǎng)、溫度、pH及光照條件對山茶黑斑病菌菌落生長量的影響。結(jié)果表明，病菌菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長最快，最適pH為6.0，最適溫度為25℃，不同光照條件對該病菌生長影響不大。藥劑的毒力測定結(jié)果表明43%戊唑醇懸浮劑的抑菌效果最好，其次為35%戊唑·福美雙懸浮劑，50%多菌靈超微可濕性粉劑的抑菌效果最差。

關(guān)鍵詞 黑斑病;病原鑒定;生物學(xué)特性;毒力測定

中圖分類號：S436.8 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：2095-3305（2019）02-005-03

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.02.003

Abstract By investigating the diseases of Camellia japonica in Hefei Botanical Garden and other parks and nurseries， it was found that the black spot of Camellia japonica was serious. In order to understand and master the biological characteristics of the pathogen of camellia black spot， the effects of different nutrition， temperature， pH and illumination conditions on the growth of bacterial colonies of camellia black spot were studied. The results showed that the mycelium grew fastest on PDA medium， the optimum pH was 6.0， and the optimum temperature was 25℃. Different light conditions had little effect on the growth of the fungus of camellia black spot. The results of toxicity test showed that 43% tebuconazole suspension had the best bacteriostasis effect， followed by 35% tebuconazole·formaldehyde suspension， and 50% carbendazim ultramicro wettable powder had the worst bacteriostasis effect.

Key words ? Black spot; Pathogen identification; Biological characteristics; Toxicity determination

山茶（Camellia japonica）又名茶花，為常綠闊葉灌木，葉色亮綠，樹冠優(yōu)美，花姿豐盈，花大色艷，花期長，是園林綠化常用植物，目前在安徽合肥市也有廣泛種植。2016年春季筆者對合肥市植物園、各大公園、苗圃進(jìn)行植物病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山茶葉斑病發(fā)生較嚴(yán)重，引起早落葉、落蕾和落花，甚至導(dǎo)致枝條枯死，造成植株生長不良、樹勢衰落，嚴(yán)重降低其觀賞價值及綠化效果。經(jīng)室內(nèi)顯微鑒定，引起葉斑病的病原為葉枯鏈格孢[Alternaria alternate （Fr.：Fr.） Keissler]、山茶炭疽孢菌（Colletotrichum camelliae Mass）、茶擬盤多毛孢[Pestalotiopsis theae （Sawada） Stey]和山茶藻斑病 （Cephaleuros virescens Kunze）等，其中以葉枯鏈格孢引起的黑斑病發(fā)病最為嚴(yán)重、普遍。為此，筆者對山茶黑斑病菌的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，同時對3種殺菌劑毒力進(jìn)行了解測定，以期通過環(huán)境條件控制病害發(fā)生的途徑，并篩選防治該病害的高效藥劑，為該病害的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試病原菌 山茶黑斑病菌葉枯鏈格孢（A. alternate）分離自合肥市逍遙津公園山茶上采取的新鮮病葉，經(jīng)室內(nèi)組織分離、純化，獲得純菌株。病原菌于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后，用于后續(xù)試驗研究。

1.1.2 供試藥劑 35%戊唑·福美雙懸浮劑（南京南農(nóng)農(nóng)藥科技發(fā)展有限公司），50%多菌靈超微可濕性粉劑（四川國光農(nóng)化股份有限公司），43%戊唑醇懸浮劑（青島奧迪斯生物科技有限公司）。

1.2 生物學(xué)特性研究

1.2.1 不同培養(yǎng)基對菌落生長的影響 將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種于20%山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基、PDA和OA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)，6 d后測量菌落直徑。

1.2.2 不同溫度對菌落生長的影響 將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種于PDA平板中央，然后分別在5、10、15、20、25、30、35、40℃恒溫培養(yǎng)，6 d后測量菌落直徑。

1.2.3 不同pH對菌落生長的影響 用稀HCl和NaOH溶液制成pH分別為3、4、5、6、7、8、9的PDA平板，將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種其平板中央，并于25℃恒溫培養(yǎng)，6 d后測量菌落直徑。

1.2.4 不同光照對菌絲生長的影響 將直徑5 mm的病菌菌絲塊接種于PDA平板中央，置于全光照、全黑、自然光3個光照處理下，于25℃恒溫培養(yǎng)，6 d后測量菌落直徑。

1.3 藥劑毒力測定

采用生長速率法測定藥劑毒力。將供試藥劑用滅菌水配制成母液后，按比例配制每種藥劑的7個濃度梯度PDA平板，并以不添加藥液的PDA平板為空白對照。于25℃恒溫箱中培養(yǎng)6 d，測量菌落直徑，計算抑制率，以藥劑有效成分的濃度為測試濃度計算回歸方程和抑制中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀、病原及病原菌培養(yǎng)性狀觀察

山茶黑斑病多始于葉緣或葉尖，初期病斑為褐色，后向內(nèi)擴(kuò)展成不規(guī)則黑褐色大病斑，病斑邊緣深褐色，常造成半葉至全葉枯死，后期病斑呈灰白色，且病斑上可見成簇或散生的黑色霉層（圖1a）。根據(jù)顯微檢查，引起山茶葉斑病的病原為半知菌亞門絲孢目鏈格孢屬真菌——葉枯鏈格孢（A. alternate）。

在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)初期，菌落圓形，白色，隨著菌落生長，菌落出現(xiàn)不明顯的同心輪紋，中間大部分為淺灰黑色，邊緣白色（圖1b）。分生孢子梗淡褐色，分生孢子橢圓形、卵形，淡褐色，有喙，具縱橫隔膜（圖1c）。

2.2 不同培養(yǎng)基對病菌生長速率的影響

山茶黑斑病菌在20%山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基、PDA和OA培養(yǎng)基上均能生長，但在PDA培養(yǎng)基上生長最快，培養(yǎng)6 d后菌落直徑達(dá)8.2 cm，其次為OA培養(yǎng)基，培養(yǎng)6 d后菌落直徑為7.8 cm，而在山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基上菌落生長速度最慢，培養(yǎng)6 d菌落直徑6.1 cm，這表明該病菌生長需大量碳源，是一種兼性腐生菌。

2.3 不同溫度對菌絲生長的影響

山茶黑斑病菌在溫度為5～35℃時均能生長，其中在25℃時菌落生長最快，當(dāng)溫度大于30℃，菌絲生長趨勢明顯下降，溫度達(dá)40℃時菌落不能生長，甚至菌絲出現(xiàn)衰亡現(xiàn)象（圖2）。

2.4 不同pH對菌絲生長的影響

山茶黑斑病菌對酸堿度的適應(yīng)范圍比較廣，pH 3～9均可生長，在pH 5～7時生長最快，在第6 d時，pH 6菌落直徑達(dá)8.57 cm（表1）。pH過高或過低時，菌落生長速度均較慢，表明病原菌喜中性偏酸的環(huán)境，過酸或過堿的環(huán)境均不適于該病菌生長。

2.5 不同光照對菌絲生長的影響

山茶黑斑病菌在全光、全黑或光暗交替處理下菌落生長速度大體一致，培養(yǎng)6 d后菌落直徑分別為8.45、8.23、8.13 cm，表明光照對菌落生長影響不大。

2.6 室內(nèi)抑菌效果測定

3種殺菌劑對山茶黑斑病菌的毒力存在明顯差異，其中以43%戊唑醇懸浮劑毒力最高，其EC50為0.009 μg/ml，其次為35%戊唑·福美雙懸浮劑， 50%多菌靈超微可濕性粉劑毒力最低，EC50為0.723 μg/ml（表2）。

3 結(jié)論與討論

通過癥狀觀察、顯微鑒定，明確了山茶黑斑病在葉片上的危害癥狀，這為生產(chǎn)上直接診斷提供了參考依據(jù)。山茶黑斑病菌在20%山茶葉片煎汁瓊脂培養(yǎng)基、PDA和OA培養(yǎng)基上均能生長，其中以碳源最豐富的PDA培養(yǎng)基最適宜菌落生長，病菌生長所需養(yǎng)分以碳源為主，病菌可能為兼性寄生菌。該菌在5～35℃、pH 3～9均可生長，尤其適宜25～30℃和pH 6的酸性環(huán)境，菌絲的致死溫度為40℃，菌落生長對光照的要求不嚴(yán)格。

戊唑醇是一種高效、廣譜、內(nèi)吸性殺菌劑，兼具保護(hù)、治療、鏟除功能，具有藥效強(qiáng)、植物吸收快、持續(xù)時間長等優(yōu)點，已在農(nóng)業(yè)和果蔬生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。目前，植物病原菌對傳統(tǒng)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性已多有報道，因此在園林植物病害防治過程中，應(yīng)控制傳統(tǒng)農(nóng)藥的使用次數(shù)和使用量。當(dāng)前新農(nóng)藥層出不窮，這為生產(chǎn)中農(nóng)藥的使用提供了更多選擇。該文通過與傳統(tǒng)殺菌劑多菌靈毒力測定的比較，發(fā)現(xiàn)戊唑醇和戊唑·福美雙室內(nèi)殺菌效果更好，說明新藥劑在生產(chǎn)中有廣闊的應(yīng)用前景。為了加快新農(nóng)藥在園林植物生產(chǎn)和養(yǎng)護(hù)上的使用和推廣，今后應(yīng)對園林植物病害進(jìn)行新藥劑室內(nèi)、林間使用試驗研究。

山茶系半陰性樹種，喜半陰、忌烈日，在土層深厚、有機(jī)質(zhì)豐富的疏陰濕潤地或溝谷兩側(cè)生長良好。因此，在園林植物搭配中，要注意山茶有一定的遮陽效果。施用有機(jī)肥改善土壤環(huán)境，合理修剪，通風(fēng)透光良好，提高樹勢，結(jié)合使用各種高效、環(huán)保藥劑，可有效控制山茶各類病害的發(fā)生。

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責(zé)任編輯：鄭丹丹